XVII JORNADA DE FORMACIÓN INTERHOSPITALARIA DEL LABORATORIO CLÍNICO MÉTODOS DE IDENTIFICACIÓN DE LOS CÁLCULOS. 20 de mayo de 2009 PABLO ARGÜELLES MENÉNDEZ SERVICIO DE BIOQUÍMICA CLÍNICA HOSPITAL RAMÓN Y CAJAL Los diferentes métodos de análisis se han aplicado como técnicas rutinarias o bien se han usado para investigación en el estudio del cálculo como objeto único desde el punto de vista estructural, cristalográfico o químico. Sin embargo, este conocimiento no siempre se ha trasladado a los laboratorios generales de análisis, donde la metodología analítica sigue siendo pobre. Análisis químico cualitativo: Es una técnica analítica clásica similar a una marcha analítica típica. Está basada en la detección mediante reactivos específicos de ciertos aniones, cationes o moléculas enteras, que normalmente son parte de la composición química de un cálculo urinario. Suelen ser métodos colorimétricos y visuales. Ventajas: Bajo coste del análisis. “Rapidez”. Desventajas: Exige la destrucción del cálculo. Falsos positivos y negativos. No detecta constituyentes metabólicos raros: xantina, hipoxantina, leucina, medicamentos o sus metabolitos… No informa de fases cristalinas ni de la estructura del cálculo (simple o mixto). No diferencia los oxalatos en mono y dihidratado. Es poco sensible para el ácido úrico, urato amónico o urato sódico. Es poco útil para cuantificar los componentes. Necesita una muestra relativamente grande. Microscopía óptica con luz polarizada: Es la indicada para el estudio del material cristalino, no siendo aplicable a cálculos constituidos por compuestos amorfos. La disposición estructural, los distintos componentes y su localización en el núcleo o la corteza del cálculo, se determinan mediante cortes finos petrográficos. Se visualiza un corte del cálculo en un microscopio petrográfico y mediante luz polarizada, se distinguen las sustancias isótropas de las anisótropas. Gracias al uso de patrones, el conocimiento de los sistemas de cristalización, la isotropía y la anisotropía y el ángulo de extinción de la sustancia, se puede identificar la muestra en el corte fino. Difracción de rayos X: La difracción de un haz monocromático de rayos X al atravesar una estructura cristalina depende de la distribución atómica (aniones y cationes), siendo el difractograma, característico de cada especie cristalina y ello permite la diferenciación entre las distintas variedades de cálculos. Desventajas: Tecnología cara. Precisa personal cualificado. Lentitud. No detecta el material amorfo. No distingue componentes minoritarios (<10%). Termografía: Los cálculos, al ser calentados, sufren modificaciones energéticas y pérdidas de peso específicas para cada uno de sus posibles componentes, lo que permite su caracterización cualitativa y cuantitativa. Las diferentes fases de la descomposición térmica se producen a temperaturas determinadas, características de la estructura molecular y cristalina. Los picos del diagrama termogravimétrico muestran las pérdidas de peso específicas para cada uno de los componentes. Desventajas: Técnica lenta, laboriosa y costosa. Dificultad en el análisis de cálculos mixtos. Cromatografía: Técnica útil para la identificación de determinados componentes orgánicos o drogas, que se encuentran como componentes minoritarios o no, en el seno de los cálculos urinarios. Lámina delgada: Técnica altamente fiable que aporta gran información sobre la composición y estructura del cálculo. Sin embargo, la complejidad en la elaboración de las láminas hace que su uso sea muy restringido. Espectroscopía de absorción atómica: Técnica útil en la identificación de elementos minoritarios. Se utiliza la cámara de grafito y la emisión de plasma. Un único ensayo permite determinar multitud de elementos: hierro, cobre, zinc, selenio, aluminio, cobalto, … Microscopía electrónica de barrido: Permite estudiar los distintos patrones de cristalización para cada composición en el ámbito de la investigación, pero no es una técnica de elección en la rutina. Desventajas: Compleja y de elevado coste. Identifica el cristal exclusivamente sobre la base de la morfología. Espectroscopía de infrarrojos: Es una técnica analítica de determinación molecular basada en la absorción de energía por parte de determinadas enlaces produciendo una vibración. La espectroscopía IR por interferometría con transformación de Fourier (FTIR) mejora la definición de los espectros respecto a la técnica clásica. Otra opción es la espectroscopía RAMAN. Ventajas: Sencillez operativa. Relativo bajo coste. Técnica de elección. Rapidez: 20 s. Sensibilidad: identifica hasta 7 compuestos diferentes mezclados en un mismo cálculo. Discrimina composiciones que se encuentran en forma minoritaria frente a otras que predominan en el cálculo. No precisa una estructura cristalina bien definida, sino que analiza compuestos amorfos. Requiere poca muestra (<1mg). Permite tomar muestras de varias zonas (núcleo, capas, corteza). Espectros infrarrojos Oxalato cálcico monohidratado Oxalato cálcico dihidratado Ácido úrico Ácido úrico dihidratado Urato sódico Fosfocarbonato cálcico Fosfato amónico magnésico Brushita Fosfato octocálcico Urato amónico Cistina Materia orgánica Sílice