ANTICUERPOS: Fabricados por linfocitos B El anticuerpo es una herramienta para la defensa de las células huésped, es decir, las células del organismo que se pueden ver atacadas por agentes patógenos como los virus y las bacterias. La estructura de un anticuerpo consiste en dos cadenas ligeras y dos cadenas pesadas, y en su extremo existe una región hipervariable. La región hipervariable es la que cambia de un anticuerpo a otro, y permite tener una gran diversidad de anticuerpos que podrán responder a la enorme variedad de antígenos. 4 tipos de reacción: Precipitación: macromolecula soluble el antígeno, el anticuerpo lo rodea y precipita. Aglutinacion: Antigeno en la superficie de la membrana (bacteria) anticuerpos rodean, produciendo agregados y sedimentan. Neutralización: Virus, disminuye la capacidad de infectar. Se unen a los antígenos neutralizando la acción del antígeno. TECNICA: El Western Blot es una técnica que permite reconocer anticuerpos por antígenos que se absorben en una membrana. Primero se da la inmovilización de proteínas sobre la membrana ya sea mediante transferencia (electroforetica, aspiración, presión) o mediante aplicación directa. En segundo lugar se da la saturación de todos los lugares de unión de proteínas de la membrana no ocupados para evitar la unión no específica de anticuerpos, que son proteínas. Finalmente la incubación del 'blot' con anticuerpo primarios contra la/s proteína/s de interés. CARACTERISTICAS: -Existen otros métodos para transferir o aplicar proteínas sobre una membrana. El más sencillo es aplicarlas directamente en forma de una pequeña gota de una solución concentrada sobre la membrana. -A continuación se utiliza un anticuerpo específico para detectar la proteína de interés. -El resultado aporta información sobre el peso molecular de la proteína y su cantidad relativa en la muestra. FUNDAMENTO: En la técnica de Western blot se emplea comúnmente el sistema de inmunodetección indirecta. En este método se emplea un anticuerpo primario para localizar la proteína de interés. Un segundo anticuerpo, marcado con un enzima, y contra la especie en la que se ha producido el primero, se emplea para localizar donde se formaron los complejos antígenoanticuerpo. Este anticuerpo secundario se puede marcar de formas muy diversas con el fin de producir una señal detectable.
