PRACTICA CROMATOGRAFIA EN PAPEL OBJETIVO Al finalizar la práctica el estudiante debe ser capaz de: • Conocer las características y aplicaciones de la cromatografía en papel. • Conocer los fundamentos básicos de la cromatografía como técnica instrumental de separación. FUNDAMENTO La cromatografía permite separar, aislar y muchas veces identificar componentes estrechamente relacionados presentes en mezclas complejas; muchas de estas separaciones son imposibles por otros medios. En una cromatografía, la fase estacionaria puede ser un sólido o un líquido soportado en un sólido o en un gel (matriz). La fase estacionaria puede ser empaquetada en una columna, extendida en una capa, distribuida como una película, etc. De forma general, la cromatografía es un método físico de separación de mezclas complejas, la cual tiene grandes aplicaciones en muchas ciencias. Las técnicas cromatográficas están basadas en el principio de retención selectiva, cuyo objetivo es separar los distintos componentes de una mezcla permitiendo identificar y determinar las cantidades de dichos componentes. Las técnicas cromatográficas son muy variadas, pero en todas ellas hay una fase móvil que consiste en un fluido (gas, líquido o fluido supercrítico) que arrastra a la muestra a través de una fase estacionaria que se trata de un sólido o un líquido fijado en un sólido. Los componentes de la mezcla interaccionan en distinta forma con la fase estacionaria. De este modo, los componentes atraviesan la fase estacionaria a distintas velocidades y se van separando. Diferencias sutiles en el coeficiente de partición de los compuestos da como resultado una separación efectiva en función de los tiempos de retención de cada componente de la mezcla. Constante Rf La constante Rf (Factor de retención) es simplemente una manera de expresar la posición de un compuesto sobre una placa como una fracción decimal y mide la retención de un componente. Se define como: Rf= distancia del compuesto desde el origen/distancia de la muestra desde el origen. La distancia recorrida por el compuesto se mide generalmente desde el centro de la mancha, los cálculos se simplifican si el denominador es 10. Para que los Rf sean reproducirles deben ser fijadas una serie de condiciones (Espesor de la placa, fase móvil, fase estacionaria, cantidad de muestra) El máximo valor de Rf que se puede alcanzar es de 1, lo ideal es un Rf entre 0.55 y 0.7. Para averiguar si dos compuestos son iguales, se colocan ambos sobre la misma placa y se desarrolla con varios eluyentes. Una vez desarrollados se calculan los Rf y si son distintos, puede deducirse con toda seguridad que no se trataba del mismo compuesto. Por el contrario, si los Rf son iguales, los compuestos pueden ser iguales o no. MATERIAL, EQUIPO Y SUSTANCIAS Material y equipo Tubos de ensayo de 15x180 Vasos de precipitado de 100ml Papel filtro Probeta de 50ml Capilar Sustancias Hexano Tolueno Etanol Acetona Agua DESARROLLO DE LA PRACTICA Separación de los componentes de la tinta de un bolígrafo por cromatografía en papel (CP) 1.-Recortar 5 rectángulos de papel cromatográfico de 1 cm de ancho por 15 cm de largo. 2.-Pintar con lápiz una línea base a un centímetro de distancia del borde inferior. 3.-Con un microcapilar, colocar una pequeña gota con la tinta de un bolígrafo en cada línea base y deja secar. 4.-Enumerar 5 tubos de ensayo y colocarlos en la gradilla. 5.- A cada uno colocar 1.5 ml de los siguientes disolventes a) Hexano b) Tolueno c) Etanol d) Acetona e) Agua 6.-Colocar un papel cromatográfico por cada disolvente, como se muestra en la siguiente figura: Figura 1: Equipo de elusión de cromatografía en papel 7. Dejar que el disolvente suba a través del papel cromatográfico por capilaridad, arrastrando parte de la tinta según avanza. 8. Una vez que se haya completado la subida del disolvente (parar a 1 cm del final) se habrá obtenido una separación de los diferentes colorantes que forman parte de la tinta del bolígrafo. 9. Sacar el rollo cromatográfico, marcar la línea superior hasta donde llegó el solvente y señalar las manchas encontradas. 10. Se llena la tabla de resultados. Las tiras se tiran a la basura y los solventes a un frasco de residuos orgánicos.
