BD Campylobacter Bloodfree Selective Medium

INSTRUCCIONES DE USO –
MEDIOS EN PLACA LISTOS
PARA USAR
PA-254095.08
Rev.: Mar 2013
BD Campylobacter Bloodfree Selective Medium
USO PREVISTO
BD Campylobacter Bloodfree Selective Medium (medio selectivo sin sangre para
campilobacterias) es un medio selectivo para el aislamiento de las especies de Campylobacter
a partir de muestras fecales humanas.
PRINCIPIOS Y EXPLICACIÓN DEL PROCEDIMIENTO
Método microbiológico.
Se ha demostrado que Campylobacter incluye especies que constituyen patógenos importantes
que causan infecciones intestinales, tales como diarrea y gastroenteritis aguda1-3. En las zonas
rurales y en países menos desarrollados, las campilobacterias superan en número a Salmonella
como patógenos intestinales. La bacteria C. jejuni está considerada como la causa más común
de enteritis bacteriana esporádica en todo el mundo1.
La especie aislada con mayor frecuencia es Campylobacter jejuni, mientras que C. coli, C. lari y
otras especies son menos frecuentes.
Se han desarrollado varios medios selectivos para el aislamiento de Campylobacter. Los
primeros medios utilizados contenían todos ellos sangre, que es necesaria para absorber los
radicales y peróxidos que podrían inhibir el crecimiento de las campilobacterias microaerófilas.
Posteriormente, se desarrollaron sustitutos de la sangre (nutriente no necesario para estos
microorganismos)4,5. Los estudios comparativos entre medios selectivos con sangre y sin
sangre para campilobacterias han demostrado que los medios sin sangre y con carbón vegetal
son superiores a los que contienen sangre, además de aumentar la aerotolerancia de dichos
organismos4,5. Los antibióticos se han utilizado solos o en combinación para inhibir el
crecimiento de la flora acompañante. Bolton y colaboradores desarrollaron una combinación de
desoxicolato y cefoperazona que inhibe el crecimiento de la mayoría de los microorganismos de
la flora normal, pero no C. jejuni, C. fetus, C. coli y C. lari4,5.
En BD Campylobacter Bloodfree Selective Medium, se utilizan extracto de carne bovina y
dos peptonas diferentes como fuentes de nitrógeno. La combinación de carbón vegetal activo,
sulfato ferroso y piruvato sódico se utiliza para sustituir la sangre1,2,7. El carbón vegetal absorbe
numerosos compuestos tóxicos, mientras que el sulfato ferroso y el piruvato actúan como
reductores químicos. El desoxicolato y la cefoperazona se utilizan para inhibir el crecimiento de
la flora intestinal normal.
REACTIVOS
BD Campylobacter Bloodfree Selective Medium y BD Campylobacter Bloodfree CTA Agar
contienen el siguiente medio base:
Fórmula* por litro de agua purificada
Extracto de carne bovina
10,0 g/L
Peptona
10.0
Cloruro sódico
5.0
Carbón vegetal (activo)
4.0
Caseína hidrolizada
3.0
Desoxicolato sódico
1.0
Sulfato ferroso
0.25
Piruvato sódico
0.25
Cefoperazona
32,0 mg/L
Agar
12,0 g/L
pH 7,2 ± 0,3
*Ajustada y/o complementada para satisfacer los criterios de rendimiento.
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PRECAUCIONES
. Solamente para uso profesional.
No utilizar las placas si muestran evidencia de contaminación microbiana, decoloración,
deshidratación, grietas o cualquier otro signo de deterioro.
Consultar los procedimientos de manipulación aséptica, riesgos biológicos y eliminación del
producto en el documento INSTRUCCIONES GENERALES DE USO.
ALMACENAMIENTO Y VIDA ÚTIL
Al recibir las placas, almacenarlas en un lugar oscuro a una temperatura de 2 a 8 °C en su
envase original hasta justo antes de su uso. Evitar la congelación y el sobrecalentamiento. Las
placas pueden inocularse hasta la fecha de caducidad (véase la etiqueta del paquete) e
incubarse durante los tiempos de incubación recomendados.
Las placas de pilas abiertas de 10 unidades almacenadas en un área limpia a una temperatura
de 2 a 8 °C pueden utilizarse durante una semana.
CONTROL DE CALIDAD DEL USUARIO
Inocular muestras representativas con las cepas siguientes (para obtener más datos, véase el
documento INSTRUCCIONES GENERALES DE USO). Incubar las placas entre 35 y 37 °C en
atmósfera microaerobia (por ejemplo, en una jarra BD GasPak equipada con sobres del
sistema de recipientes BD GasPak EZ Campy Container System Sachets) durante un tiempo
de 42 a 48 horas.
Cepas
BD Campylobacter Bloodfree Selective Medium
C. jejuni subsp. jejuni ATCC 33291
Crecimiento; colonias de color gris, propagación posible
Campylobacter fetus DSM 5361
Crecimiento; colonias de color gris
Escherichia coli ATCC 25922
Inhibición de parcial a completa
Enterococcus faecalis ATCC 29212
Inhibición de parcial a completa
Proteus mirabilis ATCC 14153
Inhibición de parcial a completa
Sin inocular
Color negro brillante
Tenga en cuenta que el crecimiento de los hongos no se inhibe en este medio.
PROCEDIMIENTO
Materiales suministrados
BD Campylobacter Bloodfree Selective Medium suministrado en placas Stacker de 90 mm.
Con control microbiológico.
Materiales no suministrados
Medios de cultivo auxiliares, reactivos y el equipo de laboratorio que se requiera.
Tipos de muestras
Muestras de heces frescas o torundas rectales tomadas a pacientes en los que hay sospecha
de infección con especies de Campylobacter. El medio también puede utilizarse para
muestras de carne y otros alimentos (véase también CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTO
Y LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO). Las muestras fecales, torundas y muestras de
alimentos no deben tener más de 24 a 48 horas.
Las torundas rectales deben insertarse en los medios de transporte apropiados (por ejemplo,
medio Cary Blair)2. Si no se han de procesar de inmediato, almacenar las muestras en los
medios de transporte a una temperatura de 4 a 8 °C. Evitar la deshidratación y la exposición
al oxígeno.
Procedimiento de análisis
Una vez recibida la muestra en el laboratorio, sembrarla en estrías para su aislamiento tan
pronto como sea posible, en BD Campylobacter Bloodfree Selective Medium. La carne u
otros alimentos primero deben triturarse u homogeneizarse para luego inocularse (directamente
o después de suspender la muestra) en una pequeña cantidad de caldo de peptona en el
medio.
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Si el material se cultiva directamente empleando una torunda, hacerla girar en una sección
pequeña cercana al borde; realizar luego la siembra en estrías a partir de este área inoculada.
Se ha descrito la aplicación de una técnica de filtrado especial para el procesamiento de
muestras seguido de la inoculación de los medios selectivos y no selectivos2,3.
Incubar las placas inoculadas, protegidas de la luz, a una temperatura de 35 ± 2 °C o 42 ± 2 °C
en una atmósfera en la que se ha reducido la concentración de oxígeno y aumentado la de
dióxido de carbono (=microaerobia). La incubación a 42 °C inhibe el crecimiento de
Campylobacter jejuni subsp. doylei y otras numerosas especies. La mayoría de los
microorganismos aislados en este medio crece mejor a una temperatura de 35 ± 2 °C. Se puede
lograr una atmósfera microaerobia utilizando BD GasPak EZ Campy Container System
Sachets en jarras BD GasPak, o bien el sistema BD GasPak EZ CampyPouch System. Otra
posibilidad es crearla evacuando primero la atmósfera de las jarras BD GasPak ventiladas y
reponiéndola con gases provenientes de cilindros. Por lo general es suficiente un tiempo de
incubación de 2 a 3 días, pero se ha demostrado que 5 a 7 días de incubación aumentan la
proporción de aislamiento2.
Resultados
Después de 42 a 48 horas de incubación en una atmósfera microaerobia, se examina si las
placas presentan colonias de Campylobacter características. Las cepas recién aisladas, en
especial de C. jejuni, tienden a proliferar en estos y otros medios para Campylobacter, mientras
que otras especies de Campylobacter tal vez produzcan colonias convexas. Una prueba de
oxidasa positiva y una tinción de Gram que muestra bacilos gram negativos con forma de alas
de gaviota son indicios adicionales de un aislamiento satisfactorio. Se requieren más pruebas
para lograr una confirmación de la identificación2.
CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTO Y LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO
BD Campylobacter Bloodfree Selective Medium es un medio aprobado para el aislamiento
de las especies de Campylobacter a partir de muestras fecales humanas y materiales no
clínicos tales como carne y otros alimentos.
BD Campylobacter Bloodfree Selective Medium inhibe el crecimiento de Arcobacter
cryaerophilus y A. skirrowii6.
Este medio no debe utilizarse para el subcultivo a partir de hemocultivos sospechosos de
contener Campylobacter. En su lugar, debe utilizarse una placa de BD Columbia Agar with 5%
Sheep Blood o de otro medio agar chocolate o agar sangre no selectivo, la cual debe incubarse
en atmósfera microaerobia a una temperatura de 32 a 37 °C.
El número de especies de Campylobacter y microorganismos relacionados que aparecen como
agentes infecciosos es elevado y varía su sensibilidad a los agentes antimicrobianos utilizados
como inhibidores en medios de aislamiento. Además, estos microorganismos pueden requerir
temperaturas de incubación diferentes para poder crecer. Puede ser necesaria la inoculación
de varios medios de aislamiento selectivo diferentes y una incubación a distintas temperaturas2.
Por tanto, antes de utilizar un medio para microorganismos aislados raramente o de descripción
reciente, el usuario primero debe comprobar su idoneidad realizando cultivos puros del
microorganismo en cuestión.
REFERENCIAS
1. Nachamkin, I., Blaser, M.J., and L.S. Thompkins. 1992. Campylobacter jejuni: current status
and future trends. American Society for Microbiology, Washington, D.C.
2. Fitzgerald, C, and Nachamkin, I. 2007. Campylobacter and Arcobacter. In: Murray, P. R., E.
J. Baron, J.H. Jorgensen, M.L. Landry, and M.A. Pfaller (ed.). Manual of clinical
microbiology, 9th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C.
3. Engberg, J. et al. 2000. Prevalence of Campylobacter, Arcobacter, Helicobacter, and
Sutterella spp. in human fecal samples as estimated by a reevaluation of isolation methods
for campylobacters. J. Clin. Microbiol. 38: 286-291.
4. Hutchinson, D. N.and P. J. Bolton. 1984. Letter, J. Clin. Pathol. 37: 956–957.
5. Bolton, F.J., Hutchinson, D.N., and D. Coates. 1984. Blood-free selective medium for
isolation of Campylobacter jejuni from feces. J. Clin. Microbiol. 19: 169-171.
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6. Aspinal, S.T. et al. 1993. Selective medium for thermophilic campylobacters including
Campylobacter upsaliensis. J. Clin. Pathol. 46: 829-831.
ENVASE/DISPONIBILIDAD
BD Campylobacter Bloodfree Selective Medium
Nº de cat. 254403
Medios en placa listos para usar, 20 placas
Nº de cat. 254095
Medios en placa listos para usar, 120 placas
INFORMACIÓN ADICIONAL
Para obtener más información, póngase en contacto con su representante local de BD.
Becton Dickinson GmbH
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