Técnicas para medir Inmunidad Celular

Técnicas para medir
Inmunidad Celular
Inmunología Aplicada 1065
Semestre 2005-2 Grupo 03
Carolina Hernández Martínez
Subprograma 121
Formación de profesores
Revisado por MD Lastra
HEMOGRAMA
Número total de eritrocitos, plaquetas,
linfocitos, monocitos y granulocitos
Población linfocitaria:
Linfocitos B: CD19, CD20
Linfocitos T: CD3, CD4, CD8
Células NK: CD56, CD16
Función de las células T
Pruebas cutáneas de hipersensibilidad
retardada
Estudios funcionales “in vitro”
Respuesta linfoproliferativa
Cultivo mixto de linfocitos
Produción de mediadores:citocinas
Citotoxicidad T CD8+
Citotoxicidad NK
Test de hipersensibilidad retardada
Respuesta a diferentes
antígenos.
El método de la blastogénesis consiste en
cultivar los linfocitos
evaluando su
respuesta a antígenos específicos o con
varios mitógenos que provocan mitosis
(inmunoproliferación por estímulos no
específicos). La transformación blástica
específica se mide por la capacidad que
tiene
el
antígeno
de
inducir
inmunoproliferación.
Rosetas con los eritrocitos
Los linfocitos T presentan la característica de
formar rosetas cuando se unen a los eritrocitos
de carnero . Se pueden cuantificar los linfocitos
T incubándolos con eritrocitos de carnero
(reconocimiento de moléculas CD2+ y CD58+);
posteriormente se observan al microscopio,
cuantificando las rosetas (se considera normal
entre 70 y 80% positivas).
LA ACTIVIDAD CITOTÓXICA DE LOS
LINFOCITOS T (CD 8+)
La actividad citotóxica de los linfocitos T
CD 8+ frente a una célula blanco (diana)
se puede estudiar, midiendo la capacidad
citocida, que los linfocitos T tienen para
destruir un determinado número de
células diana, al estar ambas poblaciones
en contacto. Se puede medir mediante la
liberación de Cr51 por las células blanco
(diana) previamente marcadas.
Cr51
Cr51
Citotoxicidad NK
En esta prueba se mide la capacidad de
estas células para matar células blanco
especiales (K562). La citotoxicidad suele
determinarse mediante el uso de Cr51.
Por citometría de flujo se determina la
actividad de estas células utilizando los
marcadores específicos.
Subpoblaciones de T
Mediante anticuerpos monoclonales marcados
con fluorocromos (fluoresceína, rodamina, etc)
se pueden marcar las diferentes poblaciones
linfocitarias y cuantificarlas usando un citometro
de flujo:
Linfocitos Th: CD4+
Linfocitos Tc: CD8+
Las mediciones obtenidas se
porcentajes de cada población.
indican
en
Evaluación de la Fagocitosis
Prueba del NBT
Es posible observar la
reducción
del
nitroazul de tetrazolio
(NBT) debido a que
éste
acepta
un
protón, cambiando su
típica
coloración
amarilla transparente
por un azul intenso,
Test de la reducción de
dihidrorodamina (DHR).
Los fagocitos reducen la DHR a un
compuesto fluorescente en individuos
sanos. La ausencias de fluorescencia nos
indicaría
que
puede
tratarse
de
Enfermedad
Granulomatosa
Crónica
ligada al X.
Índice
Fagocítico.
Determina
la
capacidad de fagocitar de los leucocitos,
pero no el poder para digerir las partículas
fagocitadas.
Actividad bactericida. Complementa la
prueba anterior y determina si las
bacterias fagocitadas son o no destruidas
por las enzimas de los fagosomas de los
leucocitos.
Eritrosedimentación. Indice inespecífico,
un valor normal descarta una infección
bacteriana.
Quimiotaxia. Se basan en medir la
locomoción direccional de los neutrófilos
hacia diversos estímulos quimiotácticos:
por ejemplo la cámara de “Boyden”.
Ventana cutánea de “Rebuck”
Normalmente se presenta un acúmulo de
PMN en las primeras 6 horas, después es
sustituido por uno de linfocitos.
Quimioluminiscencia
Los
neutrófilos
emiten
pequeñas
cantidades de radiación electromagnética
después
de
la
ingestión
de
microorganismos. Durante la explosión
respiratoria se genera oxígeno molecular
(inestable y muy reactivo) que se combina
con bacterias u otros elementos
intralisosómicos
formando
grupos
carboxilo de inestabilidad electrónica.
Cuando estos grupos regresan a su
estado basal, emiten energía lumínica
Pruebas para células B
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Proteínas (Electroforésis)
IgA, IgE
Isohematoaglutininas AB (IgM)
Anticuerpos Antitoxoide Tetánico (Función IgM)
Anticuerpos Antitoxoide Diftérico (Función IgG)
Anticuerpos Anti Candida
Anticuerpos Anti Neumococo *
Antígeno CD20 (Función de células B)
Subclases de IgG (IDR)
*Si estos anticuerpos se administran pre y post vacunación pueden ser
evaluados como una prueba funcional
En la actualidad estas técnicas
son de gran utilidad para conocer
las
poblaciones
celulares
afectadas
en
diferentes
enfermedades