Gram positivos molecular

ACTUALIZACION EN RESISTENCIA
BACTERIANA Y NORMAS CLSI 2010
Bases moleculares de la resistencia
a antibióticos en bacterias
Gram positivas
Javier Escobar Pérez
Laboratorio de Genética Molecular Bacteriana (LGMB)
Universidad El Bosque
Correo: [email protected]
[email protected]
Proceso de determinación de la
Resistencia Bacteriana
Identificación y determinación susceptibilidad
Confirmación fenotípica
Confirmación genotípica
(identificación y susceptibilidad)
Lab. Clínico hospitales
retroalimentación
Lab. Referencia
(bases moleculares)
OBJETIVO
Dar a conocer y explicar las bases moleculares
de los mecanismos de resistencia a los
principales antibióticos en bacterias Gram
positivas.
Proporcionar conocimiento para el entendimiento de los procesos
experimentales para la determinación de la resistencia en
bacterias (+)
Staphylococcus spp.
Tomado de: http://info-bashkirbeehoney.com/img/bakteriziditat/Staphylococcus-aureus.jpg
NOCIONES GENERALES:
Envoltura celular bacteriana
Resistencia en Staphylocuccus
aureus
Chambers and DeLeo, 2009. nature review microbiology
Resistencia a penicilinas en
S. aureus:
Lowy F. J Clin Invest. 2003; 111(9):1265
Resistencia a B-lactámicos en
S. aureus:
MSSA
MRSA
8 tipos
ATENCIÓN!!!!!!!
YA HAY B-LACTÁMICOS
ANTI-MRSA
Proteína PBP2a
B-lactámicos anti-MRSA:
ceftobiprole
Tomado de : journals.prous.com/journals/servlet/xmlxsl/pk...
Identificación Molecular
de SARM
-
Aislamientos MRSA
MSSA
16s
mecA
nuc
Amplificación del gen coa (coagulasa)
O del gen tuf para SCoN
Recordar: 80% de mecA en SCoN
Diseminación de SARM-AC
SARM-AH
• Personas hospitalizadas
• SCCmec I-II-III-VIII
• Multirresistencia
• infecciones diversas
• Poca virulencia
SARM-AC
• Personas en la comunidad
• SCCmec IV-V-VI-VII
• Multisensible???
• infecciones SSTI,
neumonia, septicemia.
• MAYOR VIRULENCIA
Epidemiologia SARM-AC
DeLeo et al, 2010, seminar DOI:10.1016/S0140-6736(09)61999-1
Identificación Molecular
de SARM-AC
Factores de virulencia en SARM en Colombia
100%
PCR múltiple de enterotoxinas q, k, PVL, o y m
% de Aislamientos
80%
sek
60%
lukSF
40%
seq
USA CH N
H1 H2 C1 C2 C3 H3 H4 C4 C5 C6 H5 C7
sem
20%
0%
ica
clfA/B
fib
fnbA/B
eta
SARM-AH n=184
PVL
egc
sek
SARM-AC n=86
seq
etb
sed y sej
seo
Polimorfismo genes constitutivos
HinfI
ST8 ST5
HhaI
ST8 ST5
arcc
gmk
HinfI
HhaI
CaiI
MP gk(-)ac(-) ST8 ST5 ST8 ST5 ST8 ST5
557pb
CaiI
ST8 ST5
428pb
500pb
400pb
332pb
129pb
200pb
Cepas control: ST8: USA300 - ST5:Clon chileno
323pb
249pb
300pb
100pb
390pb
87pb
167pb
Resistencia heterogénea y resistencia de
“borderline”
MIC =4ug/mL
mecA positivos
mecA negativos
Sobreexpresión de B-lactamasa
Mutaciones en PBPs constitutivas
Meticilinasa??
Resistencia a
Vancomicina
Introducción de
Daptomicina
Enterococcus spp.
Tomado de: funbactvirus.wordpress.com/2009/01/27/
Enterococcus spp. resistente a
vancomicina VRE ó GRE
30
25
% Resistencia
Glicopéptidos
20
15
19
89
19
90
19
91
19
92
19
93
19
94
19
95
19
96
19
97
19
98
19
99
20
00
• 1960s introducidos en práctica clínica
10
• 1980s gran utilización (MRSA)
5
• Tratamiento de patógenos gram +
0
• Producidos por diferentes especies de
Actinomycetes
• 200 glicopéptidos: vancomicina y
Pacientes de unidades de atención general
teicoplanina
Pacientes de unidades de cuidados intensivos
Enlace a: NNIS Online at CDC
Fuente: National Nosocomial Infections Surveillance (NNIS) System
Bases moleculares de la
resistencia a glicopeptidos
Síntesis peptidoglicano (PG)
Enterococcus spp
Ligasa alternativa que una D-Ala+ DLactato.
Actividad carboxipeptidasa que clive los
terminales D-Ala-D-Ala.
Deshidrogenasa para obtener D-lactato a
partir del piruvato.
Sistema regulador de dos componentes.
Estructura del complejo glicopéptido:
peptidil D-Ala-D-Ala
Sensible
Unión de Vancomicina a su blanco molecular
D-Ala-D-Lactato
Resistente
Genotipos de resistencia a glicopéptidos
VRE Fenotipos
Identificación Molecular
de VRE
Aislamientos
E. Faecalis
Van A
E. faecium
Amplificación del gen ddl (ligasas D-ala-D-ala)
Genes van A, B, C
Bases moleculares de la
resistencia a glicopéptidos en
Staphylococcus spp
VISA
VRSA
Diferente a
Enterococcus spp.
Semejante a
Enterococcus spp.
Biosíntesis de pared y rutas
metabólicas alteradas
(adquisición genes van)
Aumentado el turnover de pared
Engrosamiento de la pared
Reducido entrecruzamiento del PG Muropépidos no amidados (L-Ala-D-GluL-Lys-D-Ala-D-Ala)
Mayor cantidad de PBP2 y PBP2a
Aumentado el pool citoplasmático de monómeros
Resistencia a
glicopéptidos VISA
The Journal of Clinical Investigation | May 2003 | Volume 111 | Number 9
Mecanismo de resistencia en VISA: Trampas de afinidad??
Sensible
Resistente
The Journal of Clinical Investigation | May 2003 | Volume 111 | Number 9
MIC ≥ 8ug/mL
Resistencia heterogénea a
vancomicina hVISA
Kim et al, J Clin Microbiol 2000.
Perfiles de análisis poblacional
(PAP)
Kim et al, J Clin Microbiol 2000.
Daptomicina (lipopeptido)
Tomado de : journals.prous.com/journals/servlet/xmlxsl/pk...
Modo de acción Daptomicina
Cambio de polaridad de la
membrana
+ - + - + + +
Ca2+
+ - + - + + +
Inhibición de procesos básicos celulares
Puede haber resistencia cruzada con
Vancomicina
Resistencia inducible a
Daptomicina
Friedman et al, AAC, 2006
Resistencia a Daptomicina
Alteraciones en los genes Mprf,
YycG y RpoA y B
MUCHAS GRACIAS