Lab Analisis de Agua (8 de mayo).pptx

Análisis del agua
S
Objetivos
S  Determinar la presencia de bacterias coliformes en una
muestra de agua
Introducción
S  Las tres pruebas básicas para determinar la presencia de
bacterias coliformes (asociada con materia fecal) en el agua
son:
S  La prueba presuntiva
S  La prueba de confirmación
S  La prueba completa
Pruebas para determinar
bacterias coliformes
S  Las pruenbas se realizan secuencialmente para cada una de
las muestras.
S  Bacterias coliformes
S  Bacterias gram negativas
S  Bacilos
S  No formadoras de esporas
S  Anaerobos fermentativos
S  Fermentan lactosa
Coliformes fecales
Microbiología
Agua spp.
S  Incluyen
E.coli algunas Klebsiellade
y Enterobacter
¿Qué es un coliforme?
Grupo de especies de varios géneros
Klebsiella pneumoniae
Escherichia coli
Citrobacter freundaii
Enterobacter aerogenes
Prueba Presuntiva
S  Es una prueba específica para determinar la presencia de
bacterias coliformes.
S  Se realiza agregando alícuotas de muestra de agua que se
quiere evaluar en caldo de fermentación que contienen
lactosa y que posea un tubo invertido.
S  Un resultado positivo de esta prueba indica que la muestra
de agua no es potable.
Prueba de Confirmación
S  Confirman la presencia de bacteria coliformes en muestras
de aguas que dieron resultados positivos a las pruebas
presuntivas.
S  Un resultado positivo de una prueba presuntiva debe
confirmarse ya que resultados positivos pueden deberse a
organismos de origen no coliformes que no son reconocidos
como contaminantes causados por materia fecal.
Coliformes
S  En la prueba de confirmación se usa Eosine Methylene Blue
(EMB) un medio de cultivo selectivo y diferencial o Endo Agar.
S  El EMB contiene azul de metileno que inhibe el crecimiento de
organismos gram positivos ( selectivo).
S  En un ambiente ácido, EMB forma un complejo que se precipita
sobre las colonias coliformes y produce un centro negro y borde
verde metálico (diferencial).
S  Esta reacción es característica para Escherichia coli., el principal
indicador de contaminación con materia fecal.
S  El Endo Agar tiene el colorante fuchsina y en presencia de
ácidos producidos por las bacterias coliformes, la fuchsina
forma un complejo de color rosado obscuro que convierte a
la colonias coliformes y sus alrededores en color rosado.
Prueba Completa
S  Análisis final de la muestra de agua. Se utiliza para examinar las
colonias coliformes que aparecieron en el medio EMB en la
prueba de confirmación.
S  Se selecciona una colonia aislada para ser transferida a un tubo
con caldo de lactosa y se siembra en un tubo con agar inclinado
para hacer la tinción Gram.
S  Despúes de hacer la inoculación y la incubación, los tubos que
muestren la formación de gas en el caldo de lactosa y den
positivos en la tinción Gram (Gram negativos) comprueban la
presencia de bacterias coliformes en la muestra de agua.
Parte Práctica
Prueba Presuntiva
S  Mezcle las muestras de agua.
S  Agregue con una pipeta estéril 1 mL de la muestra de agua a tres
tubos de LB1X y a tres tubos LB 2X
LB1X= Caldo con lactosa
S  LB 2X=Caldo con doble concentración de lactosa
S 
S  Saque los gases del tubo durham
S  Incube los tubos por 48 horas a 37 grados.
S  Si se observa la presencia de gas en el tubo durham es muy posible
que tengan bacterias coliformes.
S  Resultados positivos se realiza la prueba de confrmación
Parte Práctica
Prueba Confirmativa
S  Cultivos que dieron positivos a la presuntiva se utilizan para esta
parte.
S  Identificar placas petri debidamente.
S  Transferir bacterias del medio de cultivo de la prueba presuntiva a
las placas de EMB utilizando la técnica de siembra por dilución.
S  Incubar todas las cajas petri en posición invertida a 37 grados por
24 horas.
S  Observar placas y guardar para realizar prueba completa.
Parte Práctica
Prueba Completa
S  Inocular en tubos con caldo de lactosa y agar inclinado con
las colonias aisladas en EMB .
S  Incubar todos los tubos durante 24 horas a 37 grados.
S  Observar los tubos y hacer la tinción Gram.