Evaluacion de los desinfectantes utilizados en el proceso de
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EVALUACIÓN DE LOS DESINFECTANTES UTILIZADOS EN EL PROCESO DE LIMPIEZA Y DESINFECCIÓN DEL ÁREA DE FITOTERAPEUTICOS EN LABORATORIOS PRONABELL LTDA. NATHALIA ELVIRA ALBA TORRES FANNY LUCIA ARAUJO ESTRADA TRABAJO DE GRADO Presentado como requisito parcial Para obtener el título de MICROBIÓLOGA INDUSTRIAL PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA FACULTAD DE CIENCIAS MICROBIOLOGÍA INDUSTRIAL BOGOTÁ, DICIEMBRE 2008. EVALUACIÓN DE LOS DESINFECTANTES UTILIZADOS EN EL PROCESO DE LIMPIEZA Y DESINFECCIÓN DEL ÁREA DE FITOTERAPEUTICOS EN LABORATORIOS PRONABELL LTDA. NATHALIA ELVIRA ALBA TORRES FANNY LUCIA ARAUJO ESTRADA APROBADO _______________________ ____________________ Zulma Valbuena Jimenéz Mauricio Henao Florez Bacterióloga Ing. Químico Directora Codirector ______________________ 2 _______________________ Nadenka Melo Cindy Marlene Fernandez Jurado 1 Jurado 2 EVALUACIÓN DE LOS DESINFECTANTES UTILIZADOS EN EL PROCESO DE LIMPIEZA Y DESINFECCIÓN DEL ÁREA DE FITOTERAPEUTICOS EN LABORATORIOS PRONABELL LTDA. NATHALIA ELVIRA ALBA TORRES FANNY LUCIA ARAUJO ESTRADA APROBADO __________________ __________________ Ingrid Schuler Janeth Arias Bióloga Bacterióloga MSc Decana Académica Directora de Carrera 3 DEDICATORIA Le doy gracias a Dios por haberme permitido culminar con éxito mi trabajo de grado. A mis padres por estar siempre conmigo en este camino, por su lucha y esfuerzo, por hacer de mi una mejor persona y por su paciencia ante las adversidades que se me presentaron en este camino... Gracias por confiar en mi!!!. A mi Tia Elvira, por ser mi segunda madre y porque también gracias a ella hoy culmino una de las mejores etapas de mi vida, GRACIAS!!! A mis hermanos por apoyarme en todo momento, a mis compañeros y amigos de estúdio. Gracias a todos por rodearme de cariño y poder brindarles hoy con orgullo este título tan anhelado. Nathalia E. Alba Torres. A Dios por haberme permitido cumplir esta meta, por haberme dado la salud, además de su infinita bondad y amor. A mis padres Por haberme educado y soportar mis errores. Gracias por sus consejos, por el amor que siempre me han brindado, por cultivar e inculcar ese sabio don de la responsabilidad. Fanny L. Araújo Estrada. 4 AGRADECIMIENTOS A “LABORATORIOS PRONABELL LTDA”. Por permitirnos realizar nuestro trabajo de grado en sus instalaciones y su apoyo con los materiales utilizados para el desarrollo de este trabajo. A La Doctora Zulma Valbuena por su colaboración y guia ante el desarrollo de este trabajo. Al Ing. Mauricio Florez por su colaboración dentro de las instalaciones del laboratorio. A Carolina Santana por su colaboración con nuestro trabajo de Grado. A La doctora Janeth Arias por que gracias a sus enseñanzas, tuvimos las bases académicas para realizar este trabajo con éxito. 5 RESÚMEN Considerando la importancia de los procedimientos de limpieza y desinfección en la Industria farmacéutica, este trabajo tiene como objeto evaluar la efectividad de los desinfectantes clorados (SUMA SOL), anfóteros (TEGO 51 y SANITIZER) y alcohol etílico al 70% empleados en el proceso de limpieza y desinfección de áreas y equipos utilizados para la fabricación de fitoterapéuticos en LABORATORIOS PRONABELL LTDA. Como etapa previa, se evaluó la efectividad de los desinfectantes, la cual se determinó por medio de la técnica del coeficiente fenólico. Se evaluaron diferentes concentraciones de cada uno de los desinfectantes en 5, 10 y 15 minutos. Los resultados obtenidos, indicaron que la concentraciones utilizadas, son capaces de eliminar los microorganismos en estudio Salmonella thyphi, Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa. Por otro lado, se evaluó la carga microbiana presente en cada uno las áreas y equipos de fabricación por medio de las técnicas de sedimentación e hisopado. El análisis microbiológico del aire, consistió en un recuento en placa de mohos y levaduras en agar Saboraud 4% y en un recuento en placa de microorganismos aerobios mesófilos en agar Tripticasa Soya, encontrándose incidencia de cocos Gram positivos, Bacilos Gram positivos, levaduras y hongos filamentosos. Los recuentos iníciales obtenidos de las superficies, indicaron que se encuentran dentro de los límites establecidos. Luego de realizar los procedimientos de desinfección correspondientes, se evaluó su acción a diferentes tiempos. Comparando los resultados obtenidos en la fase previa versus los resultados alcanzados una vez finalizada la evaluación, se observó claramente una drástica reducción en los márgenes de carga microbiana presente en los distintos equipos, logrando alcanzar valores muy por debajo de los niveles establecidos como límite. Palabras claves: Desinfectante, eficacia, TEGO 51, ETANOL 70%, SUMA-SOL y SANITIZER. 6 ABSTRACT Considering the importance of cleaning and disinfection procedures in the pharmaceutical industry, this work is to evaluate the effectiveness of chlorine disinfectants (SUMA-SOL) amphoteric (TEGO 51 and SANITIZER) and ETHYLIC ALCOHOL at 70%, used in the process of cleaning and disinfection of areas and equipment used to manufacture phytotherapeutic in PRONABELL LABORATORIES. As a preliminary stage, assessed the effectiveness of disinfectants, which was determined by the technique of phenolic coefficient. Different concentrations of the disinfectants was evaluated, the times of evaluated exhibitions to the disinfectants were 5, 10 y 15 minutes. The results showed that the concentrations used, are able to eliminate microorganisms in study (Salmonella thyphi, Staphylococcus aureus and Pseudomonas aeruginosa). On the other hand, assessed the microbial load present in each area and manufacturing equipment through the techniques of sedimentation and swabs. The microbiological analysis of air consisted of a plate count of molds and yeasts in agar Saboraud 4% and in a plate count of mesophiles in trypticase soy agar, while incidence of Gram positive cocci, gram positive rods, yeasts and fungi stringy. The initial counts from the areas indicated that within the limits set. After performing the procedures for disinfection, his action was assessed at different times. Comparing the results obtained in preliminary stage, versus the results achieved once the evaluation, presented clearly a drastic reduction in the margins of microbial load in the various devices, making reaching values far below the levels set as a limit. Key words: disinfectants, effectiveness, TEGO 51, SUMA-SOL, ETHYLIC ALCOHOL at 70%, and SANITIZER. 7 TABLA DE CONTENIDO 1. INTRODUCCIÓN………………………………………………...………………...…….15 2. MARCO TEÓRICO………………………………………………………………….........17 2.1 Limpieza y desinfección en la industria...………...…...………………………………17 2.1.1 Características de un desinfectante ideal…………………………………………17 2.1.2. Análisis teórico de la actividad de los desinfectante…………………………….19 2.1.2.1. Agentes químicos que inhiben el crecimiento microbiano……………….….…21 2.1.2.2. Tipos de agentes químicos antimicrobianos………………………………...….21 2.1.3 Mecanismos de acción de los antisépticos y desinfectantes……………………...23 2.1.3.1 Resistencia intrínseca de las bacterias Gram positivas…………………………24 2.1.3.2 Resistencia intrínseca de las bacterias Gram negativas………………………...24 2.1.3.3 Resistencia intrínseca de hongos……………………………………………….24 2.1.3.4 Mecanismo de la actividad del desinfectante……………...……..….…………....25 2.1.4 Tipos de desinfectantes a evaluar………………..…….…………………….…...26 2.1.4.1. Alcoholes………….……………...…………………………………….……..26 2.1.4.2 Compuestos de Cloro……..………………………………………….…...………26 2.1.4.3 Compuestos de amonio cuaternario….…...…...……………….............................27 2.1.4.4 Compuestos anfóteros…………………………………………………………….28 2.1.4.5 Compuestos fenólicos ……………………………………………………………29 2.2 Desinfectantes utilizados en Laboratorios Pronabell Ltda. …………......……….……..29 2.2.1 Desinfectantes para equipos…………………………...………………………...…29 2.2.1.1 TEGO 51……………………………………………….………………………...29 2.2.1.2 Alcohol 70%.………………………………………………….…………...….....30 2.2.2 Desinfectantes para áreas……………………………………………………..…....31 2.2.2.1. SANITIZER…………….………..…………………………………...………31 2.2.2.2. SUMASOL……………………………………………..……………………….32 2.3 Técnicas para evaluar desinfectantes…………………….………………………….….34 2.3.1 Coeficiente fenólico………………………………………………………......…....34 2.3.1.1 Recuento en placa……………………….………..……………………………...34 2.3.1.2 Medición de la actividad microbiana………...…………………………………..35 2.3.1.3 Dilución en tubo……………….……………………………………………...35 2.4 Metodologías de muestreo…………………………………………………………...36 8 2.4.1 Sedimentación en placa………………………………………………………….. 36 2.4.1.1 Hisopado…………………………………………………………………………36 2.5. LABORATORIOS PRONABELL LTDA……………………………………………37 2.5.1 Descripción de equipos área fitoterapéuticos.….………………………………....37 3. Formulación del problema y Justificación……………………….……………………..42 4. Objetivos…………………………………………………………………………………..44 5. Materiales y métodos……………………………………………………………………...45 5.1. Diseño de la investigación……………………………………………………………....45 5.1.1. Población de estudio y muestra………………………………………………….45 5.1.1.1. Materiales……………………………………………………………………….45 5.1.1.2. Equipos………………………………………………………………………....46 5.1.1.3. Medios de Cultivo y Reactivos………………………………………………..46 5.1.1.4. Cepas estándar…………………………………………………………….……47 5.1.2 Ubicación……………………………………………...……….……………..…....47 5.2 Ensayos de evaluación……………………….………………………………….……47 5.2.1. Coeficiente fenólico….…………………………………………………………..47 5.2.1.1 Muestreo del área de Fitoterapéuticos……………………………………………..48 5.2.1.2 Puntos de muestreo y toma de muestras……………………………………………48 5.3 Procedimiento de muestreo………………………………………………………………49 5.4 Identificación de microorganismos………………………………………………………51 5.5 Estadística de Datos……………………………………………………………………...51 6. Resultados y Discusión……………………………………………………………………52 6.1 Coeficiente fenólico….………………………………………………………………......52 6.2 Estimación de la carga inicial……………………………………………………………57 6.3 Evaluación de los desinfectantes TEGO 51 y ETANOL 70% en equipos………………59 6.4 Evaluación de los desinfectantes TEGO 51 y ETANOL 70% en áreas de producción….65 6.5 Análisis Estadístico de Resultados……………………………………………………….71 7. CONCLUSIONES…………………………………………………………………….......72 8. RECOMENDACIONES…………………………………………………………………..73 9. BIBLIOGRAFÍA…………………………………………………………………………..74 9 INDICE DE TABLAS Tabla 1. Exponentes de Concentración de Antisépticos, Desinfectantes y Esterilizantes Comunes…………………………………………………………………………………20 Tabla 2. Desinfectantes y antisépticos más comunes……...……………………………22 Tabla 3. Mecanismo de la actividad de los desinfectantes contra células microbianas...25 Tabla 4. Características físico-químicas Tego 51............................................................30 Tabla 5. Características físico-químicas SUMASOL.......................................................33 Tabla 6. Promedios de las ufc/ 45 min de cada área muestreada……………………….58 Tabla 7. Recuento Mésofilos (ufc/cm2)………………………...……………………….61 Tabla 8. Recuento Hongos y Levaduras (ufc/cm2)…...………………………………....61 Tabla 9. Superficie Analizada Piso……………………………………………………...65 Tabla 10. Superficie Analizada Pared…………………………………………………..66 Tabla 11. Superficie Analizada Techo..…………………………………………………66 10 INDICE DE DIAGRAMAS Diagrama 1. Evaluación de los desinfectantes por la técnica del coeficiente fenólico……...…………………………………………………………….................48 Diagrama 2. Metodología de toma de muestras de ambientes y superficies en el área de Fitoterapéuticos………………………………………………………………...…50 11 INDICE DE GRÁFICAS Gráfica 1. Incidencia de Organismos presentes en las áreas del laboratorio….........59 Gráfica 2. Actividad del TEGO 51 y ETANOL 70% en Mesófilos a través del tiempo………………………………………………………………………………..63 Gráfica 3. Actividad del TEGO 51 y ETANOL 70% en Hongos y Levaduras a través del tiempo..……………………………………………………………………63 Gráfica 4. Evaluación de los desinfectantes SUMASOL y SANITIZER en superficies (Piso)…………………………………………………………………….68 Gráfica 5. Evaluación de los desinfectantes SUMASOL y SANITIZER en superficies (Pared)…………...………………………………………………………69 Gráfica 6. Evaluación de los desinfectantes SUMASOL y SANITIZER en superficies (Techo)…………..………………………………………………………70 12 INDICE DE ANEXOS Anexo 1. Fotografía de Penicillium s.p y Rhizopus s.p…………….………………..76 Anexo 2. Fotografía Técnica del Coeficiente Fenólico….…………………………..76 Anexo 3. Tabla de Límites de Partículas según Federal Standard 209 E….………..77 Anexo 4. Tabla de Análisis de Varianza………………….…………………………78 Anexo 5. Tabla de Recuentos de sedimentación en el equipo MARMIT300……….79 Anexo 6. Tabla de Recuentos de sedimentación en el equipo Mezclador….……….80 Anexo 7. Tabla de Recuentos de sedimentación en el equipo Tableteadora………..81 Anexo 8. Tabla de Recuentos de sedimentación en el equipo Envasadora de Polvos…………………………………………………………………………...…...82 Anexo 9. Tabla de Recuentos de sedimentación en el equipo Envasadora de Líquidos………………………………………………………………………...…....83 Anexo 10. Tabla de Recuentos de sedimentación en el equipo Tanque de Almacenamiento………………………………………………………………..…....84 Anexo 11. Tabla de Recuentos de sedimentación en el equipo Envasadora de Tabletas……………………………………………………………………………....85 Anexo 12. Tabla de Recuentos de Hisopado en el equipo MARMITA 300 con TEGO 51 y ETANOL 70%.....................................................................................................86 Anexo 13. Tabla de Recuentos de Hisopado en el equipo Mezclador V con TEGO 51 y ETANOL 70%..............................................................................................................................86 Anexo 14. Tabla de Recuentos de Hisopado en el equipo Tanque de fabricación con TEGO 51 y ETANOL 70%..............................................................................................................................87 Anexo 15. Tabla de Recuentos de Hisopado en el equipo Tableteadora con TEGO 51 y ETANOL 70%..............................................................................................................................87 Anexo 16. Tabla de Recuentos de Hisopado en el equipo Envasadora de tabletas con TEGO 51 y ETANOL 70%.........................................................................................88 13 Anexo 17. Tabla de Recuentos de Hisopado en el equipo Envasadora de polvos con TEGO 51 y ETANOL 70%.........................................................................................88 Anexo 18. Tabla de Recuentos de Hisopado en el equipo Envasadora de líquidos con TEGO 51 y ETANOL 70%.........................................................................................89 Anexo 19. Tabla de Recuentos de Hisopado para pisos, paredes y techos con SUMASOL y SANITIZER en el equipo MARMITA 300……………….………….90 Anexo 20. Tabla de Recuentos de Hisopado para pisos, paredes y techos con SUMASOL y SANITIZER en el equipo Mezclador V……………………….……..91 Anexo 21. Tabla de Recuentos de Hisopado para pisos, paredes y techos con SUMASOL y SANITIZER en el equipo Tanque de fabricación…………………....92 Anexo 22. Tabla de Recuentos de Hisopado para pisos, paredes y techos con SUMASOL y SANITIZER en el equipo Envasadora de líquidos……………….…..93 Anexo 23. Tabla de Recuentos de Hisopado para pisos, paredes y techos con SUMASOL y SANITIZER en el equipo Tableteadora………………………….…..94 Anexo 24. Tabla de Recuentos de Hisopado para pisos, paredes y techos con SUMASOL y SANITIZER en el equipo Envasadora de Tabletas……………….….96 Anexo 25. Tabla de Recuentos de Hisopado para pisos, paredes y techos con SUMASOL y SANITIZER en el equipo Envasadora de Polvos……………….……97 Anexo 26. Tabla de Recuentos de Hisopado para pisos, paredes y techos con SUMASOL y SANITIZER en el equipo de Pesaje……………………………….…98 14 1. INTRODUCCIÓN La industria farmacéutica cuenta con una serie de documentos que contienen directrices tendientes a garantizar la obtención de productos de calidad. Muchas no son obligatorias, sin embargo, las Buenas Prácticas de Manufactura (BPM) referencian múltiples consideraciones respecto al tema de la limpieza y desinfección de áreas y equipos, como parte íntegra del sistema de aseguramiento de calidad. Los productos farmacéuticos y sus ingredientes activos pueden ser contaminados por los agentes de limpieza, por microorganismos u otros materiales como lubricantes, partículas de aire, materias primas, sustancias intermediarias y auxiliares. En muchos casos, el mismo equipo puede ser usado para la elaboración de diferentes productos subsecuentes; es esencial entonces, no solo un buen procedimiento de limpieza, sino también una adecuada evaluación de limpieza y desinfección. Con mucha frecuencia, se desarrollan complejos estudios sobre tecnología química, microbiología y, demás ciencias aplicadas a la industria, sobre todo en lo referente a métodos y sistemas de producción, así como de la ingeniería y máquinas que facilitan el proceso, dejando de lado la necesidad de promover estudios para demostrar la eficacia de los procedimientos usados a fin de conseguir el control sobre instalaciones, equipos, ambientes y todos los elementos que intervienen en un proceso de producción como condición importante para la obtención de la calidad intrínseca del producto. Laboratorios Pronabell Ltda. es una empresa productora de alimentos, cosméticos y fitoterapéuticos, siendo estos últimos de principal interés, ya que para la industria farmacéutica hoy en día, las plantas medicinales son una fuente de nuevas moléculas con efectos farmacológicos, que son utilizables directamente y que permiten obtener productos farmacéuticos con menores efectos secundarios y satisfacer nuevos hábitos del consumidor, que se orienta en forma creciente al consumo de estos productos. 15 De acuerdo a lo anterior, debe aplicarse un concepto de calidad integral siguiendo el flujo de fabricación de acuerdo a lo establecido por las normas en las Buenas Prácticas de Manufactura (BPM). Considerando la importancia de los procedimientos de limpieza y desinfección dentro de este tipo de industria, este trabajo tiene como objeto evaluar la efectividad de los desinfectantes clorados (SUMA SOL), anfóteros (TEGO 51 y SANITIZER) y alcohol etílico al 70% empleados en el proceso de limpieza y desinfección de áreas y equipos utilizados para la fabricación de fitoterapéuticos en LABORATORIOS PRONABELL LTDA, por medio de la evaluación de la actividad biocida de los mismos. Como etapa previa, es necesario realizar el monitoreo cualitativo y cuantitativo de los microorganismos presentes en cada uno de los puntos críticos de muestreo, los cuales serán determinados previamente, para estipular las condiciones presentes frente a las óptimas, buscando emprender acciones de acuerdo con los resultados obtenidos, determinando el tiempo de contacto requerido para lograr el efecto deseado Así mismo, a partir de la técnica de coeficiente fenólico se encontró que las concentraciones de los desinfectantes establecidas en los POEs, cumplan a cabalidad con lo estipulado por el fabricante, con respecto a la inhibición o eliminación de los microorganismos. Finalmente, con el desarrollo de este trabajo se pretende relevar la importancia de los procesos de desinfección en el contexto del cumplimiento de Buenas Prácticas de Manufactura (BPM), nutriendo paralelamente el componente documental, generando así confianza en los procesos y seguridad en los productos que demanda el consumidor. 16 2. MARCO TEORICO 2.1 Limpieza y Desinfección en la Industria El objetivo de los procedimientos de limpieza y desinfección en una industria es eliminar o disminuir la carga microbiana presente en los equipos, superficies y ambientes en donde son llevados a cabo los diferentes procesos de elaboración. La eliminación o disminución está determinada por factores como: la naturaleza de las superficies que entran en contacto con los productos que se procesan y la remoción por acción mecánica de los restos de materias primas incrustadas o adheridas a superficies y equipos. Para lograr una buena limpieza y desinfección en las instalaciones es necesario conocer las posibles formas de contaminación para que de esta manera se pueda implementar un sistema de control y prevención adecuado. Un descuido en la limpieza tiene como consecuencia la proliferación de microorganismos y/o presencia de partículas. Los principales factores de contaminación son el personal, el aire y los elementos e instalaciones utilizados durante el proceso de elaboración. (Seminario FMC, 2007). La desinfección es un proceso selectivo que se ha empleado para destruir o inactivar a los organismos patógenos, especialmente las bacterias de origen entérico. La desinfección efectiva requiere control y monitoreo en todas las etapas del proceso. Hoy en día existen una gran variedad de productos tóxicos para matar a los microorganismos y controlar su desarrollo. Se busca que éstos sean lo más tóxicos para los microorganismos pero con efectos nocivos mínimos para el hombre, los animales y las plantas. (Martínez .J. 2005) 2.1.1. Características de un desinfectante ideal Actividad antimicrobiana: Debe ser capaz de matar a los microorganismos. A baja concentración debe tener un amplio espectro de actividad antimicrobiana. 17 Solubilidad: Debe ser soluble en agua u otros solventes, en la proporción necesaria, para su uso efectivo. Estabilidad: Durante el almacenamiento los cambios en sus propiedades deben ser mínimos y no deben causar una pérdida significativa de su acción germicida. Homogeneidad: La preparación debe ser uniforme en composición, de manera que los ingredientes activos estén presentes en cada aplicación. Toxicidad: No debe ser tóxico para el hombre ni los animales. Debe ser tóxico para los microorganismos a la temperatura ambiente, para que al usar el agente no sea necesario elevar la temperatura más allá de la que se encuentra normalmente en el lugar donde se va a utilizar. Capacidad para penetrar: Esto no es necesario si se requiere sólo una acción superficial. Capacidad desodorante: Desodorizar mientras desinfecta es una propiedad deseable. Idealmente el desinfectante debe ser inodoro o tener un olor agradable. Capacidad detergente: Un desinfectante que sea a la vez detergente cumple 2 objetivos: limpieza y desinfección: la acción limpiadora mejora la efectividad del desinfectante. Disponibilidad: Debe estar disponible en grandes cantidades a un precio razonable. No se debe combinar con materiales orgánicos extraños. No debe ser corrosivo, ni teñir el material que se trate. Actuar en un tiempo relativamente corto No existe definitivamente un desinfectante con la virtud de actuar a plenitud cuando es usado en presencia de materia orgánica. Esto sugiere que una desinfección eficaz estará precedida de una serie de precauciones preliminares a la aplicación del desinfectante elegido que busca obtener el mayor provecho. (www.academia.cat/societats/famcl/libre/higiene/332.pdf 18 2.1.2. Análisis teórico de la actividad de los desinfectantes Las gráficas del logaritmo del número de microorganismos por ml que sobreviven en una solución de desinfectante indican que se puede aplicar una cinética de primer orden como una aproximación bruta a la reducción del recuento microbiano en relación al tiempo. En la práctica, las gráficas muestran una curva más sigmoidea con una reducción inicial de los números más lenta, incrementándose luego la velocidad en relación al tiempo. La constante de velocidad, K, para el proceso de desinfección se puede calcular mediante la fórmula: (1 / t) (log No / N) En donde t es el tiempo en minutos, necesario para reducir el recuento microbiano de No a N; No es el número inicial de organismos, en ufc por ml; y N es el número final, en ufc por ml, de organismos. Tal como ocurre con una relación química de primer orden, la misma concentración de desinfectante reduce el número de organismos en forma más rápida a y temperaturas elevadas. El impacto de la temperatura, T, puede expresarse a través del Q10 coeficiente por cada 10° de aumento en la temperatura, calculado por la fórmula: Tiempo para descontaminación a T° / Tiempo para descontaminación a T en donde T es T° - 10. Para emplear los desinfectantes de forma satisfactoria, es crucial entender el efecto de la concentración en la reducción microbiana. Un gráfico del logarítmo del tiempo para reducir a cero la población microbiana de un inóculo estándar en función del logaritmo de la concentración del desinfectante es una línea recta cuta pendiente se denomina exponente de la concentración, n. siguiente modo: 19 La relación se puede expresar del n = (log del tiempo de muerte a la concentración C2) - (log del tiempo de muerte a la concentración C1) / (log C1 - log C2) En donde C1 y C2 son las concentraciones más alta y más baja del desinfectante, respectivamente (USP, 2008). Las amplias diferencias en los exponentes de concentración, n, tienen consecuencias prácticas en la selección de la dilución de uso de los distintos desinfectantes, en el uso de la dilución para neutralizar un desinfectante en la prueba de eficacia de desinfectantes y el control microbiano de rutina del entorno de fabricación. Por ejemplo, el cloruro mercúrico tiene un exponente de concentración de 1, por lo que la dilución al tercio reducirá la actividad del desinfectante de 31 (o un tercio), mientras que el fenol con un exponente de concentración de 6 presentará una reducción de la actividad del desinfectante de 36 (o una reducción de 729 veces). Los desinfectantes con exponentes de concentración o coeficientes de dilución mayores pierden rápidamente actividad al diluirlos. En la Tabla 1 se listan los exponentes de concentración de algunos desinfectantes. (USP, 2008) Tabla 1. Exponentes de Concentración de Antisépticos, Desinfectantes y Esterilizantes Comunes. Desinfectante Exponentes de Concentración Peróxido de hidrógeno 0.5 Hipoclorito de sodio 0.5 Cloruro mercúrico 1 Clorhexidina 2 Formaldehído 1 Alcohol 9 Fenol 6 Compuestos de amonio cuaternario 20 de 0.8 a 2.5 2.1.2.1. Agentes químicos que inhiben el crecimiento microbiano Los agentes químicos son compuestos que matan o inhiben el crecimiento de los microorganismos. Incluyen sustancias usadas como conservadores y antisépticos así como las usadas para el tratamiento de enfermedades infecciosas de plantas y animales. (www.ucv.ve.farmacia/micro_web/catedras02. Tema14.pdf) 2.1.2.2. Tipos de agentes químicos antimicrobianos: Antisépticos: Agentes microbicidas que pueden aplicarse sobre la piel y mucosas pero no pueden ser utilizados internamente. Ejemplos: mercuriales, nitrato de plata, solución de yodo, alcoholes, detergentes. Desinfectantes: Agentes que matan microorganismos pero no necesariamente sus esporas y no deben aplicarse sobre tejidos sino sobre objetos inanimados como mesas, pisos, utensilios, etc. Ejemplos: cloro, hipoclorito, compuestos clorados, soda, sulfato de cobre, compuestos de amonio cuaternario, etc. Factores que influyen en la acción de los desinfectantes y antisépticos: La concentración del agente químico La temperatura a la cual el agente es usado. La clase de microorganismo presente. El número de microorganismos presentes. La naturaleza de material que acompaña a los microorganismos (materia orgánica, etc.) Los dos modos de acción más comunes de antisépticos y desinfectantes son: Daño a los lípidos y/o proteínas de la membrana citoplasmática resultando en su ruptura y en la salida del material celular. 21 Desnaturalización de enzimas y otras proteínas generalmente por ruptura de puentes de hidrógeno y disulfuro. Bloquean el metabolismo. Tabla 2. Desinfectantes y antisépticos más comunes. Tomado de: http://mail.fq.edu.uy/~microbio/MGral/practico/tercerciclo.doc Agente químico Acción Usos Etanol (50-70%) Desnaturaliza proteínas y solubiliza lípidos Antiséptico usado en piel Isopropanol (50-70%) Desnaturaliza proteínas y solubiliza lípidos Antiséptico usado en piel Formaldehído (8%) Reacciona con gruposNH2, -SH y -COOH Desinfectante, mata endosporas Tintura de yodo(2% I2 en 70% alcohol) Inactiva proteínas Antiséptico usado en piel Cloro (Cl2) gas Forma ácido hipocloroso (HClO), un fuerte agente oxidante Desinfección en general y en particular para agua potable Nitrato de plata (AgNO3) Precipita proteínas Antiséptico general y usado en ojos de recién nacidos Cloruro de mercurio Inactiva proteínas por reacción con los grupos sulfuro Desinfectante. En ocasiones usado como componente en antisépticos para piel Detergentes (ej. amonios cuaternarios) Ruptura de membranas celulares Desinfectantes y antiséptico de piel Compuestos fenólicos (ej. hexilresorcinol, hexaclorofenol) Desnaturalizan proteínas y rompen las membranas celulares Antisépticos a bajas concentraciones, desinfectantes a altas concentraciones Agente alquilante Desinfectante usado para esterilizar objetos sensibles al calor como goma y plásticos Oxido de etileno (gas) 22 2.1.3 Mecanismos de acción de los antisépticos y desinfectantes Los mecanismos de acción de los antisépticos y desinfectantes son múltiples, pero en todos subyace hasta cierto punto la secuencia de eventos que se muestra en el siguiente esquema: Interacción con la superficie del microorganismo 1 Alteración de la viabilidad del microorganismo 2 Entrada al microorganismo Daños Bioquímicos Interfer. metabólica y/o lisis del microbio 3 En esta secuencia se muestra que el primer paso sería la interacción del agente con la superficie del microorganismo (paso 1), con el propósito de penetrar al mismo para alcanzar el blanco de la acción (paso 2), causando daños bioquímicos diversos y/o causando alteraciones metabólicas, cuyo resultado final sea la destrucción microbiana (paso 3). Es de notar que la propia interacción con la superficie microbiana puede causar daños suficientes para alterar la viabilidad del microorganismo particular. (Poole K. 2002) Resistencia microbiana a los desinfectantes El desarrollo de resistencia microbiana a los antibióticos es un fenómeno ampliamente descrito. El desarrollo de resistencia microbiana a los desinfectantes es menos probable, ya que los desinfectantes son agentes biocidas más poderosos que los antibióticos y aplican en mayores concentraciones contra las poblaciones de microorganismos más bajas que, por lo general, no están en crecimiento activo; es por ello que la presión selectiva para el desarrollo de resistencia es menos profunda. Sin embargo, los microorganismos aislados con mayor frecuencia de un programa de control ambiental pueden someterse periódicamente. 23 2.1.3.1 Resistencia intrínseca de las bacterias Gram positivas La pared celular de estas bacterias, está compuesta esencialmente de peptidoglicano y ácido teicoico, pero ninguno de estos parece ser una barrera efectiva para la entrada de antisépticos y desinfectantes. Existen microorganismos que pueden crecer con un aspecto mucoso y otros no lo hacen, pero estas últimas mueren mucho más rápido, por lo que se podría decir que esta lama juega un papel importante al actuar como barrera física a la penetración de los desinfectantes o como una capa suelta que interactúa o absorbe el biocida. (McDONNELL and RUSSELL. 1999). 2.1.3.2 Resistencia intrínseca de las bacterias Gram negativas Las bacterias Gram negativas son generalmente más resistentes a los desinfectantes y antisépticos que las Gram positivas. La membrana de las bacterias Gram negativas actúa como una barrera que limita la entrada de algunos agentes químicos que no están relacionados con agentes antibacteriales. Muchos autores, han considerado que el peptidoglicano puede ser una barrera potencial a la entrada de sustancias inhibitorias. Debido a que el contenido de peptidoglicano es mucho más bajo que en las bacterias Gram positivas, las hace menos sensibles a muchos antisépticos y desinfectantes. (McDONNELL and RUSSELL. 1999). 2.1.3.3 Resistencia intrínseca de hongos Estos organismos tienen dos mecanismos de resistencia, el primero es una resistencia intrínseca y el segundo una resistencia adquirida. En la resistencia intrínseca la célula presenta una barrera para reducir la entrada de un agente antimicrobiano. También la edad de los cultivos influencia la resistencia a la sensibilidad hacia los desinfectantes, ya que la pared celular es mucho menos sensible en fase estacionaria que en fase logarítmica. 24 Los hongos son generalmente más resistentes que las levaduras y considerablemente más resistentes que las bacterias no esporuladas. Las esporas de los hongos son menos resistentes que las esporas bacterianas a los agentes biocidas. (McDONNELL and RUSSELL. 1999). 2.1.3.4 Mecanismo de la actividad del desinfectante La tabla 3 lista los sitios y modos de acción de algunos desinfectantes representativos. (USP, 2008) Tabla 3. Mecanismo de la actividad de los desinfectantes contra células microbianas Objetivo Desinfectante Pared celular Formaldehído, hipoclorito y mercuriales Membrana citoplasmática, acción sobre el Anilidas y hexaclorofeno potencial de la membrana Enzimas de membrana, acción sobre la cadena Hexaclorofeno de transporte de electrones Acción sobre el ATP Clorhexidina y óxido de etileno Acción sobre enzimas con grupos -SH Óxido de etileno, glutaraldehído, peróxido de hidrógeno, hipoclorito, yodo y mercuriales. Acción sobre la permeabilidad general de la Alcoholes, clorhexidina y compuestos de membrana amonio cuaternario Ribosomas Peróxido de hidrógeno y mercuriales Ácidos nucleicos Hipocloritos Hipocloritos Grupos tiol óxido de etileno, glutaraldehído, peróxido de hidrógeno, hipoclorito, mercuriales Grupos amino Óxido de etileno, glutaraldehído e hipoclorito Oxidación general Óxido de etileno, glutaraldehído e hipoclorito 25 2.1.4 Tipos de desinfectantes a evaluar 2.1.4.1. Alcoholes Muchos alcoholes tienen una actividad antimicrobiana apreciable, pero solamente algunos de ellos se usan ampliamente desde el punto de vista clínico; por su solubilidad en agua, los más utilizados son el propanol (sobre todo el isopropanol) y el etanol, siendo en general más eficaz el primero (aunque el etanol es mejor virucida). El mecanismo más probable para la acción de los alcoholes parece incluir la alteración de las membranas celulares, así como la rápida desnaturalización de proteínas, con la subsiguiente interferencia con el metabolismo y ulterior lisis celular. La acción de los alcoholes es rápida y de amplio espectro, pero aunque pueden inhibir la esporulación, no son activos contra esporas ya preformadas. Las concentraciones óptimas para uso de los alcoholes de alcohol se ubican entre el 60 y el 90 %, aún cuando a concentraciones más bajas pueden ser suficientes para su uso como preservantes. Los alcoholes pueden combinarse entre sí o con otros agentes, como por ejemplo la clorhexidina. (Azanza JR, 2003) 2.1.4.2 Compuestos de Cloro Son poderosos germicidas de amplio espectro de actividad, falto de residuos venenosos y de bajo precio. Como otros halógenos son muy reactivos con la materia orgánica y deben usarse sobre superficies limpias o en concentraciones elevadas. El efecto bactericida se fundamenta en la capacidad oxidante del cloro en forma de 2Cl-. Un mol de Ca(Ocl2) y de NaOCl respectivamente liberan 141 y 74.5 moles de Cl. 26 El mecanismo de acción descrito por Later y Konox en 1948 se centra en la inhibición de enzimas esenciales por oxidación de los grupos S-H. También se ha demostrado su capacidad para producir cambios en la permeabilidad de la membrana celular. La acción bactericida del cloro disminuye a medida que aumenta el pH y aumenta con la temperatura de la solución desinfectante que pierde actividad en presencia de materia orgánica. (ALDANA - SARASSA. 1999). Las fuentes de cloro más utilizadas son el hipoclorito de sodio, que libera un 12% a 14% de cloro y el hipoclorito de calcio con un 65% de disponibilidad. Debido a la falta de residuos tóxicos el blanqueador doméstico de hipoclorito de sodio es un excelente desinfectante de laboratorio para incubadoras, mesas de trabajo y derrames o pérdidas. Las bacterias Gram positivas y Gram negativas no esporoformadoras son altamente susceptibles al cloro. Los productos clorados tienen capacidad de penetración limitada, razón por la cual son superados por otros desinfectantes como los compuestos de amonio cuaternario, cuando se quiere desinfectar áreas porosas. (ALDANA - SARASSA. 1999). 2.1.4.3 Compuestos de amonio cuaternario Los agentes surfactantes o detergentes tienen dos regiones bien diferenciadas en su estructura química: Una región hidrocarbonada hidrofóbica y una región hidrofílica, que puede darle o no carácter iónico al compuesto. Los agentes catiónicos son los más activos como antisépticos/desinfectantes y entre ellos los compuestos de amonio cuaternario son los de mayor utilidad, por su gran actividad química. El mecanismo básico de la acción de estos agentes implica a las membranas biológicas como blanco primario, con la siguiente secuencia común de acontecimientos: 27 Interacción con la membrana citoplasmática Desorganización de los lípidos de membrana / Alteración del metabolismo energético de la célula microbiana Salida de componentes intracelulares de bajo peso molecular (pérdida de la permeabilidad selectiva) Degradación de moléculas de alto peso molecular (proteínas, ácido nucleicos) Lisis celular mediada por enzimas autolíticas En el caso de células como las bacterianas, debe haber primero un paso a través de la pared celular. Los agentes de amonio cuaternario son muy útiles para la antisepsia (en piel intacta) y distintos usos desinfectantes, todo ello gracias a su amplio espectro, que incluye hongos, micobacterias y virus encapsulados. Entre los representantes más importantes de este grupo de agentes se pueden mencionar a los siguientes: La cetrimida, el cloruro de cetilpiridinio, el cloruro de benzalconio y el metilbenzetonio. (Azanza JR. 2003). 2.1.4.4 Compuestos anfóteros Los compuestos anfóteros se presentan como cationes o aniones, dependiendo del pH de la solución y es en forma catiónica como son bactericidas activos. Generalmente son más caros que los otros desinfectantes y no son bactericidas especialmente potentes, aunque pueden mezclarse con los amonios cuaternarios para mejorar siu potencia. (Hayes, 2002). Estos compuestos son poco afectados por la materia orgánica o por la dureza del agua, no son corrosivos, no son tóxicos e incluso diluidos son inodoros y estables durante mucho tiempo: sin embargo, suelen formar espuma y debido a su alto precio y limitada actividad los desinfectantes anfóteros no se utilizan mucho en la industria alimentaria. (Hayes, 2002) 28 2.1.4.5 Compuestos fenólicos Muchos compuestos fenólicos son potentes bactericidas y se emplean como desinfectantes generales. Éstos no se emplean como desinfectantes en las fábricas de alimentos debido a sus fuertes olores y a la posibilidad de que transmitan olores extraños a los alimentos. (Hayes, 2002). 2.2 Desinfectantes utilizados en Laboratorios Pronabell Ltda. LABORATORIOS PRONABELL LTDA. Dentro del proceso de limpieza y desinfección, acorde al programa de rotación POE R 07 030 002, realiza la rotación de desinfectantes cada 15 días calendario, utilizando dos de estos para la sanitización de equipos y los otros dos para la sanitización de áreas. 2.2.1 Desinfectantes para equipos 2.2.1.1 TEGO 51 Es un desinfectante líquido que pertenece a la clase de los llamados jabones anfólitos o compuestos anfóteros y de amonio cuaternario. Las soluciones de empleo tienen una gran reacción ligeramente alcalina y son transparentes, incoloros, tenso activos, estables y fáciles de emplear. La estabilidad de este producto cumple con las exigencias correspondientes. Tego 51 posee un efecto comprobado contra las bacterias Gram positivas y Gram negativas, hongos, levaduras y contra un espectro limitado de virus. (ALDANASARASSA. 1999). 29 Modo de Uso Lavar con detergente adecuado Enjuagar muy bien con agua limpia Aplicar TEGO 51 entre el 1 y el 2% Dejar en contacto durante 10 minutos Enjuagar muy bien Tabla 4. Características físico-químicas Tego 51. PARAMETRO VALOR Densidad 1000 +/ - 0.005 g/cc a 20º C Viscosidad 7.5 + 5.0 mPa. a 20º C Indice pH Sin diluir 2 +/- 0.3 Solución acuosa 1% 8.3 +/- 0.5 Tensoactividad Solución acuosa al 1% -27.8 +/- 0.5 mN/m 20ºC. Conductividad Solución acuosa al 1% - 640 + 100 micras/cm 20ºC Solubilidad Miscible con agua en cualquier proporción. 2.2.1.2. Alcohol 70% (Según ficha técnica del proveedor) Desde hace por lo menos 40 años, el alcohol al 70% se ha reconocido como la óptima concentración para propiedades desinfectantes. El uso es de acuerdo a las instrucciones establecidas en los procedimientos de limpieza. 30 Propiedades físico-químicas Líquido incoloro y transparente, libre de sedimento de partículas en suspensión y de material extraño. Volátil e inflamable. Es higroscópico y miscible en agua, diclorometano y cloroformo. Mecanismo de acción El mecanismo de acción de los alcoholes es la desnaturalización de las proteínas de los microorganismos. La desnaturalización proteica sólo es posible en presencia de agua; por este motivo el alcohol absoluto presenta un poder bactericida mucho menor que las mezclas de alcoholes con agua. Podría tener cierta acción bacteriostática al inhibir la producción de metabolitos esenciales para la división celular rápida. Espectro de actividad Bactericida de potencia intermedia. Es activo frente a bacterias Gram positivas y Gram negativas, incluyendo patógenos multirresistentes (Staphylococcus aureus resistente a meticilina, Enterococcus resistente a vancomicina). También es activo frente a micobacterias, hongos y virus (incluyendo a HIV, virus de la hepatitis B, virus influenza, virus herpes simple, citomegalovirus y virus respiratorio sincitial). No tiene actividad esporicida. 2.2.2. Desinfectantes para áreas 2.2.2.1. SANITIZER (Según ficha técnica del proveedor) Sanitizer es un desinfectante a base de amonios cuaternarios, útil para la desinfección de diversas superficies. 31 Aplicaciones Desinfectante concentrado, efectivo en todo tipo de aguas. Actúa contra un amplio rango de microorganismos en diversas áreas, como pisos paredes, equipos y utensilios en general. Modo de Uso Se recomienda su uso entre el 1% y el 2% (Ficha técnica del proveedor) Información técnica Apariencia: Liquido claro Color: Rojo Densidad (20ºC): 0.995g/ml pH: 6.0 2.2.2.2. SUMASOL (Según ficha técnica del proveedor) Descripción Suma Sol es un detergente a base de cloro orgánico en polvo, de amplio espectro, para usar en todo tipo de superficies. Aplicaciones Suma Sol es un limpiador en polvo adecuado para uso en todas las superficies, equipos y utensilios que requieren desinfección. Contiene cloro activo, que actúa frente a un amplio espectro de microorganismos. 32 Información técnica Tabla 5. Características físico-químicas SUMASOL. PARAMETRO VALOR ASPECTO Polvo color blanco pH (1% solución) 8,4 CLORO (% peso) 3,3 Información microbiologica Suma Sol cumple la norma EN 1040 a una dilucion 0.5%-1%-2% en los 5 minutos siguientes al tiempo de contacto. Tambien cumple con la norma UNE- EN 1276 a la concentración de 1% en condiciones limpias de ensayo de 20ºC+/- 1ºC durante un tiempo de contacto de 5 minutos cuando los microorganismos de ensayo son: Escherichia coli Pseudomanas aeruginosa Enterococcus hirae Staphylococcus aureus Modo de Uso Se recomienda su uso en 10g/L de agua Dejar en contacto durante 5 minutos Enjuagar muy bien (según ficha técnica del proveedor) 33 2.3 Técnicas para evaluar desinfectantes 2.3.1. Coeficiente fenólico Es una técnica de estandarización para determinar la eficiencia bactericida de un compuesto químico con relación al fenol. Se valoran las muestras después de cinco, diez y quince minutos de exposición. Es una modificación de la técnica de dilución en tubo tal como se describe a continuación: (i) Se prepara una serie de tubos conteniendo cada uno 5 ml de diferentes diluciones del desinfectante. (ii) A la vez se prepara una segunda serie de tubos que contengan diferentes diluciones de fenol. (iii) Cada tubo de las dos series se inocula con 0,5 ml de un cultivo de 24 horas del microorganismo utilizado como prueba (cepas específicas de Salmonella typhi o Staphylococcus aureus). (iv) A los 5, 10 y 15 minutos se recoge una alícuota de cada tubo que se inocula en otro tubo que contenga medio de cultivo estéril. (v) Estos tubos inoculados se incuban durante 24 a 48 horas y se observa el crecimiento del microorganismo (aparición de turbidez). (vi) La mayor dilución del desinfectante que mate a los microorganismos en 10 minutos pero no los mate en 5 minutos se divide por la dilución mayor de fenol que dé los mismos resultados. El número obtenido es el coeficiente fenólico de ese desinfectante. (AOAC, 2000). 2.3.1.1. Recuento en placa Las diluciones del microorganismo se vierten en medio de cultivo sólido junto con una concentración del desinfectante y se incuba. Luego del periodo de incubación se observa la ausencia o disminución del crecimiento microbiano. Con el resultado obtenido del recuento en placa se puede determinar hasta que concentración actúa el desinfectante sobre una determinada concentración de microorganismos. Al cabo de 24 a 48 horas se observan zonas de inhibición (crecimiento -) alrededor del agente químico. Una modificación de esta técnica es la incorporación del agente químico en el medio de cultivo antes de verterlo sobre la placa. Una vez solidificado se inocula 34 con el microorganismo utilizado como prueba, se incuba y se examina el crecimiento microbiano. (BLOOK. 1994). 2.3.1.2. Medición de la actividad microbiana (MIC) La actividad microbiana se mide determinando la mínima cantidad del agente que se necesita para inhibir el crecimiento de un microorganismo, valor que se conoce como concentración mínima inhibitoria (MIC). Para determinar la MIC se prepara una serie de tubos, cada uno de los cuales contiene medio con una concentración diferente del desinfectante y se inoculan todos los tubos de la serie. Luego de la incubación se observa en cuales de los tubos no hay crecimiento (evidenciado por la ausencia de turbidez) y se determina así la MIC. Este eficaz procedimiento se denomina con frecuencia técnica de la dilución en tubo. (BLOOK. 1994). 2.3.1.3 Dilución en tubo Mediante este método también es posible evaluar los desinfectantes. Consiste en realizar diferentes diluciones del agente químico. El mismo volumen de cada dilución se dispensa en tubos estériles. A cada tubo se le añade la misma cantidad de una suspensión del microorganismo utilizado como prueba. A determinados intervalos de tiempo se transfiere una alícuota de cada tubo a otro tubo que contenga medio de cultivo. Estos tubos inoculados se incuban a la temperatura óptima de crecimiento del microorganismo utilizado como prueba durante 24 a 48 horas. Al cabo de este tiempo se examina el crecimiento del microorganismo mediante la aparición de turbidez en el tubo (crecimiento +) o ausencia de turbidez (crecimiento -). Aquellos tubos que presenten crecimiento negativo indican la dilución a la cual ese agente químico mata al microorganismo utilizado como prueba cuando este microorganismo es expuesto al agente químico durante ese período de tiempo. (AOAC. 2000) 35 2. 4 Metodologías de muestreo 2.4.1 Sedimentación en placa Este método aun se utiliza ampliamente como una manera simple y económica de evaluar cualitativamente los ambientes durante tiempos de exposición prolongados. La exposición de placa de placas de petri con agar abiertas, o placas de sedimentación, no debe usarse para estimaciones cuantitativas de la contaminación microbiana en ambientes críticos. Una de las principales limitaciones de los muestreadores de aire es la limitación del tamaño de la muestra de aire tomada, cuando se espera que el aire de un ambiente controlado no contenga mas de 3UFC/metro cúbico, deben evaluarse varios metros cúbicos de aire para lograr resultados de razonable precisión y exactitud. Para demostrar que los recuentos microbianos no están aumentando con el tiempo, probablemente te necesite prolongar el muestreo. Si se analiza un metro cúbico de aire, entonces se exige un tiempo de exposición de 15 minutos. Podría ser necesario usar tiempos de muestreo superiores a 15 minutos para obtener una muestra ambiental representativa (USP, 2008). 2.4.1.1. Hisopado Otro componente del programa de control microbiano en ambientes controlados es el muestreo de las superficies de equipos, instalaciones e indumentaria personal usados en los ambientes. La estandarización de métodos y procedimientos de muestreo de superficies no se ha tratado en la industria farmacéutica tan ampliamente como para el muestreo de aire. 36 Para minimizar los trastornos en las operaciones criticas, el muestreo de superficie se realiza al finalizar las actividades. El muestreo de superficies puede llevarse a cabo mediante placas de contacto o por el método de hisopo. El control de superficies en general se realiza en áreas que entran en contacto con el producto y en áreas adyacentes. El método de hisopado puede usarse para muestrear superficies irregulares, especialmente los equipos. El hisopo luego se coloca en un diluyente adecuado y se realiza el recuento microbiano estimado mediante la siembra de una alicuota apropiada en un agar nutritivo especificado. El área por donde pasa el hisopo se define con una plantilla estéril de tamaño adecuado. En general, es entre 24 y 20 centímetros cuadrados (USP, 2008). 2.5. LABORATORIOS PRONABELL LTDA. Laboratorios Pronabell Ltda. es una empresa netamente Colombiana con más de 15 años de experiencia dedicados a la investigación, desarrollo y comercialización de productos farmacéuticos, cosméticos y nutricionales con base en complejos activos naturales, elaborados con tecnología de punta llevando productos de excelente calidad a manos del consumidor. Está equipado con maquinaria de la más alta tecnología para manufacturar diferentes formas farmacéuticas como semisólidos (cremas, geles, ungüentos, pasta dentrífica), líquidos (soluciones y emulsiones), sólidos (tabletas, cápsulas y polvos). 2.5.1. Descripción de equipos área fitoterapéuticos Equipos correspondientes al área de fitoterapéuticos: 37 MEZCLADOR SFIDMAQ EN V DESCRIPCIÓN AREA: Fitoterapéuticos DIMENSIONES (m.) ALTO: 2. 90 ANCHO: 80 LARGO: 2.50 CAPACIDAD: 500 Kg. VELOCIDAD: 2620 r.p.m. POTENCIA (H.P.) : 7.5 Hp FUNCION: Mezclar polvos para la elaboración de tabletas (solidos comprimidos) y polvos fitoterapeuticos TABLETEADORA RIMEK 16 DESCRIPCIÓN AREA: Sólidos Fitoterapéuticos MARCA: KARNAVATI DIMENSIONES (m.m): ANCHO: 850 LARGO: 850 ANCHO: 850 VELOCIDAD: 960 r.p.m. CAPACIDAD: 550 TAB / MIN FUNCION: Comprimir los polvos para la obtención de tabletas 38 CONTADORA DE TABLETAS GM-C-101 DESCRIPCIÓN AREA: Fitoterapéuticos MARCA: GREATIDE MODELO: GM -C 101 TENSIÓN (Voltios): 220 FUNCIÓN: Dispensar las tabletas para su posterior envasado ENVASADORA DE LÍQUIDOS SFIDMAQ DESCRIPCIÓN AREA: Envasado Líquidos Fitoterapéuticos MARCA: SFIDMAQ DIMENSIONES (mm) ALTO: 80 ANCHO: 40 LARGO: 40 TENSIÓN (Voltios): 220 CORRIENTE (Amperios): 11.2 39 DOSIFICADORA DE CREMAS MARMITA SFIDMAQ 300 DESCRIPCIÓN AREA: Envasado Semisólidos Fitoterapéuticos MARCA: SFIDMAQ MODELO: AR 200 DIMENSIONES : ALTO: 30 cm. ANCHO: 25 cm. LARGO: 59 cm. CAPACIDAD: 10 – 100 grs. TENSIÓN (Voltios): 110 CORRIENTE (Amperios): 11.5 AIRE COMPRIMIDO( PSI): 0.55 psi FUNCION: Dispensar cremas para su posterior envasado DESCRIPCIÓN AREA: Fitoterapéuticos MARCA: SFIDAMAQ CAPACIDAD: 300 Kg. VELOCIDAD MOTOR: 1720 r.p.m. TENSIÓN (Voltios): 220 CORRIENTE (Amperios): 13.2 A POTENCIA (H.P.) 6.6 AIRE COMPRIMIDO( PSI): 100 FUNCION: Elaborar productos semi-sólidos fitoterapéuticos 40 TANQUE DE FABRICACIÓN DESCRIPCIÓN AREA: Líquidos Fitoterapeuticos MARCA: SFIDMAQ DIMENSIONES (m.m) ALTO: 2500 ANCHO: 800 LARGO: 800 CAPACIDAD: 1000 L. VELOCIDAD: 1710 r.p.m FUNCIÓN: elaborar productos líquidos fitoterapeuticos. 41 3. FORMULACIÓN DEL PROBLEMA Y JUSTIFICACIÓN Formulación del problema Laboratorios Pronabell Ltda, constituye una empresa productora de alimentos, cosméticos y fitoterapéuticos, donde el área de productos fitoterapéuticos es de suma importancia, ya que en ella se fabrica una gran variedad de productos, siendo uno de los principales abastecedores de medicamentos fitoterapéuticos a nivel nacional. Debido a la naturaleza y origen vegetal de las materias primas utilizadas, el riesgo de aparición de una contaminación cruzada es elevado, por lo que comprobar la veracidad de los desinfectantes utilizados, constituye un elemento importante en el aseguramiento de la calidad de los productos. Teniendo en cuenta la necesidad de validar los procesos de limpieza y desinfección en este tipo de industria, se hace necesario, emplear metodologías adecuadas que conlleven a desarrollar la investigación pertinente, con el fin de lograr los objetivos de calidad propuestos, evaluando la efectividad de los desinfectantes en las áreas y equipos de producción de fitoterapéuticos de Laboratorios Pronabell LTDA. Justificación Dentro de la industria farmacéutica existe una gran variedad de sustancias medicinales cuya finalidad es mantener o restablecer la salud del hombre y de los animales. Laboratorios Pronabell Ltda, cuenta con la línea de productos fitoterapéuticos, los cuales son fabricados con base en plantas medicinales y sus derivados. 42 La Organización Mundial de la Salud (OMS), mediante varios comunicados ha expresado su posición con respecto a la necesidad de revalorar la utilización de las plantas medicinales dentro del ámbito sanitario. Frente a esto, y dada la preocupación que genera ofrecer productos de alta calidad, surge la necesidad de evaluar los desinfectantes utilizados en el proceso de limpieza y desinfección en el área de fitoterapéuticos de laboratorios Pronabell Ltda. Además, de acuerdo con la regulación Nacional vigente en los decretos 2266 y 3553 de 2004, por los cuales se reglamentan entre otros aspectos los regímenes de vigilancia y control sanitario y de productos fitoterapéuticos, la validación de limpieza resulta como un requisito indispensable para el correcto cumplimiento de Buenas Prácticas de Manufactura (BPM) estipuladas en el Capítulo I de estos decretos. 43 4. OBJETIVOS Objetivo General Evaluar la efectividad de los desinfectantes utilizados en el proceso de limpieza y desinfección de áreas y equipos para la fabricación de productos fitoterapéuticos en LABORATORIOS PRONABELL LTDA. Objetivos Específicos Determinar el desempeño de los desinfectantes en uso, mediante la técnica de coeficiente fenólico utilizando las concentraciones sugeridas por el fabricante. Realizar el monitoreo microbiológico de los puntos críticos de control en áreas y equipos destinados a la producción de fitoterapéuticos en LABORATORIOS PRONABELL LTDA. Evaluar el tiempo de contacto en que deben estar los desinfectantes con las superficies para que inhiban o eliminen a los microorganismos presentes. Evaluar estadísticamente los resultados obtenidos para proceder a realizar modificaciones a los POEs , optimizando los procedimientos actuales. 44 5. MATERIALES Y MÉTODOS 5.1. Diseño de la investigación El diseño de la investigación fue de tipo experimental ya que se buscó evaluar y verificar la efectividad de los desinfectantes utilizados en el proceso de limpieza y desinfección de áreas y equipos de Laboratorios Pronabell Ltda. 5.1.1. Población de estudio y muestra El objeto de estudio son los desinfectantes a base de Alcohol (Alcohol al 70%), cloro (Sumasol) y amonio cuaternario y anfóteros (Tego 51 y Sanitizer) utilizados en el proceso de limpieza y desinfección de áreas y equipos de Laboratorios Pronabell. 5.1.1.1. Materiales Tubos de 16 x150 Pipetas graduadas Micropipetas 100 a 1000 um Asas Cajas de petri Hisopos Plantilla de acero inoxidable de 20 cm2 Gradillas Frascos Schott 45 5.1.1.2. Equipos Incubadora a 35ºC Incubadora a 25ºC Balanza de precisión Autoclave Campana de flujo laminar Cronometro Estufa Microscopio 3.1.1.3. Medios de Cultivo y Reactivos Agar EMB Agar Saboreaud Agar Cetrimide Agar XLD Agar Tripticasa Soya Agar Baird Parker Caldo Caseín Caldo Tripticasa Soya Cristal Violeta Lugol Alcohol Acetona Fuscina Azul de Lactofenol 46 5.1.1.4. Cepas estándar Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 Staphylococcus aureus ATCC 6538 p Salmonella typhi 5.1.2. Ubicación El proyecto se desarrolló en las instalaciones de LABORATORIOS PRONABELL LTDA en el área de fitoterapéuticos ubicado en la Cra 12 N 24b-45. Barrio La Aurora. Funza Cundinamarca. 5.2 Ensayos de evaluación 5.2.1. Coeficiente fenólico Se realizó la técnica del coeficiente fenólico descrito por la Association of Official Analytical Chemists AOAC. Se prepararon tres (3) soluciones de la muestra: La que recomendaba el fabricante, una más concentrada y una menos concentrada que la recomendada. Se valoraron las muestras tomadas para los desinfectantes Tego 51, Sumasol, Sanitizer y alcohol al 70%, después de 5, 10 y 15 minutos de exposición y estos fueron comparados con el fenol respectivamente a diferentes concentraciones (propuestas por la AOAC) según el microorganismo a evaluar. Las suspensiones para cada microorganismo evaluado se prepararon a una concentración correspondiente al tubo No. 1 del patrón de Mc Farland (AOAC, 2000). Cada prueba con cada desinfectante fue repetida 3 veces. Se tuvo como controles, las cepas sin el desinfectante (control negativo) y el desinfectante solo (control positivo). (Diagrama 1) 47 0.2 ml Tubo de reacción (Desinfectante + Microorganismo) 0.2 ml Tubo con medio + desinfectante a los 5’. 0.2 ml Tubo con medio + desinfectante a los 10’. Tubo con medio + desinfectante a los 15’. Diagrama 1. Evaluación de los desinfectantes por la técnica del coeficiente fenólico. 5.3. Muestreo del área de Fitoterapéuticos 5.3.1. Puntos de muestreo y toma de muestras La toma de muestra se realizó bajo condiciones asépticas para evitar contaminación cruzada una vez concluido el proceso de limpieza y desinfección. Se aplicó la técnica de sedimentación en placa en agar Tripticasa Soya para mesófilos aerobios y Saboreaud para hongos y levaduras. Estas placas se expusieron (3) veces por día (mañana, medio día y tarde), de lunes a viernes, 15 días, durante 45 minutos. Los puntos de muestreo fueron seleccionados conforme a los intereses de la empresa, puesto que en las áreas seleccionadas se llevan a cabo procesos de elaboración de productos naturales. Se tomaron muestreos aleatorios de las 3 subáreas (Área de sólidos, Área de líquidos, Área de semisólidos) del área de Fitoterapéuticos. En cada subárea se muestrearon 3 puntos que fueron el piso, los techos y las paredes para determinar la carga microbiana presente en las superficies aplicando el método de Hisopado (USP 2008). Así mismo, fueron muestreados cada uno de los equipos de las subáreas en 3 puntos diferentes cada uno. Se generó un total de 18 muestreos 48 por área, teniendo en cuenta que fueron 3 puntos en cada una y 3 puntos en cada equipo tomando los tiempos respectivos a la técnica de coeficiente fenólico (5, 10 y 15 min). (AOAC, 2000). Los desinfectantes, son rotados cada 15 días. 5.4 Procedimiento de muestreo Se prepararon tubos con 10 ml de caldo caseín para cada superficie y equipo, humedeciendo la punta del escobillón en el tubo y posteriormente ubicándolo en la superficie a ser muestreada en un área de 20cm2. El número total de muestras de superficies y equipos por área fue de 18, es decir, que en total se muestrearon 360 cm2. Se introdujo el escobillón en el tubo y se marcó con el nombre de la superficie, equipo o área donde se realizó el proceso (USP 2008). A partir de cada uno de los tubos se transfirió 1ml en cajas de petri usando pipetas estériles a cada uno de los medios respectivos para cada microorganismo (Tripticasa soya para mesófilos y Saboreaud para hongos y levaduras) y se incubaron según requerimientos del microorganismo. Para los medios selectivos para patógenos se realizo una siembra masiva de cada uno de los tubos con los equipos y áreas muestreadas. Mesófilos Agar Tripticasa soya (Caso) Hongos y levaduras Agar Saboraud E. coli Agar EMB Staphylococcus aureus Agar Baird Parker Pseudomonas aeruginosa Agar Cetrimide Salmonella typhi Agar XLD Los medios selectivos, fueron para determinar presencia presuntiva de cualquiera de los microorganismos patógenos mencionados anteriormente. 49 Área de sólidos, semisólidos y líquidos SEDIMENTACIÓN Exponer las cajas de petri con medio para cada microorganismo durante 45 min. Cerrar las cajas e incubar según requerimiento del microorganismo TOMA DE MUESTRAS DE SUPERFICIES Y EQUIPOS Pasar el escobillón humedecido con medio sobre una superficie en un área de 20 cm2 Tomar tiempos de contacto de 5, 10 y 15 min. Introducir el escobillón en el tubo, sembrar 1 ml en medios, incubar y leer resultados. Diagrama 2. Metodología de toma de muestras de ambientes y superficies en el área de fitoterapéuticos. 50 5.5 Identificación de microorganismos Para determinar la carga presente en cada una de las áreas muestreadas, se realizaron coloraciones con azul de lactofenol para hongos filamentosos y coloración de Gram para bacterias y levaduras, y conjuntamente se realizaron las correspondientes observaciones macroscópicas y microscópicas y sus respectivos recuentos. En cuanto a los medios selectivos para microorganismos patógenos, se hicieron pruebas complementarias para descartar la presencia de estos. 5.6 Estadística de datos Se empleo estadística descriptiva para los recuentos de los microorganismos y adicionalmente un análisis de varianza para varias muestras por grupo. (Daniel, 2002) 51 6. RESULTADOS Y DISCUSIÓN A continuación se mostrarán los resultados obtenidos luego de haber aplicado la metodología anteriormente descrita. 6.1 Coeficiente fenólico. + (Crecimiento) – (Sin crecimiento). Los tubos fueron evidenciados por turbidez. FENOL Staphylococcus aureus 1/60 1/70 5’ + + 10’ + 15’ + 5’ + + 10’ + 15’ + 5’ + + 10’ + 15’ + Salmonella typhi 1/90 1/100 Pseudomonas aeruginosa 1/80 1/90 52 SUMASOL Staphylococcus aureus CF: 100 = 1.6 60 1/90 1/100 1/120 5’ + + + 10’ + 15’ + 10’ + 15’ + 10’ + 15’ + 10’ + 15’ + Salmonella typhi CF: 100 = 1.1 90 1/90 1/100 1/120 5’ + + + Pseudomonas aeruginosa CF: 100 = 1.25 80 1/90 1/100 1/120 5’ + + + TEGO 51 Staphylococcus aureus CF: 80 = 1.3 60 1/70 1/80 1/90 53 5’ + + Salmonella typhi CF: 80 = 0.8 90 1/70 1/80 1/90 5’ + + + 10’ + 15’ + 10’ + 15’ + + 10’ - 15’ + - 10’ - 15’ - Pseudomonas aeruginosa CF: 80 = 1.0 80 1/70 1/80 1/90 5’ + + + SANITIZER Staphylococcus aureus CF: 60 = 1.0 60 1/40 1/50 1/60 5’ + + + Salmonella typhi CF:------------90 1/40 1/50 1/60 54 5’ + + + Pseudomonas aureginosa CF: 50 = 0.63 80 1/40 1/50 1/60 5’ + + + 10’ + 15’ + 5’ - 10’ - 15’ - ALCOHOL 70% S. aureus Salmonella P. aureginosa Coeficiente fenólico: > dil desinfectante que mate en 10’ pero no en 5’ ____________________________________________ > dil fenol que mate en 10’ pero no en 5’ (Ver anexo 1) En cuanto a los resultados obtenidos en la técnica del coeficiente fenólico, se analizaron los resultados por desinfectante evaluado y microorganismo en estudio. Para la actividad germicida del SUMASOL, la dilución utilizada en el laboratorio es de 1/100 siendo óptima para los resultados que se esperaban, aunque siguiendo la recomendación de la técnica en evaluar una concentración más baja que la sugerida por el fabricante fue igualmente óptima la dilución 1/90, eliminando los tres (3) microorganismos en estudio a los 10 y no a los 5 min (Ver anexo 2). El SUMASOL al pertenecer al grupo de los compuestos de cloro resulta ser un poderoso germicida de amplio espectro de actividad. Este agente desinfectante ejerce un control sobre los microorganismos inhibiendo sus enzimas esenciales por oxidación de los grupos tiol 55 (S-H), alteración en la permeabilidad de la membrana celular, además de su capacidad oxidadora. (ALDANA-SARASSA, 1999). El desinfectante TEGO 51, al tener como principio activo compuestos anfóteros y de amonio cuaternario posee un amplio espectro constituyéndose como bactericida, esporicida y fungicida entre otros. Lo anterior se pudo verificar con los resultados obtenidos ante el estudio al que fue sometido con las tres cepas recomendadas por la AOAC, en donde a la dilución utilizada en el laboratorio 1/80 los resultados fueron los esperados ya que está cumpliendo a cabalidad con lo que se espera en un proceso de limpieza y desinfección. El efecto biocida del Tego, se debe a que actúa sobre las proteínas (denatura), el metabolismo (alteración en la dinámica enzimática) y adicionalmente por producir cambios en la permeabilidad de la membrana citoplamática. (ALDANA-SARASSA, 1999). Así mismo para SANITIZER, siendo un amonio cuaternario y teniendo características similares a las del TEGO51, por ser un desinfectante de amplio espectro, los resultados igualmente fueron satisfactorios a la dilución utilizada por el laboratorio (1/50), corroborando una vez más el buen uso que se le da a este por parte del personal de limpieza. El último desinfectante evaluado fue el alcohol al 70%, el cual se evaluó a esa concentración sin hacer diluciones, ya que esta es la concentración recomendada para este tipo de Industrias. Este resultó ser un buen desinfectante para utensilios y equipos ya que aunque no se pudo comparar con el fenol fue efectivo a partir de los 5 min de exposición. Como el alcohol se encuentra diluido en agua su poder para denaturar proteínas es mayor, que si se encontrara puro, además, el alcohol es capaz de interferir en la síntesis te algunos metabolitos esenciales para la división celular. Es por medio de estos mecanismos que el alcohol ejerce un efecto biocida frente a los microorganismos con los que fue enfrentado. (ALDANA-SARASSA, 1999). 56 Para cada desinfectante con cada microorganismo evaluado, se calculó el coeficiente fenólico después de haberlos comparado con el fenol y de igual manera determinando la mejor dilución de este propuestas por la AOAC para cada microorganismo. (Ver Anexo 1). 6. 2 ESTIMACIÓN DE LA CARGA MICROBIANA INICIAL Antes de llevar a cabo la evaluación del proceso de sanitización se tomaron muestreos durante 15 días de cada área por medio de la técnica de sedimentación, esto con el fin de estimar el nivel de biocontaminación del aire, de localizar las áreas contaminantes y de mayor de riesgo, además de estimar la carga microbiana presente en las áreas de producción. Las cajas fueron expuestas teniendo en cuenta la proximidad del área con el producto. El análisis microbiológico del aire realizado, consistió en un recuento en placa de mohos y levaduras en agar Saboraud 4% y en un recuento en placa de microorganismos aerobios mesófilos en agar Tripticasa Soya. A cada una de las colonias aisladas se les realizó coloración de Gram y coloración con Azul de lactofenol en el caso de los hongos filamentosos. La Tabla No. 6 muestra el promedio de las ufc/m2 de cada área muestreada. Se pudo estimar que los recuentos no sobrepasaron los niveles de especificación permitidos, al tratarse de áreas de fabricación para productos no estériles, que corresponden a la clase 10000 según la Federal Standard 209. (ver Anexo 2) 57 Tabla 6. Promedios de las ufc/ 45 minutos de cada área muestreada Marmit a 300 RECUENTO MESOFILOS UFC/45 min MOHOS Y LEVADURAS UFC/45 min Mezclador Tanque de en V fabricación Tableteadora Envasadora tabletas Envasador a líquidos Envasad Pesaje. o Polvos. 4 6 7 7 6 8 7 5 5 7 8 5 7 7 8 5 Luego de realizar las coloraciones de Gram a cada una de las colonias encontradas, en agar Tripticasa Soya, se observó una alta frecuencia de Bacterias Gram Positivas, en menor frecuencia cocos Gram positivos y Levaduras respectivamente, hallazgo que descartó la presencia de microorganismos patógenos como Escherichia coli, Salmonella s.p y Pseudomonas (Bacterias Gram negativas). Según lo reportado en literatura, la gran mayoría de las especies que conforman los bacilos Gram Positivos no son patógenos primarios. Muchos forman parte de la flora normal del cuerpo humano (piel, tracto gastrointestinal, cavidad oral) y se encuentran ampliamente distribuidos en el ambiente. Por otro lado, el aire, además de partículas en suspensión, es portador de bacterias en forma vegetativa o esporuladas, esporos de hongos y virus. La población microbiana del aire está compuesta principalmente por esporas de hongos, especialmente de hongos imperfectos Cladosporium spp. y basidiosporas, y por bacterias, entre ellas Bacillus spp, Micrococcus spp., esporos de Clostridium y Bacillus.. (Manacorda A. M, 2007) En la coloración con azul de lactofenol pudo observarse hifas hialinas septadas y conidióforos, así como hifas hialinas, esporangioforo y rizoides. De acuerdo con la microscopia y con las características macroscópicas observadas, se presume la presencia de Penicillium s.p y Rhizopus s.p en las áreas del Laboratorio. (Ver anexo 3). 58 La gráfica No. 1 muestra que en la mayoría de las áreas evaluadas, hay presencia de Bacilos Gram positivos, cocos Gram positivos, levaduras y hongos filamentosos respectivamente. Al igual que con los hongos no fue extraño encontrar la presencia de dichos microorganismos, debido a que estos están presentes en el ambiente o en las personas que laboran en la planta. Sin embargo, luego de esto, se le recomendó al personal de producción el uso continuo del tapabocas. Grafica 1. Incidencia de Organismos presentes en las áreas del laboratorio. 6.3 EVALUACION DE LOS DESINFECTANTES TEGO 51 Y ETANOL 70% EN EQUIPOS. Con el fin de poder establecer los límites de aceptación para cada una de las áreas y equipos a muestrear, se revisaron los datos históricos de la empresa. Se estableció que el límite de microorganismos para todas las áreas en el ambiente ha sido de 45ufc/m3 en 45 minutos de exposición, y para superficies es de 25ufc/cm2. 59 Para la determinación de estos límites, se tuvieron en cuenta las especificaciones microbiológicas que deben cumplir los productos fabricados en la empresa. Antes de llevar a cabo la evaluación del proceso de Sanitización en las diferentes áreas y equipos, se estimó la carga microbiana inicial presente en cada uno de los mismos, esto se realizó antes del proceso de desinfección pero inmediatamente después del procedimiento de limpieza, ya que la desinfección química debe estar precedida siempre por una limpieza, puesto que la acción mecánica por sí sola elimina gran cantidad de microorganismos y materia orgánica que puede inactivar al desinfectante. (E. A. Vives, 2004) A partir de esto y con el fin de poder establecer el tiempo de contacto requerido de cada desinfectante para la eliminación de los microorganismos presentes se evaluó la acción del desinfectante a los 5, 10 y 15 minutos respectivamente. Por cada equipo se tomaron tres muestreos aleatorios mediante la técnica de hisopado, los cuales fueron definidos teniendo en cuenta la proximidad de estos sobre el producto. Las tablas No. 7 y 8 muestran los promedios de los recuentos de microorganismos mesófilos y mohos y levaduras alcanzados para cada equipo con cada uno de los desinfectantes evaluados. El tiempo 0 indica los recuentos obtenidos antes de agregar el desinfectante correspondiente. Las pruebas de ausencia/presencia para Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Salmonella s.p y Pseudomonas aeruginosa realizadas a cada uno de los equipos fueron negativas, en cada uno de los tiempos evaluados. 60 Tabla 7. Recuento Mesófilos (ufc/cm2) Marmita 300 Mezclador en V Tanque de fabricación Tableteadora Envasadora tabletas Envasadora liquidos Envasadora Polvos. RECUENTO MESOFILOS (ufc/cm2) TEGO 51 ETANOL 70% 10 15 O 5 10 15 O MIN 5 MIN MIN MIN MIN MIN MIN MIN 3 2 1 1 2 1 2 2 2 2 0 0 5 3 1 1 6 3 2 2 1 1 2 0 2 2 2 1 5 5 2 2 1 1 0 1 5 4 2 1 3 3 1 1 4 3 1 1 4 2 1 0 4 3 1 1 Tabla No. 8 Recuento de Hongos y Levaduras (ufc/cm2) RECUENTO HONGOS Y LEVADURAS (ufc/cm2) TEGO 51 ETANOL 70% O 5 10 15 O 5 10 15 MIN MIN MIN MIN MIN MIN MIN MIN 4 4 3 1 5 5 2 1 Marmita 300 5 3 1 2 6 4 2 2 Mezclador en V 2 2 1 1 5 3 3 2 Tanque de fabricación 6 4 2 0 4 2 2 1 Tableteadora 2 2 1 1 5 4 2 1 Envasadora tabletas 3 3 1 0 5 3 1 0 Envasadora líquidos 3 2 0 0 5 2 2 1 Envasadora Polvos. Los resultados arrojaron una drástica disminución en el recuento microbiológico respecto a los obtenidos en la fase evaluativa previa (tiempo 0), consiguiendo una ausencia casi total de contaminación microbiana luego de los 10 minutos de exposición con los desinfectantes ETANOL70% Y TEGO 51. (Ver graficas No. 2 y 3). 61 Sin embargo, se observa que a los 5 minutos de exposición de los microorganismos con el desinfectante, los recuentos microbianos se mantienen casi en su totalidad. Este hecho, también pudo observarse luego de la prueba preliminar, donde se evaluó la actividad de cada uno de los desinfectantes utilizados por medio de la técnica del coeficiente fenólico, donde se observó que para los desinfectantes TEGO 51, SUMASOL y SANITIZER ,se requieren tiempos de contacto superiores a 5 minutos para la eliminación de la carga microbiana. Sin embargo, esto mismo no pudo observarse con el ETANOL 70%, que mostró una eliminación parcial de los microorganismos desde los 5 minutos de exposición. Esto igualmente pudo confirmarse, al tomar los muestreos luego de agregar el etanol 70% en los equipos a analizar, se observó una clara disminución de la carga microbiana inicial presente, es decir que si ejerció una buena actividad desinfectante, causando su efecto de alteración de las membranas celulares, así como la rápida desnaturalización de proteínas, con la subsiguiente interferencia con el metabolismo y ulterior lisis celular en los microorganismos. Las gráficas 2 y 3 muestran la muerte bacteriana en el tiempo, así como su pérdida irreversible de la capacidad de reproducción. Cuando una población bacteriana se expone a un agente letal o se somete a un procedimiento físico de esterilización se produce; a medida que transcurre el tiempo; una progresiva reducción del número de bacterias sobrevivientes. Es decir, el número de microorganismos viables disminuye en forma exponencial (siguiendo la cinética de orden 1). Por este motivo, debe esperarse un tiempo adecuado luego de la aplicación del desinfectante. (E. A. Vives, 2004). 62 Gráfica 2. Actividad del TEGO 51 y Etanol 70% en Mesófilos a través del tiempo. Gráfica No. 3 Actividad del TEGO 51 y Etanol 70% en Hongos y Levaduras a través del tiempo. 63 Realizando una comparación entre los resultados, obtenidos en la fase evaluativa previa (tiempo 0) versus los resultados alcanzados una vez finalizada la evaluación (15 minutos), se observa claramente una drástica reducción en los márgenes de carga microbiana presente en los distintos equipos, logrando alcanzar valores muy por debajo de los niveles establecidos como límite. Así mismo, se observa que el equipo que presento mayor recuento de mesófilos en el muestreo inicial fue el Tanque de fabricación, situación que pudo presentarse debido a su tamaño que comparado a los otros equipos es significativamente mayor, y que por ende dificulta la eficiencia en su limpieza. Sin embargo, y a pesar de presentar un considerable recuento de microorganismos mesófilos no se evidenció presencia de microorganismos patógenos. Además, su recuento se ve disminuido en un 50% luego de los 5 minutos de agregar el desinfectante, y a los 15 minutos se ve reducido casi en su totalidad. Esto indica, que los desinfectantes TEGO 51 y ETANOL 70% cumplen su acción bactericida la cual se le atribuye a la inactivación de enzimas, desnaturalización de proteínas esenciales y rotura de la membrana celular. Con respecto a las unidades formadoras de colonias de hongos y levaduras se observa que los recuentos iniciales, son más altos comparados con las unidades formadoras de colonias de microorganismos mesófilos. Sin embargo, luego de aplicar el desinfectante sus recuentos también se observan disminuidos (ver gráfica No.3). Esto confirma una vez más la acción biocida y fungicida de los desinfectantes evaluados. 64 6.4 EVALUACIÓN DE LOS DESINFECTANTES SUMASOL Y SANITIZER EN ÁREAS DE PRODUCCIÓN. Luego de realizar los muestreos en los pisos, paredes, y techos de las áreas de producción, pudo establecerse un elevado recuento tanto de bacterias como de hongos y levaduras, comparado con los recuentos obtenidos de los equipos. Sin embargo, y de acuerdo a los datos históricos, estos recuentos estarían sobre los límites aceptables, ya que las pruebas de ausencia de microorganismos en todos los casos fueron negativas. Es decir, que no se evidenció presencia de microorganismos patógenos. (Ver tablas 9, 10 y 11) Tabla No. 9 Superficie analizada Piso. SUPERFICIE ANALIZADA PISO. RECUENTO MESOFILOS UFC/20 cm SUMA-SOL Marmita 300 Mezclador en V Tanque de fabricación Tableteadora Envasadora tabletas Envasadora liquidos Envasadora Polvos. Pesaje. O MIN 5 MIN 10 2 RECUENTO MOHOS Y LEVADURAS UFC/20 cm SANITIZER 10 MIN 15 MIN O MIN 5 MIN 5 0 1 7 10 5 1 1 16 13 1 13 10 21 SUMA-SOL 10 MIN 15 MIN 5 3 14 10 1 19 1 1 18 2 14 12 16 17 65 O MIN 5 MIN 1 4 1 1 15 1 6 4 1 17 2 1 13 1 12 1 2 SANITIZER 10 MIN 15 MIN O MIN 5 MIN 4 1 6 5 1 8 2 1 15 2 16 13 1 19 0 13 10 MIN 15 MIN 0 4 3 2 0 0 0 5 5 2 1 5 1 0 11 9 2 0 7 5 2 0 6 5 1 0 1 7 5 1 0 7 6 2 0 2 1 10 7 2 0 9 7 2 0 15 2 1 8 6 2 0 6 5 2 0 10 0 0 6 4 2 0 7 7 1 0 Tabla No. 10 Superficie analizada Pared. SUPERFICIE ANALIZADA PARED RECUENTO MESOFILOS UFC/20 cm SUMA-SOL Marmita 300 Mezclador en V Tanque de fabricación Tableteadora Envasadora tabletas Envasadora liquidos Envasadora Polvos. Pesaje. O MIN 5 MIN 4 2 RECUENTO MOHOS Y LEVADURAS UFC/20 cm SANITIZER 10 MIN 15 MIN O MIN 5 MIN 3 3 1 8 11 6 1 1 16 13 1 9 7 15 SUMA-SOL 10 MIN 15 MIN O MIN 5 MIN 6 2 2 5 13 8 1 1 1 18 14 2 1 1 8 6 12 2 1 12 16 14 2 1 17 12 1 13 11 2 2 SANITIZER 10 MIN 15 MIN O MIN 5 MIN 10 MIN 15 MIN 4 3 1 6 5 2 1 6 6 1 0 7 5 1 1 1 8 6 2 0 8 8 1 0 1 1 9 7 2 0 6 4 2 0 10 2 1 9 7 1 0 5 4 2 0 16 14 1 1 8 5 1 0 8 4 2 0 1 17 15 1 0 10 8 2 0 6 4 1 0 0 16 11 1 0 6 5 1 0 8 5 2 0 Tabla No. 11 Superficie analizada Techo. SUPERFICIE ANALIZADA TECHO RECUENTO MESOFILOS UFC/20 cm SUMA-SOL Marmita 300 Mezclador en V Tanque de fabricación O MIN 5 MIN 6 2 RECUENTO MOHOS Y LEVADURAS UFC/20 cm SANITIZER 10 MIN 15 MIN O MIN 5 MIN 5 2 1 11 15 15 1 1 SUMA-SOL 10 MIN 15 MIN O MIN 5 MIN 6 0 1 4 17 12 0 0 2 SANITIZER 10 MIN 15 MIN O MIN 5 MIN 10 MIN 15 MIN 3 1 0 6 5 1 1 6 6 2 1 7 6 0 0 17 15 1 1 15 11 2 1 7 7 2 0 7 5 2 0 Tableteadora Envasadora tabletas Envasadora líquidos Envasadora Polvos. 15 13 1 1 17 13 2 1 7 4 2 0 7 5 0 0 16 14 2 1 12 10 1 1 6 3 1 0 6 5 2 0 9 7 2 1 11 10 2 1 8 4 2 0 6 4 2 0 20 17 1 1 10 5 2 0 6 5 1 0 4 4 2 0 Pesaje. 16 14 1 0 15 7 1 1 8 6 1 0 6 6 1 0 66 La situación anteriormente nombrada, pudo presentarse a que los operarios encargados de la limpieza y la desinfección de las áreas no se acoplan a los POE´S establecidos, ya que cuando se inspeccionó su labor, se observó que no se intensifica la limpieza en estas superficies particulares. Los valores muestran que el proceso de sanitización no es uniforme y que no se lleva a cabo tal como se describe en el POE correspondiente. Además, comenzado este estudio preliminar y a medida que se iba desarrollando, los valores en el recuento microbiológico disminuyeron, debido a que los operarios intensificaron la limpieza como respuesta a la labor de inspección, sin significar una disminución considerable de la contaminación presente en estas superficies. Las gráficas 4, 5 y 6 muestran a pesar de los considerables recuentos iniciales una disminución significativa de las unidades formadoras de colonias luego de aplicar los correspondientes desinfectantes. Así mismo, se observa como la relación tiempodesinfectante influye de manera directa sobre los microorganismos y hongos encontrados. Además, la acción bactericida del Suma-sol, desinfectante a base de cloro fue demostrada al disminuir los recuentos considerablemente, ya que su mecanismo de acción se centra en la inhibición de enzimas esenciales por oxidación de los grupos S-H y a su capacidad para producir cambios en la permeabilidad de la membrana celular. (E. A. Vives, 2004). Así mismo se demostró la efectividad para el desinfectante SANITIZER. Teniendo en cuenta lo anterior, los resultados obtenidos en este estudio concuerdan con lo reportado bibliográficamente, pues se observa su efectividad al disminuir considerablemente la carga microbiana, como puede observarse en las graficas. 67 Gráfica No. 4 Evaluación de los desinfectantes SUMASOL y SANITIZER en superficies (Piso) 68 Gráfica No. 5 Evaluación de los desinfectantes SUMASOL y SANITIZER en superficies (Pared) 69 Gráfica No. 6 Evaluación de los desinfectantes SUMASOL y SANITIZER en superficies (Techos) 70 6. 5 Análisis Estadístico de Resultados Los resultados obtenidos se analizaron estadísticamente por medio del análisis de varianza bifactorial para varias muestras por grupo, con un nivel de confianza del 95%, para este fin se plantearon las siguientes hipótesis: - Hipótesis nula (Ho): La efectividad de los desinfectantes es igual en todos los tiempos y para todos los microorganismos evaluados. - Hipótesis alterna (Hi): La efectividad de los desinfectantes es diferente en todos los tiempos y para todos los microorganismos evaluados. Decisión: Para todo valor de probabilidad igual o menor a 0.05, se acepta la hipótesis alterna y por ende se rechaza la nula. 71 7. CONCLUSIONES - Se determinó que las concentraciones de los desinfectantes utilizadas en el proceso de limpieza y desinfección de áreas y equipos para la fabricación de productos fitoterapéuticos en LABORATORIOS PRONABELL LTDA, fueron efectivas, mostrando la eliminación de la carga microbiana presente a través de cada uno de los tiempos evaluados, 5, 10 y 15 minutos respectivamente. - Mediante la técnica del coeficiente fenólico, se determinó el desempeño de los desinfectantes en uso, evaluando las concentraciones utilizadas en el Laboratorio, determinando su efectividad con los microorganismos propuestos por la AOAC. - En las areas evaluadas se encontró una mayor incidencia de Bacilos Gram positivos, seguida de hongos filamentosos como Penicillum sp y Rhizopus sp, Levaduras y cocos Gram Positivos. - Los tiempos evaluados para cada uno de los desinfectantes en áreas y equipos, mostraron que se requirieron tiempos de contacto superiores a 5 minutos para la eliminación de la carga microbiana presente, lo cual concuerda con la técnica del coeficiente fenólico que busca eliminar los microorganismos a los 10 pero no a los 5 minutos. - De acuerdo con los resultados obtenidos, se determinó que los POEs establecidos son los apropiados para realizar los procedimientos de limpieza y desinfección en las áreas y equipos de LABORATORIOS PRONABELL LTDA. 72 8. RECOMENDACIONES Desde una perspectiva microbiológica y tal como lo recomienda la USP, respecto a programas para monitorear ambientes y equipos, se recomienda extender a todas las demás áreas del laboratorio el control microbiológico, para llevar a cabo una extensiva limpieza y desinfección de este y así evitar cualquier tipo de contaminación cruzada. Se recomienda realizar una caracterización de los microorganismos presentes en las áreas evaluadas, con el fin de conocer la carga microbiana propia de los ambientes y superficies, para que de esta manera, se proceda a la selección de los agentes desinfectantes y las concentraciones a emplear en un protocolo de desinfección. En caso de emplearse un nuevo desinfectante o de cambiar la concentración de los desinfectantes actualmente utilizados, deberán ser nuevamente evaluados para verificar su efectividad. Este trabajo debe complementarse con la validación de los procedimientos de limpieza y desinfección tanto para equipos como para las áreas del Laboratorio, así permitiendo obtener datos más precisos y confiables. 73 9. BIBLIOGRAFIA ALDANA, L y SARASSA, S. 1999. Efecto de desinfectantes y antimicrobianos naturales frente a capas de Listeria monocytogenes. Pregrado. Pontificia Universidad Javeriana. Facultad de Ciencias. Departamento de Microbiología. Bogotá. Colombia. AOAC. 2000. Official methods of analysis of AOAC international. Vol.1. Association of Official Analytical Chemist. 17 th edition. Azanza JR, Sádaba B, Mediavilla A, Flórez J. 2003. Quinolonas. Sulfamidas. Trimetoprima. Cotrimoxazol. Nitrofurantoína. Antisépticos. En: Flórez J, Armijo JA, Mediavilla A, ed. Farmacología Humana, 4ta edición. Masson. Barcelona. pp: 1169 - 86. BLOOCK, S. 1994. Desinfection, sterilization and preservation. 4thedition. Philadelphia. Lea & Fegiber. Daniel, W. 2002. Bioestadística. Base para el análisis de las ciencias de la salud. Ed. Limusa Wyley S.A. México. E. A. Vives, V. Posse, M. L. Oyarvide, G. Pérez Marc, D. Medvedovsky y R. Rothlin. Antisépticos y desinfectantes. 2004 Hayes, P.R. 2002. Higiene de los alimentos, microbiología y HACCP. 2ª edición. Zaragoza, España. Editorial Acribia, S.A. 359-386. Manacorda A. M., Maistegui E. I., Cuadros D. P y Álvarez A. S. 2007 MANUAL PRÁCTICO DE MICROBIOLOGÍA - Tomo II: Microbiología Ambiental II. 74 Martínez. J. 2005. Desinfección. . Medicina Veterinaria. Facultad de ciencias Agrarias. Universidad de Antioquia. Medellín. Pág. 11 McDonnell G, Russell D. 1999. Antiseptics and Disinfectants: Activity, Action, and Resistance. Clin Microb Rev; 12(1): 147 - 79. Poole K. 2002. Mechanisms of bacterial biocide and antibiotic resistance. J Appl Microbiol; 92: 55S-64S. Rusell AD. 2002. Mechanisms of antimicrobial action of antiseptics and disinfectants: an increasingly important area of investigation. J Antimicrob Chemother; 49:597 - 9. USP, 2008. Farmacopea de los Estados Unidos de América. Formulario Nacional. Edición Anual en Español. Volúmen 1. pgs 542-546. http: www.academia.cat/societats/famcl/libre/higiene/332.pdf http//colegioqfb.org.mex/resenas/guiavalidacion/htm. http://www.lenntech.com/espanol/Desinfeccion-del-agua/desinfectantes hipoclorito-de-sodio.htm. http://mail.fq.edu.uy/~microbio/MGral/practico/tercerciclo.doc http://www.saludybienestar.org/pdf/timsen.pdf www.ucv.ve.farmacia/micro_web/catedras02. Tema14.pdf 75 ANEXOS Anexo 1. Fotografía de Penicillium sp. y Rhizopus sp. Penicillium sp. Anexo 2. Fotografía Técnica Coeficiente fenólico. 76 Rhizopus s.p Anexo 3. Tabla de los Límites de partículas según Federal Standard 209E. Class Name Class Limits 0.1m m 0.2m m 0.3m m 0.5m m 5m m Volume Volume Volume Volume Volume Units Units Units Units Units SI English (m^3) (ft^3) (m^3) (ft^3) (m^3) (ft^3) (m^3) (ft^3) (m^3) (ft^3) M1 350 9.91 75.7 2.14 30.9 0.875 10.0 0.283 --M 1 1 240 35.0 265 7.50 106 3.00 35.3 1.00 --1.5 M2 3 500 99.1 757 21.4 309 8.75 100 2.83 --M 10 12 400 350 2 650 75.0 1 060 30.0 353 10.0 --2.5 M3 35 000 991 7 570 214 3 090 87.5 1 000 28.3 --M 100 --- 26 500 750 10 600 300 3 530 100 --3.5 M4 --- 75 700 2 140 30 900 875 10 000 283 --M 1 000 ------- 35 300 1 000 247 7.00 4.5 M5 ------- 100 000 2 830 618 17.5 M 10 000 ------- 353 000 10 000 2 470 70.0 5.5 1 000 M6 ------28 300 6 180 175 000 M 100 3 350 100 ------24 700 700 6.5 000 000 000 10 000 283 M7 ------61 800 1 750 000 000 77 Anexo 4. Tabla de Análisis de varianza ANÁLISIS DE VARIANZA Origen de Suma de las cuadrados variaciones Filas 5,583333333 Grados de libertad 3 Promedio de los F Probabilidad cuadrados 1,861111111 5,15385 0,0424691 Columnas 36,5 2 18,25 Error 2,166666667 6 0,361111111 Total 44,25 11 78 50,5385 0,00017594 Valor crítico para F 4,757062664 5,14325285 Anexo 5. Tabla de Recuentos de sedimentación en el equipo MARMITA 300. SEDIMENTACIÓN MARMITA 300 RECUENTO MESÓFILOS . M6 M1 M2 M3 M4 X M5 M7 M8 X ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ DIA placa. placa. placa. placa. placa. placa. placa. placa. placa. placa. 1 3 4 3 5 4 5 6 4 4 5 2 2 4 4 4 4 5 3 4 5 4 3 4 3 7 2 4 3 6 5 4 5 4 5 8 5 5 6 6 5 3 2 4 5 3 3 3 4 3 5 2 5 6 5 6 4 9 8 5 7 5 6 5 5 5 7 1 5 2 2 3 6 4 6 2 5 8 6 2 1 3 3 4 2 5 5 4 9 2 7 5 5 5 4 3 4 2 3 10 6 2 3 4 4 5 5 4 4 5 11 5 6 6 2 5 5 3 5 6 5 12 6 3 4 5 5 3 2 3 2 3 13 8 8 2 5 6 3 6 2 5 4 14 4 2 5 3 4 2 5 2 2 3 15 5 4 2 2 3 3 2 1 2 2 X 4 4 RECUENTO HONGOS Y LEVADURAS. M6 M1 M2 M3 M4 X M5 M7 M8 X ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ DIA placa. placa. placa. placa. placa. placa. placa. placa. placa. placa. 1 4 5 5 4 5 6 4 5 6 5 2 2 6 4 5 4 5 5 5 5 5 3 5 5 5 4 5 7 6 7 5 6 4 2 7 5 4 5 5 2 5 4 4 5 5 3 6 5 5 6 5 6 6 6 6 4 5 5 4 5 7 2 5 2 4 7 3 4 4 6 4 5 5 6 6 6 8 2 5 5 5 4 6 3 6 5 5 9 6 5 2 8 5 6 5 5 4 5 10 2 5 2 6 4 5 5 4 3 4 11 3 6 6 7 6 4 4 3 5 4 12 5 8 5 5 6 5 5 3 5 5 13 2 5 6 4 4 5 4 7 4 5 14 5 7 5 6 6 3 6 5 6 5 15 4 4 5 5 5 2 3 3 5 3 X 5 5 79 GRAM Cocos Gram Positivos Bacilos Gram Positivos Bacilos Gram Positivos Cocos Gram Positivos Bacilos Gram Positivos Bacilos Gram Positivos Cocos Gram Positivos Bacilos Gram Positivos Bacilos Gram Positivos Bacilos Gram Positivos Cocos Gram Positivos Bacilos Gram Positivos Bacilos Gram Positivos Cocos Gram Positivos Bacilos Gram Positivos AZUL DE LACTOFENOL Penicillium sp. Levaduras Penicillium sp. Penicillium sp. Penicillium sp.y Levaduras Levaduras Penicillium sp. Penicillium sp. Penicillium sp. Levaduras Penicillium sp. Penicillium sp. Penicillium sp. Levaduras Penicillium sp. Anexo 6. Tabla de Recuentos de sedimentación en el equipo MEZCLADOR V. SEDIMENTACIÓN MEZCLADOR V RECUENTO MESÓFILOS . M6 M1 M2 M3 M4 X M5 M7 M8 X ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ DIA placa. placa. placa. placa. placa. placa. placa. placa. placa. placa. 1 5 4 5 6 5 5 4 5 3 4 2 5 5 3 4 4 4 5 6 4 5 3 5 5 6 4 5 6 5 5 7 6 4 5 5 6 6 6 5 6 7 8 7 5 6 8 6 8 7 5 9 10 8 8 6 2 6 9 8 6 6 3 5 8 6 7 5 5 3 5 5 9 8 7 9 8 8 9 9 3 5 7 5 7 9 9 8 9 7 6 5 9 7 6 4 4 7 5 10 7 6 5 9 7 3 7 9 8 7 11 5 8 5 6 6 5 7 6 5 6 12 9 4 8 6 7 9 8 11 7 9 13 11 7 7 5 8 5 6 9 6 7 14 10 5 5 4 6 7 9 7 4 7 15 5 6 5 3 5 7 10 6 4 7 X 6 6 RECUENTO MOHOS Y LEVADURAS. M6 M1 M2 M3 M4 X M5 M7 M8 X ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ DIA placa. placa. placa. placa. placa. placa. placa. placa. placa. placa. 1 4 7 9 6 7 7 6 4 9 7 2 9 9 6 8 8 9 8 8 8 8 3 6 6 8 5 6 6 9 6 6 7 4 8 8 7 7 8 8 3 9 3 6 5 9 5 5 9 7 4 6 3 5 5 6 5 6 9 6 7 7 5 5 7 6 7 7 5 6 6 6 5 8 6 6 6 8 8 8 6 4 7 3 9 9 4 6 9 6 10 9 7 8 6 7 10 9 8 10 10 5 8 8 8 9 7 8 8 8 11 5 4 7 6 6 8 5 5 6 6 12 9 8 5 8 8 7 8 3 8 7 13 8 9 8 5 8 5 5 6 5 5 14 6 8 9 4 7 4 6 8 9 7 15 4 9 6 7 7 7 6 3 8 6 X 7 6 80 GRAM Bacilos Gram Positivos Bacilos Gram Positivos Cocos Gram Positivos Bacilos Gram Positivos Cocos Gram Positivos Bacilos Gram Positivos Bacilos Gram Positivos Cocos Gram Positivos Bacilos Gram Positivos Bacilos Gram Positivos Cocos Gram Positivos Cocos Gram Positivos Bacilos Gram Positivos Cocos Gram Positivos Bacilos Gram Positivos AZUL DE LACTOFENOL Penicillium sp.y Levaduras Levaduras Levaduras Levaduras Penicillium sp. Penicillium sp.y Levaduras Penicillium sp. Levaduras Levaduras Levaduras Penicillium sp. Penicillium sp. Penicillium sp.y Levaduras Penicillium sp.y Levaduras Levaduras Anexo 7. Tabla de Recuentos de sedimentación en el equipo TABLETEADORA. SEDIMENTACIÓN TABLETEADORA RECUENTO MESÓFILOS . M6 M1 M2 M3 M4 X M5 M7 M8 X ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ DIA placa. placa. placa. placa. placa. placa. placa. placa. placa. placa. 1 7 8 9 4 7 9 7 4 9 7 2 6 6 8 9 7 8 8 7 8 8 3 8 9 6 6 7 5 9 6 9 7 4 9 3 5 8 6 7 8 9 6 8 5 3 5 7 5 5 9 6 3 8 7 6 5 8 9 7 7 6 9 5 5 6 7 8 9 8 4 7 5 5 8 7 6 8 9 6 6 9 8 8 3 7 6 6 9 6 7 5 6 6 4 9 4 3 5 10 7 4 9 5 6 3 8 9 5 6 11 10 8 8 8 9 9 7 6 9 8 12 5 5 4 9 6 8 4 8 9 7 13 8 6 7 7 7 4 6 6 8 6 14 9 9 8 5 8 5 8 6 4 6 15 5 3 9 4 5 6 5 7 7 6 X 7 7 RECUENTO MOHOS Y LEVADURAS. M6 M1 M2 M3 M4 X M5 M7 M8 X ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ DIA placa. placa. placa. placa. placa. placa. placa. placa. placa. placa. 1 4 5 5 4 5 6 4 5 6 5 2 2 6 4 5 4 5 5 5 7 6 3 5 5 5 4 5 7 6 7 5 6 4 2 7 5 4 5 5 2 5 4 4 5 5 3 6 5 5 6 5 6 6 6 6 4 5 5 4 5 7 2 5 2 4 7 3 4 4 6 4 5 5 6 6 6 8 2 5 5 5 4 6 3 6 5 5 9 6 5 2 8 5 6 5 5 4 5 10 2 5 2 6 4 5 5 4 3 4 11 3 6 6 7 6 4 4 3 5 4 12 5 8 5 5 6 5 5 3 5 5 13 2 5 6 4 4 5 4 7 4 5 14 5 7 5 6 6 3 6 5 6 5 15 4 4 5 5 5 2 3 3 5 3 X 5 5 81 GRAM Bacilos Gram Positivos Bacilos Gram Positivos Bacilos Gram Positivos Cocos Gram Positivos Cocos Gram Positivos Bacilos Gram Positivos Bacilos Gram Positivos Cocos Gram Positivos Bacilos Gram Positivos Bacilos Gram Positivos Cocos Gram Positivos Bacilos Gram Positivos Bacilos Gram Positivos Bacilos Gram Positivos Cocos Gram Positivos AZUL DE LACTOFENOL Levaduras Levaduras Levaduras Penicillium sp.y Levaduras Penicillium sp. Penicillium sp. Penicillium sp.y Levaduras Levaduras Levaduras Penicillium sp.y Levaduras Penicillium sp.y Levaduras Penicillium sp. Penicillium sp. Levaduras Levaduras Anexo 8. Tabla de Recuentos de sedimentación en el equipo Envasadora de Polvos. SEDIMENTACIÓN ENVASADORA DE POLVOS RECUENTO MESÓFILOS . M6 M1 M2 M3 M4 X M5 M7 M8 X ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ DIA placa. placa. placa. placa. placa. placa. placa. placa. placa. placa. 1 7 6 4 6 6 6 6 9 5 7 2 6 8 7 8 7 8 5 6 7 7 3 9 6 10 8 8 9 9 5 6 7 4 8 7 11 7 8 5 6 8 8 7 5 10 11 10 9 10 3 8 4 7 6 6 5 5 8 6 6 9 4 6 6 6 7 8 8 9 7 8 8 8 3 2 5 8 9 9 8 8 9 4 5 5 3 4 9 6 6 7 8 7 5 7 8 5 6 10 3 3 8 6 5 8 7 3 4 6 11 5 9 9 8 8 9 5 6 6 7 12 8 8 6 9 8 6 9 9 5 7 13 7 7 9 9 8 5 6 2 6 5 14 6 6 8 7 7 8 3 5 4 5 15 9 7 9 6 8 8 3 4 5 5 X 7 6 RECUENTO MOHOS Y LEVADURAS. M6 M1 M2 M3 M4 X M5 M7 M8 X GRAM Bacilos Gram Positivos Bacilos Gram Positivos Cocos Gram Positivos Bacilos Gram Positivos Cocos Gram Positivos Bacilos Gram Positivos Bacilos Gram Positivos Cocos Gram Positivos Bacilos Gram Positivos Bacilos Gram Positivos Cocos Gram Positivos Cocos Gram Positivos Bacilos Gram Positivos Bacilos Gram Positivos Bacilos Gram Positivos AZUL DE LACTOFENOL ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ DIA placa. placa. placa. placa. placa. placa. placa. placa. placa. placa. Penicillium sp. 1 8 5 6 6 6 9 8 10 8 9 Penicillium sp. y Levaduras 2 11 11 8 8 10 8 9 9 6 8 3 9 1 9 6 6 6 8 8 9 8 Levaduras 4 6 5 6 5 6 8 6 9 11 9 Levaduras 5 8 9 7 7 8 7 5 11 10 8 Levaduras 6 3 6 8 8 6 5 7 8 5 6 Levaduras Penicillium sp. 7 5 8 6 11 8 7 8 9 9 8 Penicillium sp. 8 7 6 9 10 8 9 9 7 8 8 Penicillium sp. y Levaduras 9 8 11 8 8 9 8 6 9 6 7 10 9 5 11 9 9 6 9 8 8 8 Levaduras 11 3 9 7 6 6 8 8 9 7 8 Levaduras Penicillium sp. y Levaduras 12 5 9 9 9 8 9 10 8 6 8 Penicillium sp. y Levaduras 13 4 8 6 8 7 5 8 6 9 7 14 7 7 12 9 9 9 11 8 10 10 Levaduras 15 6 9 15 7 9 9 9 7 5 8 Levaduras X 8 8 82 Anexo 9. Tabla de Recuentos de sedimentación en el equipo Envasadora de Líquidos. M1 M2 M3 SEDIMENTACIÓN ENVASADORA LIQUIDOS RECUENTO MESÓFILOS . M6 M4 X M5 M7 M8 X ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ DIA placa. placa. placa. placa. placa. placa. placa. placa. placa. placa. 1 7 8 8 4 7 7 9 8 6 8 2 6 9 6 9 8 8 8 10 9 9 3 3 6 9 6 6 9 6 11 8 9 4 5 3 3 8 5 6 5 5 5 5 5 2 7 5 7 5 3 4 6 6 5 6 4 8 7 10 7 5 7 9 8 7 7 8 5 8 11 8 8 8 8 7 8 8 6 6 9 5 7 9 2 5 4 5 9 9 4 10 6 7 6 9 6 6 7 10 6 10 5 9 8 4 8 4 3 5 11 8 8 6 8 8 7 6 9 5 7 12 4 9 9 8 8 7 5 8 9 7 13 2 7 8 7 6 8 9 7 10 9 14 6 9 3 7 6 9 8 6 7 8 15 8 6 5 9 7 8 7 8 7 8 X 7 7 RECUENTO MOHOS Y LEVADURAS. M6 M1 M2 M3 M4 X M5 M7 M8 X GRAM Bacilos Gram Positivos Cocos Gram Positivos Bacilos Gram Positivos Bacilos Gram Positivos Cocos Gram Positivos Cocos Gram Positivos Bacilos Gram Positivos Bacilos Gram Positivos Bacilos Gram Positivos Cocos Gram Positivos Bacilos Gram Positivos Bacilos Gram Positivos Cocos Gram Positivos Bacilos Gram Positivos Bacilos Gram Positivos AZUL DE LACTOFENOL ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ DIA placa. placa. placa. placa. placa. placa. placa. placa. placa. placa. Levaduras 1 6 7 5 8 7 7 5 7 6 6 2 10 4 6 6 7 9 10 10 8 9 Levaduras Penicillium sp. 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 5 9 6 8 4 7 11 16 5 8 6 3 15 10 9 8 6 8 3 5 9 8 5 6 83 8 7 4 3 6 5 8 9 8 6 8 9 5 9 3 5 7 8 9 3 6 5 4 6 8 9 6 6 6 7 8 8 7 7 6 6 6 8 5 3 4 8 9 6 3 5 4 7 12 5 8 6 11 6 8 9 6 6 7 8 8 9 6 8 9 7 8 6 9 8 4 5 9 6 8 7 4 8 9 6 8 5 6 9 9 7 7 6 7 7 9 7 7 6 5 7 Penicillium sp.y Levaduras Penicillium sp.y Levaduras Penicillium sp. Penicillium sp. Penicillium sp.y Levaduras Penicillium sp.y Levaduras Levaduras Levaduras Penicillium sp. Levaduras Penicillium sp.y Levaduras Anexo 10. Tabla de Recuentos de sedimentación en el equipo Tanque Almacenamiento. M1 M2 M3 SEDIMENTACIÓN TANQUE DE ALMACENAMIENTO RECUENTO MESÓFILOS . M6 M4 X M5 M7 M8 X ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ DIA placa. placa. placa. placa. placa. placa. placa. placa. placa. placa. 1 8 9 8 7 8 7 8 7 7 7 2 9 6 9 8 8 6 9 6 8 7 3 6 10 6 6 7 9 6 5 6 7 4 8 11 7 3 7 8 8 8 5 7 5 7 12 8 5 8 8 7 7 8 8 6 5 5 5 9 6 7 1 9 9 7 7 8 8 1 4 5 5 2 8 3 5 8 6 9 4 8 7 9 9 6 5 7 9 5 6 9 2 6 6 8 5 8 7 10 8 7 6 5 7 5 6 8 9 7 11 4 8 3 9 6 8 4 9 8 7 12 9 6 5 6 7 9 8 9 4 8 13 7 8 8 6 7 3 5 6 3 4 14 6 9 8 8 8 5 6 8 5 6 15 5 3 5 2 4 8 6 8 7 7 X 7 7 RECUENTO MOHOS Y LEVADURAS. M6 M1 M2 M3 M4 X M5 M7 M8 X GRAM Bacilos Gram Positivos Bacilos Gram Positivos Cocos Gram Positivos Bacilos Gram Positivos Bacilos Gram Positivos Bacilos Gram Positivos Bacilos Gram Positivos Cocos Gram Positivos Cocos Gram Positivos Bacilos Gram Positivos Bacilos Gram Positivos Bacilos Gram Positivos Bacilos Gram Positivos Cocos Gram Positivos Bacilos Gram Positivos AZUL DE LACTOFENOL ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ DIA placa. placa. placa. placa. placa. placa. placa. placa. placa. placa. Levaduras 1 4 7 8 9 7 7 9 8 7 8 2 8 11 7 4 8 9 6 10 8 8 Levaduras Penicillium sp.y Levaduras 3 6 9 9 8 8 8 8 11 7 9 Penicillium sp. 4 7 6 8 8 7 6 4 10 6 7 Penicillium sp. 5 5 8 7 9 7 9 10 7 8 9 6 9 5 5 6 6 8 5 8 7 7 Levaduras 7 6 10 6 8 8 5 8 9 4 7 Levaduras Penicillium sp.y Levaduras 8 2 8 9 6 6 7 6 6 6 6 Penicillium sp. 9 4 9 10 9 8 4 3 8 9 6 Penicillium sp. 10 7 11 11 7 9 9 4 5 8 7 11 8 9 8 8 8 8 10 3 3 6 Levaduras 12 5 8 7 8 7 6 11 9 5 8 Levaduras 13 6 11 9 6 8 8 8 5 8 7 Levaduras Penicillium sp.y Levaduras 14 9 15 8 9 10 7 9 4 6 7 15 3 8 6 5 6 9 6 8 9 8 Levaduras X 8 7 84 Anexo 11. Tabla de Recuentos de sedimentación en el equipo Envasadora de Tabletas. M1 M2 M3 SEDIMENTACIÓN ENVASADORA DE TABLETAS. RECUENTO MESÓFILOS . M6 M4 X M5 M7 M8 X ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ DIA placa. placa. placa. placa. placa. placa. placa. placa. placa. placa. 1 4 4 3 4 4 7 8 9 6 8 2 8 5 5 7 6 6 6 6 5 6 3 9 2 8 8 7 8 7 8 9 8 4 7 9 2 9 7 2 8 7 8 6 5 3 6 4 6 5 5 5 5 7 6 6 8 8 9 3 7 9 9 8 10 9 7 4 4 7 5 5 3 6 6 11 7 8 8 3 6 7 6 9 3 3 5 5 9 6 8 5 8 7 8 8 5 6 7 10 3 5 3 2 3 3 7 7 8 6 11 5 9 8 4 7 4 2 9 6 5 12 7 7 6 8 7 5 5 8 3 5 13 4 1 9 3 4 7 4 6 5 6 14 8 5 5 9 7 6 9 5 8 7 15 2 3 4 5 4 8 6 8 9 8 X 6 6 RECUENTO MOHOS Y LEVADURAS. M6 M1 M2 M3 M4 X M5 M7 M8 X ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ ufc/ DIA placa. placa. placa. placa. placa. placa. placa. placa. placa. placa. 1 7 5 6 7 6 6 6 7 6 6 2 6 7 4 4 5 6 9 8 7 8 3 6 7 4 4 5 3 7 5 7 6 4 7 5 7 5 6 5 8 9 8 5 5 7 5 8 5 6 4 8 10 5 7 6 8 6 8 4 7 6 10 8 9 8 7 6 4 7 5 6 5 9 9 9 8 8 5 7 5 6 6 7 8 9 6 8 9 6 7 4 6 6 8 8 8 8 8 10 7 5 6 8 7 9 7 7 5 7 11 8 9 6 6 7 9 9 6 9 8 12 5 8 6 9 7 7 9 8 8 8 13 7 6 5 7 6 9 5 5 6 6 14 9 6 9 8 8 5 8 7 4 6 15 8 5 8 7 7 5 8 8 5 7 X 6 7 85 GRAM Bacilos Gram Positivos Bacilos Gram Positivos Cocos Gram Positivos Bacilos Gram Positivos Bacilos Gram Positivos Cocos Gram Positivos Cocos Gram Positivos Bacilos Gram Positivos Bacilos Gram Positivos Bacilos Gram Positivos Cocos Gram Positivos Bacilos Gram Positivos Cocos Gram Positivos Cocos Gram Positivos Bacilos Gram Positivos AZUL DE LACTOFENOL Penicillium sp. y Levaduras Levaduras Penicillium sp. y Levaduras Aspergillus niger Aspergillus niger Levaduras Levaduras Levaduras Penicillium sp. Penicillium sp. Penicillium sp. Levaduras Levaduras Penicillium sp.y Levaduras Penicillium sp.y Levaduras Anexo 12. Tabla de Recuentos de Hisopado en el Equipo MARMITA 300 con TEGO51 y Etanol 70%. HISOPADO EQUIPO MARMITA 300 TEGO 51 E. coliMOHOS Y LEV coliformes Salmonella s.p MESÓFILOS X M1 Min 0 5 10 15 X M2 XM3 X ufc/ placa. 3 2 1 2 4 2 2 0 Min 0 5 10 15 X M2 XM3 X XM1 ufc/ placa. 3 2 1 0 3 2 1 1 MESÓFILOS X M1 X M1 X M2 XM3 ufc/ placa. 3 2 2 1 2 1 1 2 2 2 1 2 X 2 1 2 2 X M2 XM3 X M1 A/P X M2 XM3 XM1 A/P 4 4 2 3 5 4 4 Ausencia Ausencia 4 4 4 Ausencia Ausencia 3 3 3 Ausencia Ausencia 0 0 1 Ausencia Ausencia HISOPADO EQUIPO MARMITA ETANOL 70% E. coliMOHOS Y LEV coliformes Salmonella s.p X M1 X M2 XM3 ufc/ placa. 6 4 6 6 5 4 1 3 2 3 1 0 X 5 5 2 1 XM1 X M2 S. aureus XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia X M1 XM1 XM2 XM3 A/P A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia S. aureus P. aeruginosa. X M2 XM3 XM1 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia XM2 XM3 P. aeruginosa. XM2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia XM1 XM2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Anexo 13. Tabla de Recuentos de Hisopado en el Equipo MEZCLADOR V con TEGO 51 y Etanol 70%. HISOPADO EQUIPO MEZCLADOR EN V TEGO 51 E. coliMOHOS Y LEV coliformes Salmonella s.p MESÓFILOS X M1 Min 0 5 10 15 X M2 XM3 ufc/ placa. 2 2 1 3 2 1 0 0 1 0 0 0 X 2 2 0 0 MESÓFILOS X M1 Min 0 5 10 15 X M2 XM3 ufc/ placa. 6 5 5 2 3 4 1 0 2 1 0 1 86 X 5 3 1 1 X M1 X M2 XM3 X XM1 X M2 XM3 X M1 X M2 XM3 XM1 ufc/ placa. A/P A/P 4 5 6 5 Ausencia Ausencia 3 2 4 3 Ausencia Ausencia 1 2 1 1 Ausencia Ausencia 2 2 1 2 Ausencia Ausencia HISOPADO EQUIPO MEZCLADOR EN V ETANOL 70% E. coliMOHOS Y LEV coliformes Salmonella s.p X M1 X M2 XM3 ufc/ placa. 6 7 5 3 4 4 3 1 1 3 3 1 X 6 4 2 2 XM1 X M2 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia XM3 X M1 S. aureus XM1 XM2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia S. aureus P. aeruginosa. X M2 XM3 XM1 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia XM2 XM3 P. aeruginosa. XM2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia XM1 XM2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Anexo 14. Tabla de Recuentos de Hisopado en el Equipo Tanque de Fabricación con TEGO 51 y Etanol 70%. HISOPADO EQUIPO TANQUE FABRICACION EN TEGO 51 E. coliMOHOS Y LEV coliformes Salmonella s.p S. aureus MESÓFILOS X M1 Min 0 5 10 15 X M2 XM3 ufc/ placa. 6 5 6 3 3 2 1 2 2 1 2 2 X 6 3 2 2 MESÓFILOS X M1 Min 0 5 10 15 X M2 XM3 ufc/ placa. 0 1 1 1 1 0 2 0 2 0 0 0 X X M1 X M2 XM3 X XM1 X M2 XM3 X M1 X M2 XM3 XM1 XM2 XM3 ufc/ placa. A/P A/P A/P 2 3 2 2 Ausencia Ausencia Ausencia 3 1 2 2 Ausencia Ausencia Ausencia 1 1 0 1 Ausencia Ausencia Ausencia 2 1 1 1 Ausencia Ausencia Ausencia HISOPADO EQUIPO TANQUE FABRICACIÓN ETANOL 70% E. coliMOHOS Y LEV coliformes Salmonella s.p S. aureus X M1 X M2 XM3 ufc/ placa. 5 5 4 3 3 4 2 3 3 2 2 3 1 1 2 0 X XM1 X M2 XM3 X M1 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia 5 3 3 2 X M2 XM3 XM1 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia XM2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia P. aeruginosa. XM1 XM2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia P. aeruginosa. XM1 XM2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Anexo 15. Tabla de Recuentos de Hisopado en el Equipo Tableteadora con TEGO 51 y Etanol 70%. HISOPADO EQUIPO TABLETEADORA TEGO 51 E. coliMOHOS Y LEV coliformes Salmonella s.p MESÓFILOS X M1 Min 0 5 10 15 X M2 XM3 ufc/ placa. 1 3 1 2 2 2 0 1 3 1 0 1 X 2 2 2 1 MESÓFILOS X M1 Min 0 5 10 15 X M2 XM3 ufc/ placa. 4 4 6 5 6 5 4 1 2 2 2 2 87 X 5 5 2 2 X M1 X M2 XM3 X XM1 X M2 XM3 X M1 X M2 XM3 ufc/ placa. A/P A/P 5 8 5 6 Ausencia Ausencia 5 3 3 4 Ausencia Ausencia 0 2 3 2 Ausencia Ausencia 1 0 0 0 Ausencia Ausencia HISOPADO EQUIPO TABLETEADORA ETANOL 70% E. coliMOHOS Y LEV coliformes Salmonella s.p X M1 X M2 XM3 ufc/ placa. 4 3 4 3 2 2 2 2 3 2 0 0 X 4 2 2 1 XM1 X M2 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia XM3 X M1 X M2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia S. aureus P. aeruginosa. XM1 XM2 XM3 XM1 XM2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia S. aureus P. aeruginosa. XM1 XM2 XM3 XM1 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia XM2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Anexo 16. Tabla de Recuentos de Hisopado en el Equipo Envasadora Tabletas con TEGO 51 y Etanol 70%. HISOPADO EQUIPO ENVASADORA TABLETAS TEGO 51 E. coliMOHOS Y LEV coliformes Salmonella s.p S. aureus MESÓFILOS X M1 Min 0 5 10 15 X M2 XM3 ufc/ placa. 1 1 0 1 0 2 0 1 0 0 2 1 X 1 1 0 1 MESÓFILOS X M1 Min 0 5 10 15 X M2 XM3 ufc/ placa. 5 4 6 5 4 3 3 1 1 2 1 0 X 5 4 2 1 X M1 X M2 XM3 X XM1 X M2 XM3 X M1 X M2 XM3 XM1 XM2 XM3 ufc/ placa. A/P A/P A/P 2 3 2 2 Ausencia Ausencia Ausencia 1 2 3 2 Ausencia Ausencia Ausencia 0 2 1 1 Ausencia Ausencia Ausencia 0 2 0 1 Ausencia Ausencia Ausencia HISOPADO EQUIPO ENVASADORA TABLETAS ETANOL 70% E. coliMOHOS Y LEV coliformes Salmonella s.p S. aureus X M1 X M2 XM3 ufc/ placa. 6 4 4 2 5 4 3 2 2 0 1 1 X 5 4 2 1 XM1 X M2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia X M1 X M2 XM3 XM1 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia XM2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia P. aeruginosa. XM1 XM2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia P. aeruginosa. XM1 XM2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Anexo 17. Tabla de Recuentos de Hisopado en el Equipo Envasadora Polvos con TEGO 51 y Etanol 70%. ENVASADORA POLVOS TEGO 51 E. coliMOHOS Y LEV coliformes Salmonella s.p MESÓFILOS X M1 Min 0 5 10 15 X M2 XM3 ufc/ placa. 4 5 3 3 0 2 0 2 0 0 0 1 X 4 2 1 0 MESÓFILOS X M1 Min 0 5 10 15 X M2 XM3 ufc/ placa. 5 4 4 2 2 5 0 2 0 2 0 1 88 X 4 3 1 1 X M1 X M2 XM3 X XM1 X M2 XM3 X M1 S. aureus X M2 XM3 XM1 XM2 XM3 ufc/ placa. A/P A/P A/P 4 2 3 3 Ausencia Ausencia Ausencia 1 1 3 2 Ausencia Ausencia Ausencia 0 0 1 0 Ausencia Ausencia Ausencia 1 0 0 0 Ausencia Ausencia Ausencia HISOPADO EQUIPO ENVASADORA POLVOS ETANOL 70% E. coliMOHOS Y LEV coliformes Salmonella s.p S. aureus X M1 X M2 XM3 ufc/ placa. 4 5 5 2 2 2 1 2 2 1 2 0 X 5 2 2 1 XM1 X M2 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia XM3 X M1 X M2 XM3 XM1 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia XM2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia P. aeruginosa. XM1 XM2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia P. aeruginosa. XM1 XM2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Anexo 18. Tabla de Recuentos de Hisopado en el Equipo Envasadora Líquidos con TEGO 51 y Etanol 70%. HISOPADO EQUIPO ENVASADORA LIQUIDOS TEGO 51 E. coliMOHOS Y LEV coliformes Salmonella s.p S. aureus MESÓFILOS X M1 Min 0 5 10 15 X M2 XM3 ufc/ placa. 2 2 5 4 3 2 1 0 1 1 0 3 X 3 3 1 1 MESÓFILOS X M1 Min 0 5 10 15 X M2 XM3 ufc/ placa. 5 4 4 4 3 2 0 2 1 1 2 1 89 X 4 3 1 1 X M1 X M2 XM3 X XM1 X M2 XM3 X M1 X M2 XM3 XM1 XM2 XM3 ufc/ placa. A/P A/P A/P 2 3 4 3 Ausencia Ausencia Ausencia 2 4 2 3 Ausencia Ausencia Ausencia 1 1 2 1 Ausencia Ausencia Ausencia 0 0 1 0 Ausencia Ausencia Ausencia HISOPADO EQUIPO ENVASADORA LIQUIDOS ETANOL 70% E. coliMOHOS Y LEV coliformes Salmonella s.p S. aureus X M1 X M2 XM3 ufc/ placa. 5 5 4 2 2 4 1 2 1 0 0 0 X 5 3 1 0 XM1 X M2 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia XM3 X M1 X M2 XM3 XM1 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia XM2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia P. aeruginosa. XM1 XM2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia P. aeruginosa. XM1 XM2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Anexo 19. Tabla de Recuentos de Hisopado para pisos, paredes y techos con SUMASOL y SANITIZER en el equipo MARMITA 300. MESÓFILOS PISO X M1 X M2 XM3 ufc/ placa. HISOPADO EQUIPO MARMITA 300 SUMA-SOL PISO E. coliMOHOS Y LEV coliformes Salmonella s.p X M1 X M2 XM3 ufc/ placa. 9 6 1 2 12 5 1 0 9 4 0 1 4 4 2 1 5 4 1 0 4 4 0 0 0 5 10 15 4 3 3 1 4 2 2 2 5 5 4 1 4 3 3 2 6 4 4 1 4 4 3 1 TECHO Min 0 5 10 15 X M1 X M2 XM3 ufc/ placa. 7 4 6 5 5 4 3 1 1 2 0 1 MESÓFILOS 0 5 10 15 X M1 X M2 XM3 X M1 X M2 XM3 X M1 X M2 XM3 ufc/ placa. 6 3 4 2 4 3 2 2 2 1 0 0 9 7 3 2 5 5 2 1 90 8 5 2 2 XM3 X M1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia PARED Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia TECHO XM1 X M2 XM3 6 5 2 1 6 4 2 0 XM1 X M2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia PARED Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia P. aeruginosa. X M2 XM3 XM1 XM2 XM3 XM1 XM2 XM3 A/P A/P A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia X M1 X M2 XM3 XM1 XM2 XM3 XM1 ufc/ placa. A/P A/P 4 4 4 Ausencia Ausencia 4 2 2 Ausencia Ausencia 1 0 2 Ausencia Ausencia 1 0 0 Ausencia Ausencia HISOPADO EQUIPO MARMITA SANITIZER. PISO E. coliMOHOS Y LEV coliformes Salmonella s.p ufc/ placa. 8 6 6 5 5 5 2 4 3 1 0 1 7 6 2 2 X M2 A/P Min 0 5 10 15 PISO Min 0 5 10 15 XM1 S. aureus X M1 XM2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia S. aureus P. aeruginosa. X M2 XM3 XM1 XM2 XM3 XM1 XM2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia TECHO TECHO Min 0 5 10 15 X M1 X M2 XM3 ufc/ placa. 14 12 7 7 3 9 1 0 0 2 0 1 X M1 X M2 XM3 ufc/ placa. 5 5 9 4 4 8 0 3 1 3 0 0 XM1 X M2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia X M1 X M2 XM3 XM1 XM2 XM3 XM1 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia XM2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Anexo 20. Tabla de Recuentos De Hisopado para pisos, paredes y techos con SUMASOL y SANITIZER en el equipo MEZCLADOR V. MESÓFILOS PISO Min 0 5 10 15 X M1 X M2 XM3 HISOPADO EQUIPO MEZCLADOR EN V SUMA-SOL PISO E. coliMOHOS Y LEV coliformes Salmonella s.p S. aureus X M1 X M2 XM3 XM1 X M2 XM3 X M1 P. aeruginosa. X M2 XM3 XM1 XM2 XM3 XM1 XM2 XM3 ufc/ placa. 9 12 9 6 5 4 2 1 1 2 0 1 ufc/ placa. 5 5 7 5 7 4 1 0 0 1 0 0 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia 0 5 10 15 8 7 2 2 8 5 2 1 PARED Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia TECHO Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia TECHO Min 0 5 10 15 X M1 12 5 1 0 14 5 1 1 X M2 XM3 ufc/ placa. 18 12 14 15 18 13 2 1 0 1 0 1 MESÓFILOS PISO Min 0 5 10 15 X M1 X M2 XM3 ufc/ placa. 16 12 14 13 11 15 2 0 0 2 0 1 91 X M1 5 9 1 0 6 3 1 0 X M2 XM3 XM1 X M2 XM3 X M1 X M2 XM3 XM1 XM2 XM3 XM1 ufc/ placa. A/P A/P A/P 7 3 9 Ausencia Ausencia Ausencia 7 3 8 Ausencia Ausencia Ausencia 1 1 3 Ausencia Ausencia Ausencia 3 0 0 Ausencia Ausencia Ausencia HISOPADO EQUIPO MEZCLADOR EN V SANITIZER. PISO E. coliMOHOS Y LEV coliformes Salmonella s.p S. aureus X M1 X M2 XM3 ufc/ placa. 9 5 7 6 4 5 1 3 1 3 0 0 XM1 X M2 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia XM3 X M1 P. aeruginosa. X M2 XM3 XM1 XM2 XM3 XM1 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia XM2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia XM2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia 0 5 10 15 10 7 2 2 15 9 1 0 TECHO Min 0 5 10 15 X M1 13 7 1 1 X M2 XM3 ufc/ placa. 17 15 18 13 12 10 1 0 0 0 0 1 8 6 2 2 X M1 9 7 1 0 4 3 1 0 X M2 XM3 ufc/ placa. 9 7 4 4 8 7 1 1 0 1 0 0 PARED Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia TECHO XM1 X M2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia X M1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia X M2 XM3 XM1 XM2 XM3 XM1 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia XM2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Anexo 21. Tabla de Recuentos De Hisopado para pisos, paredes y techos con SUMASOL y SANITIZER en el equipo Tanque de Fabricación. HISOPADO EQUIPO TANQUE DE FABRICACION SUMA-SOL PISO E. coliMESÓFILOS MOHOS Y LEV coliformes Salmonella s.p S. aureus PISO Min 0 5 10 15 X M1 X M2 XM3 X M1 X M2 XM3 ufc/ placa. 18 14 17 14 11 15 2 1 1 2 0 1 ufc/ placa. 9 6 8 7 4 5 2 1 1 1 0 0 0 5 10 15 16 14 2 2 8 7 1 1 TECHO Min 0 5 10 15 X M1 12 10 1 0 19 15 1 1 X M2 XM3 ufc/ placa. 18 16 16 17 13 15 2 1 1 2 0 1 92 X M1 6 4 3 0 9 7 3 0 X M2 XM3 ufc/ placa. 8 5 7 7 6 7 1 2 3 1 0 0 XM1 X M2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia PARED Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia TECHO XM1 X M2 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia XM3 X M1 X M2 XM3 XM1 P. aeruginosa. XM2 XM3 XM1 XM2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia X M1 X M2 XM3 XM1 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia XM2 XM3 XM1 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia XM2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia HISOPADO EQUIPO TANQUE DE FABRICACION SANITIZER. PISO E. coliMESÓFILOS MOHOS Y LEV coliformes Salmonella s.p S. aureus PISO Min 0 5 10 15 X M1 X M2 XM3 X M1 X M2 XM3 ufc/ placa. 21 17 18 17 13 16 2 1 1 2 0 1 ufc/ placa. 9 11 13 7 9 10 1 2 3 1 0 0 0 5 10 15 20 16 2 2 11 13 2 1 TECHO Min 0 5 10 15 X M1 18 15 1 0 15 12 2 1 X M2 XM3 ufc/ placa. 18 12 16 15 7 12 2 1 2 2 0 1 X M1 8 6 1 0 6 5 1 0 X M2 XM3 ufc/ placa. 5 7 9 5 5 6 1 1 3 1 0 0 XM1 X M2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia PARED Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia TECHO XM1 X M2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia X M1 X M2 XM3 XM1 P. aeruginosa. XM2 XM3 XM1 XM2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia X M1 X M2 XM3 XM1 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia XM2 XM3 XM1 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia XM2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Anexo 22. Tabla de Recuentos De Hisopado para pisos, paredes y techos con SUMASOL y SANITIZER en el equipo Envasadora de Líquidos. HISOPADO EQUIPO ENVASADORA DE LIQUIDOS SUMA-SOL PISO E. coliMESÓFILOS MOHOS Y LEV coliformes Salmonella s.p S. aureus PISO Min 0 5 10 15 0 5 10 15 X M1 X M2 XM3 X M1 X M2 XM3 ufc/ placa. 16 12 15 14 9 13 2 2 2 2 0 1 ufc/ placa. 9 10 13 4 7 11 1 3 1 1 0 0 13 11 2 2 9 4 2 1 16 14 2 0 93 20 17 1 1 7 5 1 0 8 6 1 0 XM1 X M2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia PARED Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia X M1 P. aeruginosa. X M2 XM3 XM1 XM2 XM3 XM1 XM2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia TECHO TECHO Min 0 5 10 15 PISO Min 0 5 10 15 X M1 X M2 XM3 X M1 X M2 XM3 XM1 X M2 XM3 X M1 X M2 XM3 XM1 XM2 XM3 XM1 ufc/ placa. ufc/ placa. A/P A/P A/P 10 10 8 10 5 8 Ausencia Ausencia Ausencia 7 7 6 4 4 4 Ausencia Ausencia Ausencia 2 2 1 2 2 3 Ausencia Ausencia Ausencia 2 0 1 1 0 0 Ausencia Ausencia Ausencia HISOPADO EQUIPO ENVASADORA DE LIQUIDOS SANITIZER. PISO E. coliMESÓFILOS MOHOS Y LEV coliformes Salmonella s.p S. aureus X M1 X M2 XM3 X M1 X M2 XM3 ufc/ placa. 16 15 16 14 11 13 2 3 2 2 0 1 ufc/ placa. 8 7 11 6 5 9 2 2 1 1 0 0 0 5 10 15 16 16 2 2 8 4 2 1 TECHO Min 0 5 10 15 X M1 17 14 1 0 15 12 1 1 X M2 XM3 ufc/ placa. 10 12 12 10 11 10 2 1 2 2 0 1 X M1 9 5 1 0 8 4 3 0 X M2 XM3 ufc/ placa. 6 5 8 5 4 4 1 1 3 1 0 0 XM1 X M2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia PARED Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia TECHO XM1 X M2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia X M1 XM2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia P. aeruginosa. X M2 XM3 XM1 XM2 XM3 XM1 XM2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia X M1 X M2 XM3 XM1 XM2 XM3 XM1 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia XM2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Anexo 23. Tabla de Recuentos De Hisopado para pisos, paredes y techos con SUMASOL y SANITIZER en el equipo TABLETEADORA. MESÓFILOS PISO Min 0 5 10 15 X M1 X M2 XM3 ufc/ placa. 15 12 13 9 10 11 2 0 2 2 0 1 94 HISOPADO EQUIPO TABLETEADORA SUMA-SOL PISO E. coliMOHOS Y LEV coliformes Salmonella s.p S. aureus X M1 X M2 XM3 ufc/ placa. 7 10 4 6 5 3 2 3 0 1 0 0 XM1 X M2 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia XM3 X M1 P. aeruginosa. X M2 XM3 XM1 XM2 XM3 XM1 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia XM2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia 0 5 10 15 9 8 2 2 11 7 1 0 TECHO Min 0 5 10 15 X M1 8 7 1 1 X M2 XM3 ufc/ placa. 16 13 16 14 11 13 2 1 1 2 0 1 MESÓFILOS PISO Min 0 5 10 15 X M1 X M2 XM3 9 7 1 2 X M1 10 8 3 0 7 5 2 0 X M2 XM3 X M1 X M2 XM3 ufc/ placa. 9 6 4 7 3 4 1 2 1 1 0 0 0 5 10 15 8 7 2 2 8 6 2 1 TECHO Min 0 5 10 15 X M1 10 6 1 1 X M2 XM3 ufc/ placa. 19 17 14 15 13 12 2 1 2 2 0 1 95 XM1 X M2 XM3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia X M1 X M1 5 4 3 0 4 3 1 0 X M2 XM3 ufc/ placa. 9 6 7 6 5 4 2 0 0 1 0 0 XM1 X M2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia PARED Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia TECHO XM1 X M2 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia XM3 X M1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia X M2 XM3 XM1 XM2 XM3 XM1 ufc/ placa. A/P A/P 7 5 8 Ausencia Ausencia 5 3 4 Ausencia Ausencia 1 3 1 Ausencia Ausencia 1 0 0 Ausencia Ausencia HISOPADO EQUIPO TABLETEADORA SANITIZER. PISO E. coliMOHOS Y LEV coliformes Salmonella s.p ufc/ placa. 7 5 5 4 5 4 2 2 2 2 0 1 7 6 1 0 PARED Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia TECHO XM2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia S. aureus P. aeruginosa. X M2 XM3 XM1 XM2 XM3 XM1 XM2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia X M1 X M2 XM3 XM1 XM2 XM3 XM1 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia XM2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Anexo 24. Tabla de Recuentos De Hisopado para pisos, paredes y techos con SUMASOL y SANITIZER en el equipo Envasadora de Tabletas. HISOPADO EQUIPO ENVASADORA DE TABLETAS SUMA-SOL PISO E. coliMESÓFILOS MOHOS Y LEV coliformes Salmonella s.p S. aureus PISO Min 0 5 10 15 X M1 X M2 XM3 X M1 X M2 XM3 ufc/ placa. 20 23 19 18 20 16 2 1 2 2 0 1 ufc/ placa. 8 5 7 6 4 6 1 1 2 1 0 0 0 5 10 15 17 12 2 2 7 5 1 2 TECHO Min 0 5 10 15 X M1 PISO Min 0 5 10 15 0 5 10 15 12 10 2 0 15 13 1 1 X M2 XM3 X M1 9 7 1 0 10 8 2 0 X M2 XM3 XM1 X M2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia PARED Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia TECHO XM1 X M2 XM3 X M1 X M2 XM3 XM1 XM2 XM3 XM1 X M2 XM3 X M1 X M2 XM3 ufc/ placa. 22 14 16 19 11 14 2 2 1 2 0 1 ufc/ placa. 9 8 4 7 7 4 2 2 2 1 0 0 10 9 2 2 4 4 2 1 12 8 2 0 96 15 13 1 1 5 3 3 0 7 6 3 0 XM1 X M2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia PARED Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia XM2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia X M1 X M2 XM3 XM1 XM2 XM3 XM1 ufc/ placa. ufc/ placa. A/P A/P A/P 16 19 14 7 6 5 Ausencia Ausencia Ausencia 14 17 10 4 3 3 Ausencia Ausencia Ausencia 2 2 1 2 1 1 Ausencia Ausencia Ausencia 2 0 1 0 0 0 Ausencia Ausencia Ausencia HISOPADO EQUIPO ENVASADORA DE TABLETAS SANITIZER. PISO E. coliMESÓFILOS MOHOS Y LEV coliformes Salmonella s.p S. aureus X M1 P. aeruginosa. X M1 XM2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia P. aeruginosa. X M2 XM3 XM1 XM2 XM3 XM1 XM2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia TECHO TECHO Min 0 5 10 15 X M1 X M2 XM3 ufc/ placa. 15 12 10 13 10 8 2 1 1 2 0 1 X M1 X M2 XM3 ufc/ placa. 6 8 4 4 6 4 2 3 2 1 0 0 XM1 X M2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia X M1 X M2 XM3 XM1 XM2 XM3 XM1 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia XM2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Anexo 25. Tabla de Recuentos De Hisopado para pisos, paredes y techos con SUMASOL y SANITIZER en el equipo Envasadora de Polvos. HISOPADO EQUIPO ENVASADORA DE POLVOS SUMA-SOL PISO E. coliMESÓFILOS MOHOS Y LEV coliformes Salmonella s.p S. aureus PISO Min 0 5 10 15 X M1 X M2 XM3 X M1 X M2 XM3 ufc/ placa. 17 12 18 11 12 16 2 0 1 2 0 1 ufc/ placa. 7 9 9 4 7 6 2 2 3 1 0 0 0 5 10 15 15 10 2 2 9 8 1 1 TECHO Min 0 5 10 15 X M1 PISO Min 0 5 10 15 18 11 1 0 17 14 1 1 X M2 XM3 X M1 8 6 3 1 12 9 2 0 X M2 XM3 XM1 X M2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia PARED Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia TECHO XM1 X M2 XM3 X M1 X M2 XM3 XM1 XM2 XM3 XM1 X M2 XM3 ufc/ placa. 22 19 16 17 15 14 2 2 1 2 0 1 97 X M1 X M2 XM3 ufc/ placa. 8 4 7 7 3 5 1 2 2 1 0 0 XM1 X M2 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia XM3 XM2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia X M1 X M2 XM3 XM1 XM2 XM3 XM1 ufc/ placa. ufc/ placa. A/P A/P A/P 18 20 21 9 6 4 Ausencia Ausencia Ausencia 16 17 19 7 5 4 Ausencia Ausencia Ausencia 2 1 1 2 1 1 Ausencia Ausencia Ausencia 2 0 1 1 0 0 Ausencia Ausencia Ausencia HISOPADO EQUIPO DOSIFICADORA DE POLVOS SANITIZER. PISO E. coliMESÓFILOS MOHOS Y LEV coliformes Salmonella s.p S. aureus X M1 P. aeruginosa. X M1 P. aeruginosa. X M2 XM3 XM1 XM2 XM3 XM1 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia XM2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia XM2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia 0 5 10 15 20 16 2 1 17 15 1 0 TECHO Min 0 5 10 15 X M1 15 13 1 1 X M2 XM3 ufc/ placa. 9 12 9 6 5 4 2 1 2 1 0 1 9 7 2 1 X M1 6 4 1 0 4 3 1 0 X M2 XM3 ufc/ placa. 4 5 4 4 4 4 1 1 3 1 0 0 PARED Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia TECHO XM1 X M2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia X M1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia X M2 XM3 XM1 XM2 XM3 XM1 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia XM2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Anexo 26. Tabla de Recuentos De Hisopado para pisos, paredes y techos con SUMASOL y SANITIZER en el equipo de Pesaje. MESÓFILOS PISO Min 0 5 10 15 X M1 X M2 XM3 HISOPADO EQUIPO PESAJE SUMA-SOL PISO E. coliMOHOS Y LEV coliformes Salmonella s.p X M1 X M2 XM3 ufc/ placa. 18 15 17 12 16 9 1 2 1 1 0 1 ufc/ placa. 4 7 8 2 5 7 2 2 1 1 0 0 0 5 10 15 10 7 2 0 6 4 2 0 TECHO Min 0 5 10 15 X M1 17 15 1 0 13 11 2 1 X M2 XM3 ufc/ placa. 15 18 16 12 16 15 2 1 1 0 0 1 98 X M1 8 7 1 0 5 5 1 0 X M2 XM3 ufc/ placa. 8 6 10 6 6 7 1 1 2 0 0 0 XM1 X M2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia PARED Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia TECHO XM1 X M2 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia XM3 X M1 S. aureus P. aeruginosa. X M2 XM3 XM1 XM2 XM3 XM1 XM2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia X M1 X M2 XM3 XM1 XM2 XM3 XM1 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia XM2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia MESÓFILOS PISO Min 0 5 10 15 X M1 X M2 XM3 HISOPADO EQUIPO PESAJE SANITIZER. PISO E. coliMOHOS Y LEV coliformes Salmonella s.p X M1 X M2 XM3 ufc/ placa. 17 12 9 14 10 6 0 1 1 0 0 1 ufc/ placa. 7 5 9 7 5 8 0 1 2 1 0 1 0 5 10 15 17 11 2 1 8 6 1 1 TECHO Min 0 5 10 15 X M1 14 9 1 0 16 13 1 1 X M2 XM3 ufc/ placa. 15 12 18 9 5 6 2 1 1 2 0 1 99 X M1 6 6 2 0 10 4 3 1 X M2 XM3 ufc/ placa. 6 5 6 7 4 6 1 2 1 1 0 0 XM1 X M2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia PARED Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia TECHO XM1 X M2 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia XM3 X M1 S. aureus P. aeruginosa. X M2 XM3 XM1 XM2 XM3 XM1 XM2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia X M1 X M2 XM3 XM1 XM2 XM3 XM1 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia XM2 XM3 A/P Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
