El lóbulo anterior de la hipófisis está compuesto por cinco tipos de

OBTENCIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE UN CULTIVO DE CÉLULAS
FOLÍCULO ESTELARES DE ADENOHIPÓFISIS DE RATA
García-Godínez A, Báez-Luna E, de la Vega MT, Toriz CG, Solano-Agana C, Mendoza-Garrido
ME.
Departamento de Fisiología Biofísica y Neurociencias del CINVESTAV -IPN
El lóbulo anterior de la hipófisis está compuesto por células secretoras y no
secretoras. De las células no secretoras, las folículo estelares (FE) son las más
numerosas (corresponden al 5-10% del total de las células adenohipofisiarias),
son de tipo glial-astrocítico, presentan una forma estelar, extienden
prolongaciones citoplasmáticas que se interponen entre células secretoras, y
algunas forman folículos; de ahí su nombre. Se sabe que las células FE
participan en el mantenimiento y soporte de las células secretoras así como en
el control de la secreción hormonal. Las células FE se unen entre sí a través de
uniones comunicante, adherentes, desmosomas y solo las que forman los
folículos hacen uniones oclusoras (1, 2, 3). De lo anterior se deduce que las
células FE son unas células que expresan dos fenotipos, uno
fibroblastoide/glial y otro epitelial. A nosotros nos interesa estudiar la
organización de los complejos de adhesión así como la organización del
citoesqueleto de las células FE. Para ello decidimos utilizar el modelo de cultivo
celular, por lo que nuestro primer objetivo fue obtener un cultivo primario de
células FE. Separamos a las células FE de las secretoras en función de su
mayor adhesividad al sustrato, así como de su capacidad de proliferar en
cultivo. De ahí que la suspensión celular se incubó durante 2 h seguido de la
remoción de las células poco adheridas a una matriz de colágena I/III. Después
de varios días, las células fibroblastoides que proliferaron se levantaron (primer
pasaje) para extender el cultivo. Las células del segundo pasaje se sembraron
sobre cubre objetos cubiertos con diferentes sustratos de adhesión: colágena
I/III ó IV, fibronectina y poli-lisina y se cultivaron con un medio enriquecido con
10% sfb durante 48 h. Para determinar el tipo celular de los cultivos así como la
pureza de los mismos se analizó la expresión de los marcadores de las células
FE: la proteína S-100β, la GFAP y vimentina. Además, se estudió la
organización del citoesqueleto de actina y de la E-cadherina. Estas células
tienden a organizarse en forma de cúmulos. Al analizar la expresión de los
marcadores de las células FE observamos que a las 24 h del cultivo todavía
tenemos células secretoras. Después del segundo pasaje todas las células del
cultivo expresan los marcadores. En los cultivos del segundo pasaje se observa
que las células extienden prolongaciones citoplasmáticas, hasta que estas
encuentran a otra célula FE. En el extremo de las prolongaciones, en el área
donde se unen a los cúmulos, se expresa E-cadherina y en forma de malla de
gallinero no completa se observa esta proteína de las uniones adherentes en el
centro de los cúmulos. Este patrón fue semejante independientemente del
sustrato utilizado. La actina filamentosa de las células FE se encuentra
organizada en forma de fibras de estrés y se presentan lamelipodios en los
extremos de las células aisladas, esto último sugiere que las células se
encuentran migrando. De manera interesante encontramos que la proteína S100β se encuentra asociada preferentemente a los microfilamentos y no a los
microtúbulos en las células FE. Como conclusión podemos decir que
conseguimos un cultivo primario de células FE puro que expresa un fenotipo
fibroblastoide y no epitelial.
1.
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