MEDIO EC – EC MEDIUM (7206) Propósito de Uso El Medio EC es utilizado para la detección de bacterias coliformes a 37°C y Escherichia coli a elevadas temperaturas (44,5°C y 45,5°C). Resumen y Explicación del Producto y Explicación El Medio EC fue desarrollado por Hajna y Perry1 en un esfuerzo por mejorar los métodos para la detección de bacterias del grupo de coliformes y de E. coli. Este medio consiste de un caldo tamponado de lactosa con la adición de un 0,15% de una Mezcla de Sales Biliares. El crecimiento de las bacterias formadoras de esporas y estreptococos fecales es inhibido por las sales biliares, mientras que el crecimiento de E. coli es intensificado por su presencia. Este medio puede ser utilizado a 37°C para la detección de organismos coliformes o a una temperatura de 44,5°C o 45,5°C para el aislamiento de E. coli. El Medio EC es utilizado en pruebas a elevadas temperaturas para la diferenciación de organismos del grupo de coliformes que pertenecen también al grupo de coliformes fecales.2 La prueba para coliformes fecales, utilizando el Medio EC es aplicable para investigaciones en agua potable, contaminación de arroyos, fuentes de agua bruta, sistemas de tratamiento de aguas residuales, aguas de baño, aguas del mar y monitoreo general de la calidad del agua. El Medio EC es utilizado en la prueba de NMP (Número más probable) para coliformes fecales. El Medio EC no debe ser usado para el aislamiento directo de coliformes; previo al enriquecimiento en medios presuntivos es requerido para la recuperación óptima de coliformes fecales. El Medio EC es utilizado en métodos para el análisis de alimentos y de la calidad del agua.2-5 Principios del Procedimiento La triptosa es una mezcla de digerido enzimático de proteína, suministra nitrógeno, vitaminas y aminoácidos al Medio EC. La lactosa es la fuente de carbono. La Mezcla de Sales Biliares es el agente selectivo contra las bacterias Gram-positivas, particularmente bacilos y estreptococos fecales. El Fosfato Dipotásico y el Fosfato Monopotásico son los agentes de tamponado. El Cloruro de Sodio mantiene el balance osmótico del medio. Fórmula / Litro Triptosa ................................................................................... 20 g Lactosa ..................................................................................... 5 g Mezcla de Sales Biliares ........................................................ 1,5 g Fosfato Dipotásico .................................................................... 4 g Fosfato Monopotásico............................................................ 1,5 g Cloruro de Sodio ....................................................................... 5 g pH Final: 6,9 ± 0,2 a 25°C La fórmula puede ser ajustada y/o suplementada de acuerdo a los requerimientos para cumplir con las especificaciones de rendimiento o desempeño. Precauciones 1. Para uso en el laboratorio. 2. IRRITANTE. Irritante para los ojos, piel y sistema respiratorio. Procedimiento 1. Disuelva 37 g del medio en un litro de agua purificada. 2. Mezcle completamente. 3. Distribuya dentro de los tubos Durham que contienen fermentación invertida. 4. Autoclave a 121°C durante 15 minutos. PI 7206 Rev 9 diciembre 2015 Especificaciones de Control de Calidad Apariencia del Deshidratado: Polvo suelto homogéneo, color beige claro Apariencia del Preparado: Medio preparado es de color brillante a claro Solución al 1X: Dorado Solución al 2X: Color naranja ámbar mediano a oscuro Precipitado: Ninguno a poco (mínimo) Respuesta Esperada del Cultivo: Con referencia al Capítulo 4 de la FDA/BAM, Enumeración de Bacterias Coliformes y Escherichia coli (actualización Feb/2013) y la Asociación Americana para la Salud Pública (APHA, American Public Health Association) Métodos Estándar para la Evaluación de Agua Potable y Aguas Residuales, Edición 20ava Sección 9221 (APHA Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater). Pueden seguirse dos métodos de inoculación, a saber: Inoculación directa de las cepas de prueba en el Medio EC con incubación a 35 ± 2°C y a 44,5 ± 0,2°C. Incube los cultivos en una atmósfera aeróbica a las temperaturas indicadas y luego examine para determinar crecimiento y la presencia de gas a las 24 ± 2 horas; si no hay presencia de gas reincube por 48 ± 3 horas para confirmar la presencia de gas. Pre-enriquecimiento de las cepas de prueba en Caldo Lauril Triptosa (LTB, Lauryl Tryptose Broth, por sus siglas en inglés) a 35 ± 2°C. Si no se presenta crecimiento/gas después de haber transcurrido 24 horas, re-incube hasta por 48 horas y transfiera con el asa de siembra el cultivo enriquecido de LTB al Medio EC e incube aeróbicamente en un baño maría a 44,5°C y 45,5°C. Examine para determinar crecimiento y presencia de gas luego haber transcurrido de 24 ± 2 horas; si no hay presencia de gas re-incube por 48 ± 3 horas para confirmar la presencia de gas. RESULTADOS ESPERADOS MICROORGANISMO ATCC INÓCULO APROXIMADO (UFC) Inoculación Directa en Medio EC a 35°C /44,5°C Pre-enriquecimiento con LTB a 35°C; Medio EC a 44,5°C /45,5°C Crecimiento Gas Crecimiento Gas Bueno a excelente a 35°C; de ningún a pobre crecimiento a 44,5°C ± a 35°C -a 44.5°C Ninguno a bueno – Enterobacter aerogenes 13048 10–300 para 35°C; 10–300 para 44,5°C; 10–100 para enriquecimiento con LTB Enterococcus faecalis 29212 103 Inhibido N/A Inhibido N/A Escherichia coli 25922 o 8739 o 11775 10–300 para 35°C; 103 para 44,5°C; 10–100 para enriquecimiento con LTB Bueno a excelente + Bueno a excelente Débil + a + Los organismos listados son los mínimos que deben ser evaluados para propósitos de análisis y pruebas de control de calidad. PI 7206 Rev 9 diciembre 2015 Procedimiento de la Prueba Referirse a las referencias adecuadas para los procedimientos específicos utilizando el Medio EC.2-5 Resultados La producción de gas debido al crecimiento de bacterias en el Medio EC dentro de las 48 3 horas o menos se considera como una reacción positiva de coliformes fecales. En caso de ausencia de gas con ausencia de crecimiento o con poco crecimiento se considera como una reacción negativa.2 Almacenamiento Almacene el envase conteniendo el medio de cultivo deshidratado sellado firmemente y a una temperatura entre 2–30°C. Una vez abierto y cerrado nuevamente, coloque el envase en un ambiente con baja humedad a la misma temperatura de almacenamiento. Proteja el producto de los efectos de la humedad y de la luz manteniendo el envase firmemente cerrado. Expiración Referirse a la fecha de expiración estampada en el envase. El medio de cultivo deshidratado debe ser desechado si no fluye libremente, o si su apariencia ha cambiado a partir del color original. La expiración aplica para el medio de cultivo que haya sido almacenado en su recipiente intacto, original y bajo las condiciones indicadas. Limitaciones del Procedimiento Debido a las variaciones en los requerimientos nutricionales, algunas cepas podrían tener un pobre crecimiento o ausencia de crecimiento en este medio de cultivo. Empaque Medio EC EC Medium Código No. 7206A 7206B 7206C 500 g 2 kg 10 kg Referencias 1. 2. 3. 4. 5. Hajna and Perry. 1943. Am J. Public Health. 33:550. Eaton, A. D., L. S. Clesceri, and A. E. Greenberg (eds.). 1998. Standard methods for the examination of water and wastewater, 20th ed., American Public Health Association, Washington, D.C. Cunnif, P. (ed.). 1995. Official Methods of Analysis AOAC International, 16th ed., AOAC International, Gaithersburg, MD. Vanderzant, C., and D. F. Splittstoesser (eds.). 1992. Compendium of methods for the microbiological examination of foods, 3 rd ed. American Public Health Association, Washington, D.C. FDA/BAM Chapter 4 Enumeration of E. coli and the Coliform Bacteria updated 2/2013; www.fda.gov Información Técnica Para preguntas relacionadas con la preparación o el rendimiento de los medios de cultivo deshidratados o para contactar al Departamento de Servicios Técnicos, comuníquese con Acumedia Manufacturers, Inc. al teléfono (517) 372-9200 o al fax (517) 3722006. PI 7206 Rev 9 diciembre 2015