BIOSCOT® Anti-D Línea celular: TH-28/MS-26

BIOSCOT®
Anti-D
Línea celular: TH-28/MS-26
Código de producto: BM
IgM/IgG monoclonales humanas
Reactivo para determinación de grupos sanguíneos
Para técnicas en portaobjetos, tubo, microplaca,
antiglobulina indirecta, gel y columna
C
IVD
0123
3.
4.
5.
6.
El producto debe ser transparente. La turbidez puede indicar
contaminación bacteriana. Este reactivo no debe utilizarse si se
observan un precipitado, un gel de fibrina o partículas.
El reactivo es solo para diagnóstico in vitro realizado por profesionales.
El material bovino se obtiene de fuentes aprobadas por la USDA o
de fuentes de las que se dispone de información sobre los animales
de origen. Los animales donantes han sido inspeccionados y se ha
certificado que están sanos; se considera además que tienen bajo
riesgo de EET (encefalopatía espongiforme transmisible).
El producto debe desecharse o bien mediante inmersión durante la
noche en desinfectantes a las concentraciones apropiadas o bien
mediante tratamiento en autoclave.
USO PREVISTO
CONSEJO A LOS USUARIOS
El Anti-D BIOSCOT (línea celular TH-28/MS-26) es un reactivo para
determinación de grupos sanguíneos consistente en IgM/IgG monoclonales
humanos que detectarán el antígeno D cuando se ensayen de acuerdo
con las técnicas en portaobjetos, tubo, microplaca, antiglobulina indirecta,
gel y columna. El reactivo está diseñado para ser utilizado por operarios
entrenados en técnicas serológicas.
Se recomienda el análisis en paralelo de un control positivo y uno negativo
con cada lote de análisis. Los análisis deben considerarse no válidos si los
controles no muestran las reacciones esperadas.
El sistema Rh de grupos sanguíneos
No es necesario utilizar un control del reactivo en paralelo con todos los
análisis cuando se utiliza este reactivo. Solo se recomienda utilizar un control
para el reactivo, como el BIOSCOT Monoclonal Control (código del producto:
TT), cuando se esté determinando el grupo sanguíneo de eritrocitos
procedentes de pacientes con auto-anticuerpos o anomalías proteicas
conocidos. Debe analizarse en paralelo con el reactivo.
Las observaciones de Levine y Stetson, en 1939, y de Landsteiner y
Weiner, en 1940, proporcionaron la base para el conocimiento actual de la
importancia clínica y la detección en laboratorio del anti-D.
El reactivo se ha caracterizado mediante los procedimientos recomendados
en estas instrucciones de uso; el usuario deberá determinar si es adecuado
para otras técnicas.
Aproximadamente el 15 % de las personas de raza blanca carecen
del antígeno RhD y son fácilmente estimuladas por un embarazo RhD
positivo o una transfusión de sangre a producir anti-D. Este puede causar
enfermedad hemolítica del recién nacido o reacciones hemolíticas graves a
las transfusiones.
En caso de cambios en el rendimiento analítico del dispositivo o de que
el envase esté dañado, póngase en contacto con el departamento de
Aseguramiento de calidad de Millipore (UK) Ltd.
D débil y parcial
Conservar el producto abierto o no abierto a 2-8ºC hasta la fecha de
caducidad detallada en la etiqueta.
INTRODUCCIÓN
La expresión D débil indica personas con un número reducido de antígenos
D enteros por glóbulo rojo. La expresión D parcial significa personas a las
que les faltan epítopos D. D categoría VI (DVI) es la categoría D parcial que
carece de la mayoría de los epítopos D. Para detectar algunos fenotipos D
débiles y células DVI con este reactivo se requiere la prueba de antiglobulina
indirecta. No se recomiendan los métodos de portaobjetos y microplaca para
la detección de células D débiles o parciales. Este reactivo es ideal para la
prueba de paciente y del donante.
PRINCIPIO DEL REACTIVO
Cuando se utiliza según las técnicas recomendadas, este reactivo provocará
la aglutinación (amontonamiento) de eritrocitos portadores del antígeno
específico (prueba positiva). La falta de aglutinación de los eritrocitos
demuestra la ausencia del antígeno específico (prueba negativa).
El reactivo se ha optimizado para que pueda utilizarse mediante las técnicas
recomendadas sin ulterior dilución ni añadidos.
El producto se suministra filtrado por 0,22 µm.
MATERIALES
El reactivo Anti-D para determinación de grupos sanguíneos, de código
de producto BM, contiene anticuerpos procedentes de las líneas celulares
TH-28 y MS-26. El reactivo consiste en anticuerpos monoclonales IgM
e IgG humanos en una disolución tampón que contiene protenciadores
químicos macromoleculares. Este reactivo contiene azida sódica al 0,1%
(p/v) y material bovino. Cada vial (10 ml) contiene material suficiente para
aproximadamente 250 - 400 análisis.
PRECAUCIONES
1.
2.
Todos los productos sanguíneos deben tratarse como potencialmente
infecciosos. El donante humano o la línea celular utilizados para
producir este reactivo se han analizado y se ha demostrado que son
negativos para anti-VIH, anti-VHC, AgsHB, VEB y para virus ensayados
mediante MAP (producción de anticuerpos en ratón). Ningún análisis
conocido puede garantizar que un producto derivado de la sangre
humana carezca de agentes infecciosos. Debe tenerse cuidado en el
uso y la eliminación de cada recipiente y su contenido.
El reactivo contiene azida sódica al 0,1% (p/v). La azida sódica puede
ser tóxica si se ingiere y puede reaccionar con el plomo y el cobre de
las tuberías para formar sales muy explosivas. Al desecharla, aclárela
con abundante cantidad de agua.
ALMACENAMIENTO
Si el producto no se conserva a la temperatura correcta, por ejemplo, si se
guarda a temperaturas más elevadas o si se somete a ciclos repetidos de
congelación y descongelación, puede producirse una pérdida acelerada de
la actividad del reactivo.
OBTENCIÓN DE LAS MUESTRAS
No se necesita preparación especial del paciente antes de la obtención de
la muestra. La sangre debe obtenerse mediante una técnica de flebotomía
aprobada conservada en los anticoagulantes citrato o EDTA. Las muestras
deben analizarse cuanto antes después de su recogida. Si va a retrasarse el
análisis, guarde la muestra a 2-8°C. No deben analizarse con este reactivo
las muestras que exhiban una hemólisis macroscópica o contaminación
microbiana. Si las muestras no se conservan a la temperatura correcta,
pueden producirse resultados falsos positivos o falsos negativos.
MATERIALES NECESARIOS, PERO NO SUMINISTRADOS
Técnica en portaobjetos:
• Portaobjetos microscópico
• Disolución salina isotónica o plasma/suero compatibles
Temporizador
Técnica en microplaca:
• Microplaca pocillo U
• Disolución salina isotónica
Temporizador
• Centrífuga (100 fcr)
• Agitador de microplacas
• Lector de microplacas (opcional)
Sistema Ortho BioVue:
• Casetes AHG poliespecífico o
AHG anti-IgG Ortho BioVue®
• Disolución salina isotónica,
tampón fosfato salino (PBS) o
diluyente de eritrocitos Ortho® al
0,8%
• Micropipetas con capacidad de
dispensación de 10, 40 y 50 μl
• Incubador a 37°C
• Temporizador
• Centrífuga idónea para las casetes Ortho BioVue
• Lector (opcional)
Técnica en tubo:
• Tubo de ensayo
• Disolución salina isotónica
• Incubador a 37°C
• Temporizador
• Centrífuga (1000 fcr)
Técnica de antiglobulina
indirecta
• Reactivos globulinas
antihumanas
Eritrocitos sensibilizados con IgG
(células control de Coombs)
Tarjeta DiaMed ID (Bio-Rad):
• Tarjeta ID Anti-IgG Coombs o
LISS/Coombs
• Disolución salina isotónica,
tampón fosfato salino (PBS) o
diluyente ID 2
• Micropipetas con capacidad de
dispensación de 10, 25 y 50 μl
• Incubador a 37°C
• Temporizador
• Centrífuga idónea para tarjetas ID
• Lector (opcional)
TÉCNICA RECOMENDADA
LIMITACIONES
1.
Los eritrocitos que sean positivos en la prueba de antiglobulina directa
(DAT) pueden producir resultados falsos positivos. Se recomienda utilizar el
reactivo BIOSCOT Monoclonal Control (código de producto TT) para detectar
estos posibles resultados falsos positivos.
TÉCNICA EN PORTAOBJETOS (no se recomienda para la detección
de los fenotipos D débil o parcial)
1.1 Preparar una suspensión al 35 - 50 % de los eritrocitos que van
a analizarse en plasma autólogo (o compatible), plasma, suero o
disolución salina isotónica.
1.2 Añadir 1 gota (40 µl) del reactivo Anti-D a un portaobjetos de microscopio
limpio y etiquetado.
1.3 Añadir 1 gota (40 μl) de la suspensión de eritrocitos que van a
analizarse.
1.4 Mezclar el antisuero y las células en un área de unos 2 cm de diámetro
balanceando suave y continuamente el portaobjetos. Hacer una lectura
macroscópia después de 2 minutos. No confundir el secado de la
mezcla con la aglutinación.
2. TÉCNICA EN TUBO
2.1 Lavar las células como mínimo una vez y preparar una suspensión
al 3 -5 % de los eritrocitos que van a analizarse en disolución salina
isotónica.
2.2 Añadir 1 gota (40 μl) de reactivo Anti-D a un tubo de ensayo
adecuadamente etiquetado.
2.3 Añadir 1 gota (40 μl) de la suspensión de eritrocitos que van a
analizarse.
2.4 Mezclar y centrifugar a 1000 fcr durante 20 segundos.
2.5 Agitar suavemente el tubo para soltar los eritrocitos, y realizar un
examen macroscópico para ver si hay aglutinación.
2.6 Las pruebas que dan negativo o débilmente positivo pueden ensayarse
mediante la técnica de antiglobulina indirecta para detectar fenotipos D
débiles o parciales.
3.
3.1
3.2.
3.3.
TÉCNICA DE ANTIGLOBULINA INDIRECTA
Seguir los apartados 2.1 – 2.5
Mezclar e incubar a 37 ºC durante 15 minutos.
Lavar las células una vez con disolución salina isotónica, decantando
por completo la disolución salina.
3.4. Añadir 2 gotas (80 μl) del reactivo de globulinas anti-humanas, mezclar
y centrifugar a 1000 fcr durante 20 segundos.
3.5. Agitar suavemente el tubo para soltar los eritrocitos, y realizar un
examen macroscópico para ver si hay aglutinación.
3.6. Confirmar que las pruebas negativas son válidas añadiendo eritrocitos
sensibilizados con IgG (células control de Coombs), repetir la
centrifugación y examinar por si hubiera aglutinación. Si no se observa
aglutinación, la prueba no es válida y deberá repetirse.
TÉCNICA EN MICROPLACA (no se recomienda para la detección
de los fenotipos D débil o parcial)
4.1. Preparar una suspensión al 3 - 5 % de los eritrocitos que van a
analizarse en disolución salina isotónica.
4.2. Añadir 1 gota (40 μl) de reactivo Anti-D a los pocillos de ensayo
adecuados de una microplaca.
4.3. Añadir un volumen igual (40 μl) de la suspensión de eritrocitos que se
van a ensayar a los pocillos de ensayo adecuados.
4.4. Mezclar el contenido de cada pocillo usando medios manuales o un
agitador de microplacas.
4.5. Incubar la microplaca a temperatura ambiente durante 15 - 20 minutos.
4.6. Centrifugar la microplaca a 100 fcr durante 40 segundos.
4.7.Resuspender los eritrocitos por medios manuales o utilizando un
agitador de microplacas.
4.8. Hacer una lectura macroscópica o con un lector. El uso de un lector de
placas debe ser validado por el usuario.
4.
5. SISTEMA DIAMED ID (BIO-RAD)
5.1. Preparar una suspensión al 3 - 5 % de los eritrocitos que van a
analizarse en disolución salina isotónica o PBS o una suspensión al
0,8 % en diluyente ID 2.
5.2. Añadir 10 μl de la suspensión de eritrocitos que van a analizarse al 3 - 5 %
o 50 μl de la suspensión al 0,8 % al microtubo apropiado de la tarjeta ID.
5.3. Añadir 25 μl de reactivo Anti-D al microtubo apropiado.
5.4. Mezclar suavemente e incubar a 37 ºC durante 10 minutos.
5.5. Centrifugar la tarjeta ID a la velocidad y el tiempo recomendados en las
instrucciones del fabricante de la tarjeta ID.
5.6. Hacer una lectura macroscópica o con un lector. El uso de un lector
debe ser validado por el usuario.
6. SISTEMA ORTHO BIOVUE
6.1. Preparar una suspensión al 3-5 % de los eritrocitos que van a analizarse
en disolución salina isotónica o PBS o una suspensión al 0,8% en
diluyente de eritrocitos Ortho al 0,8%.
6.2. Añadir 10 μl de la suspensión de eritrocitos que van a analizarse al 3 - 5
% o 50 μl de la suspensión al 0,8 % a la cámara de reacción apropiada
de la casete Ortho BioVue.
6.3. Añadir 40 μl de reactivo Anti-D a la cámara de reacción apropiada.
6.4. Mezclar suavemente e incubar a 37 ºC durante 10 minutos.
6.5. Centrifugar la casete a la velocidad y el tiempo recomendados en las
instrucciones del fabricante de la casete.
6.6. Hacer una lectura macroscópica o con un lector. El uso de un lector
debe ser validado por el usuario.
Las microplacas de poliestireno rígido son en general más adecuadas que las
fabricadas en PVC. Debe evaluarse cada lote de microplacas en el sistema
del usuario antes de su aceptación como adecuado para el usos sistemático.
La manipulación o el almacenamiento incorrectos de las tarjetas ID o
las casetes Ortho BioVue pueden producir resultados incorrectos. Las
tarjetas y las casetes deben conservarse y manipularse de acuerdo con las
instruccionesl del fabricante.
Pueden producirse resultados falsos positivos y falsos negativos si hay
contaminación de los materiales de análisis o alguna modificación de las
técnicas recomendadas.
Las técnicas en portaobjeto y microplaca no están recomendadas para la
detección de fenotipos D débiles o parciales.
CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTO
Se ha ensayado el reactivo para determinación del grupo sanguíneo
monoclonal Anti-D (línea celular TH-28/MS-26), con código BM, utilizando
cada una de las técnicas recomendadas con muestras de donante, clínicas
y neonatales. La población de las muestras representaba todos los fenotipos
RhD principales. Para cada técnica, se muestran a continuación el número
total de pruebas (n), así como la sensibilidad y la especificidad calculadas.
Anti-D Código de producto BM
TÉCNICA
SENSIBILIDAD
ESPECIFICIDAD
n
%
n
%
Tubo
2261
99,6
1016
100
Microplaca
17654
99,9
10231
100
Portaobjetos
474
100
130
100
Sistema
DiaMed ID
(Bio-Rad)
282
100
218
98,1
Sistema Ortho
BioVue:
277
100
225
99,1
Definiciones procedentes de las Common Technical Specifications
(CTS):
Sensibilidad diagnóstica:
La probabilidad de que el dispositivo dé un
resultado positivo en presencia del marcador objetivo.
Especificidad diagnóstica: La probabilidad de que el dispositivo dé un
resultado negativo en ausencia del marcador objetivo.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1.
2.
3.
4.
Windmann, F.K. ed. Technical Manual 10th Edition. Washington D.C.:
American Association of Blood Banks, 1990.
Race, R.R. and Sanger, R. Blood Groups in Man, 6th Edition. Oxford:
Blackwell Scientific Publications, 1975.
Issitt, P.D. and Anstee, D.J. Applied Blood Group Serology, 4th Edition.
Montgomery Publication, 1998.
Guidelines for the Blood Transfusion Services in the United Kingdom,
5th Edition. The Stationary Office, 2001.
Millipore (UK) Ltd
Fleming Road
Kirkton Campus
Livingston, EH54 7BN
Reino Unido
Tfno.: +
44 (0)1506 404000 Fax: +44 (0)1506 404001
PI250
2015-03