De acuerdo con el Mecanismo de Separación Ésta es una clasificación conceptual; en la práctica, el mecanismo que rige la separación puede ser mixto. Cromatografía de Adsorción La adsorción es un proceso por el cual átomos, iones o moléculas de gases, líquidos o sólidos disueltos son retenidos en una superficie. La fase estacionaria es un sólido en el que los componentes de la muestra son adsorbidos. La fase móvil puede ser un líquido (cromatografía líquido-sólido) o un gas (cromatografía gas-sólido); los componentes se distribuyen entre dos fases a través de la combinación de los procesos de adsorción y desorción. La cromatografía de capa fina (TLC) es un ejemplo especial de cromatografía por adsorción en la cual la fase estacionaria es un plano, en la forma de un soporte sólido en un plato inerte. La fase estacionaria será un componente polar y el eluyente será por lo general menos polar que la fase estacionaria, de forma que los componentes que se desplacen con mayor velocidad serán los menos polares. Polaridad de los compuestos orgánicos en orden creciente: En la elección del eluyente influyen varios factores: Precio. Pureza. No utilizar mezclas de eluyentes (reproducibilidad). No utilizar compuestos muy volátiles. Evitar que contengan trazas de metales (catalizadores). La elección del eluyente se realiza de forma empírica. Hay que estudiar la polaridad del componente y probar con eluyentes cada vez menos polares. Generalmente se utiliza como reactivo revelador yodo, el cual forma complejos coloreados con los componentes orgánicos (con tonos amarillo-marrón), pero las manchas desaparecen con el tiempo con lo que es conveniente señalar las manchas aparecidas. Otro reactivo revelador bastante utilizado es el ácido sulfúrico, que reacciona con los componentes orgánicos produciendo manchas negras. Sin embargo, debe tenerse en cuenta que el tamaño de las manchas no está relacionado con la cantidad de componente separado. Cromatografía de Reparto o Partición La fase estacionaria es un líquido soportado en un sólido inerte y la fase móvil puede ser un líquido o un gas. Diferente solubilidad de los componentes de la muestra en la fase estacionaria (caso de la cromatografía de gases), o diferentes solubilidades de los componentes en las fases móvil y estacionaria (caso de la cromatografía líquida). La cromatografía en papel es un tipo de cromatografía de partición en la cual la fase estacionaria es una capa de agua adsorbida en una hoja de papel. Entre otras cosas permite: Determinar el grado de pureza de un compuesto Comparar muestras Realizar el seguimiento de una reacción Controlar el contenido de las fracciones obtenidas en cromatografía de columna La fase estacionaria está constituida simplemente por una tira de papel de filtro. Para realizar una cromatografía en papel se procede de la siguiente manera: 1) Preparar o cortar, en su caso, una placa de tamaño adecuado. 2) Disolver una pequeña cantidad de la muestra y, mediante un capilar de vidrio, hinchar en la parte inferior de la placa a cierta distancia del borde. 3) Introducir la placa en un recipiente con el disolvente adecuado. Dicho recipiente debe presentar una atmósfera saturada en el vapor del disolvente por lo que se pone trozo de papel de filtro en la parte posterior y disponer de un sistema de cierre. 4) Cerrar el recipiente y dejar que el líquido ascienda por capilaridad. 5) Revelar la placa para poner de manifiesto donde se encuentran los puntos. Hay varios tipos de cromatografía, la ascendente (papel hacia arriba), descendente (papel invertido), radial y de separación de zonas y sectores. Al entrar en contacto con los disolventes empieza su fase de movilidad lo que produce unas manchas características sobre el papel, generalmente, estas no son coloreadas y se revelan con una lámpara fluorescente, los contornos se marcan con lápiz. 6) Determinar las posiciones relativas de los puntos mediante el cálculo del Rf Como medida en cromatografía sobre papel se emplea el Rf (Retention factor), el cual se define como el cociente de dividir el recorrido de la sustancia por el disolvente, esto es, la distancia media desde el origen hasta el centro de la mancha (X) dividida por la distancia que media desde el origen hasta el frente del disolvente (S). Cromatografía de Intercambio Iónico La separación depende la adsorción reversible de moléculas de soluto cargadas, a una resina (fase estacionaria) con grupos iónicos de carga opuesta. La fase de resina presenta preferencia por: 1. El ion de carga mayor. 2. El ion con menor radio solvatado. 3. El ion que tenga mayor polarizabilidad La fase estacionaria posee carga eléctrica y por ello interacciona con los componentes de la muestra que tienen carga opuesta. Intercambio aniónico: La fase estacionaria con carga positiva, une aniones, bien los del disolvente (fase móvil) o bien los de la muestra (de ahí la palabra intercambio). dietilaminoetilo (DEAE) dietil-(2-hidroxipropil)aminoetilo polietilenimina Aplicaciones de intercambio aniónico: Se pueden separar los ácidos HCN, carbónico, silícico y bórico de los ácidos fosfórico, sulfúrico y clorhídrico. Los metales que forman complejos cloruro y floruro. Intercambio catiónico: La fase estacionaria con carga negativa, une cationes, bien los del disolvente (fase móvil) o bien los de la muestra. carboxilato sulfonato fosforilo carboximetilo (CM) sulfopropilo (SP) Aplicaciones de intercambio catiónico: Los cationes inorgánicos se pueden determinar en alimentos, tales como los alimentos dietéticos bajos en sodio, y en muestras de orina. Cromatografía de Exclusión Cromatografía de Afinidad Analito es un termino utilizado sobre todo en la química analítica, análisis químico, etc, donde hace referencia a una sustancia, la cual puede ser un ion, un elemento, o incluso un compuesto determinado, que posee un interés en nuestra muestra, pues es la parte que deseamos analizar. Dicha especie química, puede conocerse y ser cuantificada, al pasar a determinar su cantidad en nuestra muestra, además de su concentración, en un proceso químico determinado, como suelen ser las valoraciones químicas, siguiendo una particular forma de medida química.
