SERVI

SERVI - MED
MIGUEL SILVA
®
AÑO 10
SERVI - MED
LABORATORIO CENTRAL
Miguel Silva No. 64 (centro)
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Morelia, Mich. C.P. 58000
CENTROS DE RECEPCION
Y TOMA DE MUESTRAS:
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Servi-Med Hospital La Clemencia
Aquiles Serdán No. 868
Col. La Clemencia
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MOROLEON, Gto. C.P. 38800
BOLETIN INFORMATIVO
NUMERO 59
SEPTIEMBRE 2000
RECIBIO SERVI-MED EL NUEVO EQUIPO DE
CITOMETRIA DE FLUJO COULTER XL
El pasado mes de agosto, Servi-Med
recibió el nuevo equipo de Citometría de
Flujo Coulter Modelo XL-mlc, equipo
especializado en el análisis celular, que ha
encontrado en la clínica, aplicaciones
muy diversas principalmente en las áreas
de oncohematología e inmunología.
Este equipo cuenta con un sistema de
iluminación a base un láser de argón y
cuatro fotomultiplicadores para detección
simultánea de hasta cuatro colores de
fluorocromos, lo que significa la
detección de hasta cuatro marcadores
monoclonales en cada célula al mismo
tiempo. La adquisición de este equipo
representa un gran avance tecnológico en
nuestro estado, que significa la elevación
de la capacidad diagnóstica y una mejoría
en la capacidad de servicio, ya que
estudios que se venían programando para
tomas solo en días específicos, ahora
podrán ser tomados en cualquier día con
la entrega de resultados el mismo día.
Como parte de los preparativos para
poner en marcha este equipo, fueron
tomados cursos intensivos y avanzados
de citometría de flujo en las ciudades de
Puebla, México, Morelia y
Miami
(USA)
DIRECTORIO :
Dr. Francisco Fernández Loaiza
Dr. Adrián Rodríguez Cabrera
Dr. Mario Alvizouri Muñoz
Dr. Alberto Olguín Pérez
Dr. L. Francisco Fernández Treviño
Dr. Héctor Fernando Tovar Tovar
Dra. Ma. Antonia Serrano Espinoza
Q.F.B. Paulina Rodríguez Sánchez
Q.F.B. Ana Ma. Alvizouri Santiago
Q.F.B. Juan Bosco Guzmán Pérez
Biol. Carlos Béjar Lozano
EDICION:
Biol. Carlos Béjar Lozano
REVISION Y DISTRIBUCION:
Dr. Adrián Rodríguez Cabrera
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por personal de Servi-Med que contaba
con especialidad de patología clínica y
con áreas de trabajo en hematología e
inmunología respectivamente, con planes
de trabajo que abarcan las principales
pruebas de apoyo en estas áreas, como;
subpoblaciones de linfocitos CD3 CD4
CD8, antígeno HLA B-27, antígenos
CD55 y CD59 para el diagnóstico de
hemoglobinuria paroxística nocturna,
pruebas de auto-anticuerpos como anti
eritrocitos (coomb´s), anti plaquetas y anti
linfocito, análisis de ciclo celular y de
cantidad de DNA para medir el índice
mitótico y detectar aneuploidías y
finalmente, el fenotipo inmunológico de
las leucemias, para definir estirpe y grado
de maduración de las células neoplásicas,
expresión del gen MDR (Multi Drug
Resistance), todos éstos, temas que serán
tratados a detalle en este y el siguiente
boletín.
En la fotografía inferior aparece la
representante de Coulter - DICIPA,
Q.F.B. Alejandra Posadas López junto
con el Biol. Carlos Béjar Lozano,
patólogo clínico que estará encargado de
área de Citometría de Flujo.
PRUEBAS DE CITOMETRIA DE FLUJO QUE SE REALIZAN EN SERVI-MED
DE FORMA RUTINARIA (PRIMERA PARTE)
1.
ANTICUERPOS ANTI-Rh (Coomb´s Directo)
Esta es una de las pruebas de rutina más solicitada para la
investigación de procesos hemolíticos. Involucra casos
tanto pediátricos por incompatibilidad a Rh como a tipo
sanguíneo, así como procesos hemolíticos autoinmunes.
No son infrecuentes los casos en los que la clásica prueba
de aglutinación con suero de coomb´s es negativa, y
clínicamente persiste la sospecha de un proceso
hemolítico autoinmune, por la presencia de anemia
crónica, deficiencia de hierro, esplenomegalia, etc.
Desde el punto de vista molecular, se requieren
aproximadamente de 400 a 500 moléculas de anticuerpos
fijados sobre el eritrocito para que la prueba de coomb´s
sea positiva. Una cantidad menor puede dar un resultado
negativo por no permitir formarse la red de
microaglutinación de esta prueba, sin embargo ... existen
los anticuerpos y no son demostrables por macrotécnicas
como las de aglutinación con suero de coomb´s.
En estos casos, la prueba realizada mediante Citometría de
Flujo mostrará con una sensibilidad al menos 100 veces
mayor, la presencia de estos anticuerpos, permitiendo
hacer un diagnóstico acertado y permitiendo al médico,
tomar las medidas terapéuticas correctas.
Para esta prueba, a una muestra de sangre del paciente se
le aplica un anticuerpo anti-globulina humana fluorescente
y, en caso de que existan anticuerpos humanos fijados
sobre la superficie de los eritrocitos (“eritrocitos
sensibilizados”), se formara un sándwich inmunológico
(figura 1) formado por el complejo eritrocitoautoanticuerpo-antiglobulina fluorescente
que será
detectado por el citómetro de flujo.
2.- ANTIGENO HLA B-27
Dentro de los antígenos de histocompatibilidad, el
Antígeno HLA B-27 es uno de los más estudiados y
buscado en la clínica, ya que se ha asociado con un mayor
número de enfermedades autoinmunes y se presenta en
patologías de relativa frecuencia en nuestra población.
Anteriormente buscado mediante pruebas complejas de
citotoxicidad, actualmente la citometría de flujo es la
metodología de elección para su investigación por su
sensibilidad y especificidad.
ENFERMEDADES AUTOINMUNES
ASOCIADAS AL ANTIGENO HLA B-27
Enfermedad
Espondilitis Ankilosante
Síndrome de Reiter
Artritis reactiva
Artritis psoriásica
Artritis reumatoide juvenil
234
Riesgo Relativo (*)
69.1
37.0
18.0
12.0
3.9
De esta misma forma se pueden detectar otros
autoanticuerpos como los Anticuerpos anti-Plaquetas,
que suelen presentarse en pacientes politransfundidos, en
los que se observa un consumo anormal de plaquetas. Al
respecto, existe un antígeno asociado a plaquetas llamado
Pla, teniendo este antígeno un comportamiento similar al
Rh, de tal forma que una persona puede tener plaquetas
Pla (+) o Pla (-); un paciente Pla (+) puede recibir
plaquetas Pla (+) o (-), pero un paciente Pla (-) solo puede
recibir plaquetas Pla (-), de lo contrario será sensibilizado,
formando anticuerpos anti-plaquetas y llevándose a cabo
una destrucción sistemática de estas, detectándose este
estado mediante citometría de flujo.
Figura. 1. Eritrocitos humanos sensibilizados por un
autoanticuerpo, marcados por una antiglobulina humana
fluorescente, complejo detectable por citometría de flujo.
El antígeno HLA B-27 se encuentra presente en un 8 % de
la población caucásica, y de ellos, aproximadamente 1 de
cada 4 desarrollarán enfermedades autoinmunes como la
espondilitis anquilosante, por lo que el saber este dato
puede ser de valor tanto pronóstico como diagnóstico.
Considerando que el antígeno HLA DR-2 tiene un riesgo
relativo de 130.0 para sufrir narcolepsia (casi el 100 % de
la población DR-2 + desarrolla esta enfermedad) y que es
de predominio más bien oriental, en nuestra población,
después de este antígeno B-27, ningún otro antígeno HLA
presenta tan elevado riesgo relativo.
Otro HLA de importancia clínica pueden ser el antígeno
HLA DR-3 que se asocia a: Enteropatía por sensibilidad
al gluten (RR=11.6), Hepatitis crónica activa (RR=6.8),
Lupus eritematoso sistémico (RR=2.6), Enfermedad de
Addison (RR=10.5) y Nefropatía por penicilamina
(RR=14.0).
(*) Riesgo relativo (RR) se calcula mediante la ecuación:
( % pacientes Ag + ) ( % controles Ag -)
RR =
( % pacientes Ag - ) ( % controles Ag +)
Servi-Med
3.- SUBPOBLACIONES DE LINFOCITOS
Con el advenimiento de las técnicas modernas de
laboratorio para cuantificar carga viral y determinar las
distintas subpoblaciones de linfocitos, se ha podido
demostrar que un aumento en la carga viral correlaciona
con un descenso de los linfocitos CD4(+) y progresión a la
enfermedad, miden el estado de inmunocompetencia,
determinan la posibilidad de complicaciones y sirven
como un predictor independiente de pronóstico.
Actualmente se considera que la cifra de linfocitos
CD4(+) es una prueba de laboratorio necesaria en la
práctica clínica para brindar atención médica a los
individuos con la infección por el VIH. Su monitoreo es
imprescindible para establecer el estadío y el pronóstico
de cada caso, además de que se utiliza como criterio para
iniciar tratamiento profiláctico contra infecciones
oportunistas.
Una persona sin infección por el VIH, normalmente tiene
cifras de linfocitos T cooperadores CD4(+) mayores de
500 células por mm3, y la relación de linfocitos T
cooperadores y supresores (CD4 ÷ CD8) da una cifra
mayor de 1.0 Durante la infección inicial ocurre una
replicación alta y frecuentemente se asocia a un descenso
de los linfocitos T CD4(+). Una vez hecho el diagnóstico
en la fase inicial de la infección, se establece el
tratamiento y la respuesta a éste se manifiesta por la
recuperación de la población de células CD4(+) y una
disminución de la viremia.
4.- ANTIGENOS CD55 Y CD59 PARA
DIAGNOSTICO
DE
HEMOGLOBINURIA
PAROXISTICA NOCTURNA (HPN)
Le Hemoglobinuria Paroxística Nocturna (HPN) es una
enfermedad en la que existe una mayor sensibilidad al
efecto del complemento hemolítico por parte
principalmente de los eritrocitos, por lo que el paciente
hace crisis hemolíticas desde moderadas hasta severas,
cursando el paciente con anemia, ictericia, etc.
Normalmente, las células hemáticas contienen un gen
llamado Pig-a que codifica la síntesis de la enzima
Glucosil-Transferasa para la formación de una proteína de
anclaje llamada Glucosil-Fosfatidil-Inositol (GPI). Esta
proteína se ubica en la superficie de la membrana de las
células hemáticas (leucocitos y eritrocitos) y sobre ella se
fijan los antígenos CD55 y CD59 (figura anexa),
formando un complejo que se encarga de la inactivación
del complemento (C6-C9 o complejo de ataque de
membrana), evitando la autohemólisis. En los pacientes
con HPN existe una mutación en el gen PIG-a,
formándose una enzima Glucosil-transferasa deficiente,
por lo que se forma GPI anormal incapaz de fijar los
antígenos CD55 y/o CD59, haciéndose sensible al efecto
del complemento toda la línea celular mutada, ya sean
eritrocitos o leucocitos, por lo que el análisis debe hacerse
en ambas poblaciones celulares.
Es importante que toda persona que adquiera la infección
por el VIH, cuente con un recuento de linfocitos CD4(+)
al momento del diagnóstico. En los pacientes con cifras de
linfocitos CD4(+) mayores de 500 cel/mm3, los recuentos
deben hacerse cada 6 meses. Cuando las cifras están entre
500 y 200 cel/mm3 el médico determinará la frecuencia
de monitoreo, sin exceder más de 6 meses. Un nivel de
linfocitos CD4(+) menor de 200 cel/mm3 es indicador de
inicio de tratamiento profiláctico contra infecciones
oportunistas hasta volver a cifras superiores a 200
cel/mm3.
Para la realización de esta prueba, es necesario emplear
tres marcadores monoclonales, que son: CD3, CD4 y
CD8, ya que existen células CD4(+) o CD8(+) que no son
linfocitos T. Los linfocitos T cooperadores presentan los
receptores CD3(+) y CD4(+), mientras que los linfocitos
T supresores presentan los receptores CD3(+) y CD8(+).
Linfocito Cooperador
Linfocito Supresor
Linfocito T Inmaduro
Linfocito B
Células NK
Monocito
CD 3
CD 4
CD 8
+
+
+
-
+
+
+
+
+
+
-
Tabla 1: Expresión de los receptores CD3, CD4 y CD8
en distintos linfocitos.
Su investigación tradicionalmente se ha hecho mediante
las pruebas de sensibilidad a soluciones ácidas (prueba de
Hemólisis Acida o de HAM) y a soluciones concentradas
de los carbohidratos Inulina y Sacarosa, induciéndose en
estas tres pruebas, una hemólisis. Sin embargo, cuando el
paciente se encuentra en la fase hemolítica, las células
anormales se han destruido en mayor o menor grado, por
lo que aunque existen algunas células anormales, su
escasez impide ser detectada esta anomalía mediante
técnicas de hemólisis.
Una prueba más sensible para este diagnóstico es la
investigación de antígenos CD55 y CD59 mediante
citometría de flujo, prueba que Servi-Med realizará de
forma rutinaria.
A nivel nuclear, el gen Pig-a codifica para la síntesis de la
enzima Glucosil-transferasa, con la que se produce la proteína
de anclaje GPI sobre la que se fijan los antígenos CD55 y
CD59 que bloquean el ataque del complemento hemolítico.
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EFECTOS DE UCP2 Y UCP3 SOBRE LA
OBESIDAD Y EL METABOLISMO DE
LIPIDOS
Recientemente se han identificado dos moléculas
homólogas llamadas UCP2 y UCP3 (UnCoupling
Proteins) que según experimentos, se ha encontrado son
las determinantes moleculares responsables de la
degradación y gasto inmediato de los depósitos de
lípidos, lo cual las hace un blanco ideal para el control de
la obesidad. UCP2 se encuentra expresado en una gran
variedad de tejidos, mientras que UCP3 esta expresado
principalmente en músculo esquelético.
En un reporte hecho por la North American Association
for the Study of Obesity y dirigido por Antonio VidalPuig y Michael Rosenbaum, se evaluaron estas proteínas
mediante la medición de los mRNA sintetizados por
células de tejidos adiposos y músculo esquelético para la
expresión de estos UCP´s. En sus resultados reportan que
los niveles del mRNA para UCP2 y UCP3 fueron
similares en sujetos delgados así como en sujetos obesos
pero con peso estable. En contraste, los mRNA de UCP3
se encontraron disminuidos en 38 % (p<0.0059) en
sujetos delgados y 48 % (p<0.0047) en sujetos obesos
cuando se habían sometido a una disminución de peso del
20 %, mientras que los niveles de mRNA para UCP2 se
encontraron aumentados en 30 % en el músculo
esquelético de estos mismos pacientes.
Otros estudios citados encuentran una disminución de un
28 % del mRNA de UCP3 del músculo esquelético en
pacientes con disminución de un 10 % de peso, mientras
que el mRNA para UCP2 en tejido adiposo subcutáneo
que era igual en sujetos delgados y obesos con peso
estable, se incrementó en un 58 % durante el proceso de
pérdida de peso.
En experimentos conjuntos realizados por SmithKline
Beecham y la Universidad de Cambridge dirigidos por el
Dr. John Clapham y publicados en la revista Nature,
reportan que lograron desarrollar una cepa de ratones
transgénicos con sobre-expresión de UCP3 humana y
demostraron que el aporte extra de esta molécula
aumenta la tasa metabólica a expensas de consumo
principalmente de lípidos, tal como sucede durante el
ejercicio, pero sin sudor, dolor o trabajos forzados. Los
ratones no mostraron efectos colaterales, presentaron
niveles de colesterol 70 % mas bajos que el grupo control
y al parecer, pudieron usar su insulina mas
eficientemente, lo cual a su vez tiene especial
importancia, ya que los obesos tienden a desarrollar
diabetes mellitus tipo 2.
A pesar de que el gen de UCP3 fue descubierto hace tres
años, no había sido sino hasta la fecha que el grupo de
investigadores del Dr. John Clapham han demostrado
que potencialmente puede tener aplicaciones clínicas.
No obstante, los experimentos hasta ahora realizados
están en lo que corresponde a una fase inicial y podrían
tardar hasta 10 años en completarse los ensayos
necesarios que demuestren sus beneficios y su inocuidad
en humanos.
- http://www.naaso.org/obres/72/7133.htm
- Patricia Reaney “Lean protein could be key to obesity drug-study”.
Revista Reuters, Londres. Julio 26 del 2000
SE ENCUENTRA EN FASE I DE ESTUDIO EL
USO DE TROMBOPOYETINA HUMANA
RECOMBINANTE EN PACIENTES CON
TRANSPLANTE DE MEDULA OSEA
Durante los días 26 a 30 de Agosto, se
llevó a cabo el 28° Congreso Mundial de
la
Sociedad
Internacional
de
Hematología en la ciudad de Toronto,
Canadá, al que asistió el Dr. Adrián
Rodríguez Cabrera, Jefe del Departamento de
Hematología, quien ha seguido de cerca la
evolución de los avances de la hematología,
principalmente en las áreas de coagulación, manejo
de alteraciones oncohematológicas, avances en la
biología molecular y genética de la hematología,
entre otros temas, principalmente con el objetivo de
buscar nuevas aplicaciones clínicas que aportar a
nuestro medio.
Ya que la recuperación de la cifra de plaquetas en pacientes
sometidos a trasplante de M.O. es un problema grave, se
estudiaron 37 pacientes post-trasplante cuyas cifras de
plaquetas eran menores a 20,000 /PL aún después de 35 días
del procedimiento. Se les administraron dosis desde 0.6, 1.2
y 2.4 Pg/kg en dosis diaria única o múltiples aplicaciones.
Del grupo estudiado, 10 pacientes tuvieron recuperación del
número de plaquetas en un lapso de 28 días. Sin embargo,
cuando la evolución de la recuperación de plaquetas fue
comparada contra un grupo control sin tratamiento, no
encontraron diferencia significativa entre ambos grupos
estudiados. Concluyen que, aunque estos estudios parecen
no apoyar las ventajas del uso de la trombopoyetina humana
recombinante, serán necesarios estudios más completos y
amplios que confirmen o descarten estos hallazgos.
http://www.bloodline.net/article/index (página muy recomendada
para consultas de actualidad en hematología)
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