Obtención, procesamiento, congelación y descongelación de

Obtención, procesamiento, congelación y descongelación de
subpoblaciones de linfocitos T CD4 en individuos infectados por el VIH
Jiménez Fuentes JL, Gallego Jorge, Gómez Coral, Palau Paula, Díaz L y Muñoz-Fernández
MA
BioBanco VIH HGM, Plataforma de Laboratorio, Hospital General Universitario Gregorio
Marañón. Instituto de Investigación Sanitaria Gregorio Marañón. Madrid
Uno de los objetivos del BioBanco VIH HGM es disponer de muestras que los
investigadores necesiten en el futuro. Presentaremos resultados preliminares de
obtención/procesamiento de subpoblaciones de linfocitos T CD4 procedentes de
células mononucleares de sangre periférica de individuos VIH+ y en los procesos de
congelación/descongelación para facilitar la investigación en este tema.
¿Por qué son tan importantes los linfocitos T CD4 en la infección por el VIH?. Porque
son las células dianas del virus, claves en las fase aguda de la infección por VIH y
fundamentales para desarrollar una vacuna ya que están más implicados en controlar
la infección desde el inicio y porque sientan las bases del curso de la infección. Por lo
tanto, cuantificar la robustez de las respuestas de linfocitos T CD4 durante la fase
aguda puede ser una forma de cuantificar la velocidad de progresión de la
enfermedad. La capacidad del sistema inmune en montar una respuesta específica
contra el VIH es un factor clave en el curso de la enfermedad. Los individuos VIH+ que
controlan el virus tienen mayor número de linfocitos T CD4 específicos y algunos de
estos linfocitos son muy activos para reconocer y eliminar al VIH, controlando la
replicación viral inmediatamente tras la infección. Por otra parte, el tratamiento
temprano, primeros días/meses, con antirretrovirales reduce el número de linfocitos T
CD4 de memoria ("larga vida"), disminuyendo el tamaño del reservorio celular y
alterando la distribución de subpoblaciones de linfocitos T, pudiéndos preservar el
desarrollo normal de células B y T memoria.
Las subpoblaciones de linfocitos T CD4 las obtenemos por citometría de flujo, que
permite separar células en función de parámetros previamente definidos por el
biobankero. Utilizar múltiples fluorocromos de forma simultánea nos permite clasificar y
separar las subpoblaciones en función de la expresión de sus propiedades. Además,
utlizamos autoMACS (Miltenyi Biotec) que nos permite la separación automatizada de
células mediante bolas paramagnéticas adheridas a la superfície celular mediante
anticuerpos monoclonales. La disposición de subpoblaciones de linfocitos T CD4 en el
BioBanco permitiría llevar a cabo proyectos de investigación complejos en una
patología tan importante como la infección por el VIH.