BIOSCOT® Globulina antihumana Poliespecíficas

BIOSCOT®
Globulina antihumana
Poliespecíficas
Anti-IgG/C3d
Suero de conejo/Línea celular: BRIC-8
Código de producto: TS
Para uso en la prueba de antiglobulina
C
IVD
0123
Este reactivo se ha optimizado para que pueda utilizarse tal como se
suministra mediante las técnicas recomendadas sin ulterior dilución ni
añadidos.
Este producto se suministra filtrado a 0,22 µm.
MATERIALES
La globulina antihumana, código de producto TS, consiste en IgG y C3d
anti-humanos de conejo procedentes de la línea BRIC-8 en una disolución
tampón que contiene potenciadores químicos macromoleculares. El reactivo
contiene azida sódica al 0,1% (p/v) y material bovino. Cada vial (10 ml)
contiene material suficiente para aproximadamente 125 análisis.
PRECAUCIONES
USO PREVISTO
La globulina antihumana BIOSCOT es un reactivo para determinación de
grupos sanguíneos consistente en IgG/C3d poliespecíficos (línea celular
BRIC-8) que detectará anticuerpos sensibilizantes (pero no directamente
aglutinantes) de determinación de grupos sanguíneos. Este reactivo está
diseñado para ser utilizado por operarios entrenados en técnicas serológicas.
INTRODUCCIÓN
Las aplicaciones de las pruebas de globulinas antihumanas comunicadas por
Coombs, Mourant y Race en 1945-1946 establecieron estos métodos como
técnicas de laboratorio de valor inestimable para la detección de anticuerpos
sensibilizantes (pero no directamente aglutinantes). Los ejemplos originales
fueron los Rh específicos. La experiencias posteriores ha demostrado el
inmenso valor de los métodos de antiglobulina en la detección de anticuerpos
con casi cualquier especificidad conocida de grupo sanguíneo clínicamente
significativa.
APLICACIONES
Técnica de antiglobulina indirecta
a) En el cribado del suero de donantes de sangre y de pacientes para
detección de anticuerpos
b) En pruebas de incompatibilidad antes de la transfusión de sangre
c) En el fenotipado de los eritrocitos
d) En la identificación y la valoración de los anticuerpos encontrados en
sueros o eluidos.
Técnica de antiglobulina directa
a) En el diagnóstico de laboratorio de la anemia hemolítica
b) En el diagnóstico de laboratorio de la enfermedad hemolítica del recién
nacido
c) En la investigación de las reacciones transfusionales sospechadas
d) En la investigación de las enfermedades autoinmunitarias en las que existe
unión de inmunoglobulinas o de complemento a los eritrocitos.
Nota:
La detección de algunos anticuerpos clínicamente significativos que activan
el complemento (normalmente dentro del sistema Kidd) se potencia, y en
ocasiones solo es posible, a través del uso de globulinas antihumanas
poliespecíficas, más que con anti-IgG monoespecíficas. A menudo se
infravalora la importancia del diluyente o el disolución de lavado de
eritrocitos. Es preferible el tampón fosfato salino (PBS), pH 6,8 - 7,2, a una
disolución salina de potencia iónica normal no tamponada.
PRINCIPIO DEL REACTIVO
La adición de globulina antihumana a eritrocitos completamente lavados
que estén recubiertos con anticuerpos (inmunoglobulina) o fragmentos del
tercer componente del sistema del complemento (C3b, C3bi, C3dg o C3d)
producirá en general una aglutinación claramente visible de los eritrocitos. La
globulina antihumana (poliespecífica) BIOSCOT es una mezcla de diluciones
seleccionadas de sueros de conejos inmunizados con IgG humana purificada
y anti-C3d monoclonal murino (célula BRIC-8). El reactivo se ha normalizado
para proporcionar una detección óptima de la IgG humana (las cuatro
subclases) y fragmentos de C3 unidos a eritrocitos en todas las aplicaciones
diagnósticas de rutina donde son apropiados los métodos de antiglobulina
directa o indirecta. El reactivo no aglutinará los eritrocitos recubiertos con
fragmentos del C4d.
1. La línea celular utilizada para producir este reactivo es de origen murino;
se ha analizado y se ha demostrado que es negativa para virus mediante
el ensayo MAP (Mouse Antibody Production). Los donantes humanos
utilizados en la fabricación del anticuerpo de conejo se han analizado y
se ha demostrado que son negativos para anti-VIH1, anti-VHI2, anti-VHC,
AgsHB y sífilis. Debe tenerse cuidado en el uso y la eliminación de cada
recipiente y su contenido.
2. El reactivo contiene azida sódica al 0,1% (p/v). La azida sódica puede
ser tóxica si se ingiere y puede reaccionar con el plomo o el cobre de las
tuberías para formar sales muy explosivas. Al desecharla, debe aclararse
con abundante cantidad de agua.
3. Este producto debe ser transparente. La turbidez puede indicar
contaminación bacteriana. El reactivo no debe utilizarse si se observan un
precipitado, un gel de fibrina o partículas.
4. El reactivo es solo para diagnóstico in vitro realizado por profesionales.
5. El material bovino se obtiene de fuentes aprobadas por la USDA o
de fuentes de las que se dispone de información sobre los animales
de origen. Los animales donantes han sido inspeccionados y se ha
certificado que están sanos; se considera además que tienen bajo riesgo
de EET (encefalopatía espongiforme transmisible).
6. El producto debe desecharse o bien mediante inmersión durante la noche
en desinfectantes a las concentraciones apropiadas o bien mediante
tratamiento en autoclave.
CONSEJO A LOS USUARIOS
Para confirmar la validez de un resultado negativo, debe añadirse al tubo
una gota de eritrocitos sensibilizados con IgG (células control de Coombs),
volver a centrifugar y examinar para ver si hay aglutinación. Si no se observa
aglutinación, la prueba no es válida y deberá repetirse.
El reactivo se ha caracterizado mediante los procedimientos recomendados
en este prospecto; el usuario deberá determinar si es adecuado para otras
técnicas.
En caso de cambios en el rendimiento analítico del dispositivo o de que
el envase esté dañado, póngase en contacto con el departamento de
Aseguramiento de calidad de Millipore (UK) Ltd.
ALMACENAMIENTO
Conservar el producto abierto o no abierto a 2-8ºC hasta la fecha de
caducidad detallada en la etiqueta.
Si el producto no se conserva a la temperatura correcta, por ejemplo, si se
guarda a temperaturas más elevadas o si se somete a ciclos repetidos de
congelación y descongelación, puede producirse una pérdida acelerada de
la actividad del reactivo.
OBTENCIÓN DE LAS MUESTRAS
No se necesita preparación especial del paciente antes de la obtención de
la muestra. La sangre debe obtenerse mediante una técnica de flebotomía
aprobada. Las muestras deben recogerse en los anticoagulantes EDTA o
citrato. Las muestras deben analizarse cuanto antes después de su recogida.
Si el análisis va a retrasarse, la muestra debe guardarse a 2-8 °C. No
deben analizarse con este reactivo las muestras que exhiban una hemólisis
macroscópica o contaminación microbiana. Si las muestras no se conservan
a la temperatura correcta, por ejemplo, si se guardan a temperaturas más
elevadas o si se someten a ciclos repetidos de congelación y descongelación,
pueden producirse resultados falsos positivos o falsos negativos.
MATERIALES NECESARIOS, PERO NO SUMINISTRADOS
LIMITACIONES
Técnica de antiglobulina indirecta - Disolución salina de fuerza iónica
normal (NISS):
• Tubo de ensayo
• Disolución salina tamponada con fosfato
• Incubador a 37°C
• Temporizador
• Centrífuga (1000 fcr)
• Eritrocitos sensibilizados con IgG (células control de Coombs)
La contaminación con suero humano o el lavado inadecuado neutralizará la
globulina antihumana.
Técnica de antiglobulina indirecta - Disolución salina de fuerza iónica
baja (LISS):
• Tubo de ensayo
• Disolución salina tamponada con fosfato
• Disolución salina de fuerza iónica baja
• Incubador a 37°C
• Temporizador
• Centrífuga (1000 fcr)
• Eritrocitos sensibilizados con IgG (células control de Coombs)
Técnica de antiglobulina directa:
• Tubo de ensayo
• Disolución salina tamponada con fosfato
• Temporizador
• Centrífuga (1000 fcr)
• Eritrocitos sensibilizados con IgG (células control de Coombs)
Las muestras de sangre coagulada no deben refrigerarse antes de la prueba
de antiglobulina directa.
Pueden producirse resultados falsos positivos o falsos negativos si hay
contaminación de los materiales de análisis o alguna modificación de las
técnicas recomendadas.
CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTO
El reactivo globulina antihumana (línea BRIC-8) poliespecífico consistente
en IgG/C3d, con código de producto TS, se ha ensayado utilizando cada
una de las técnicas recomendadas con muestras de donante, clínicas
y neonatales. Para cada técnica, se calcularon el número total de pruebas
(n), la sensibilidad y la especificidad, y se muestran a continuación:
Globulinas antihumanas Código de producto TS
Técnica
TÉCNICAS RECOMENDADAS
El uso de un lavador de células automático debe ser validado por el usuario.
1.
TÉCNICA DE ANTIGLOBULINA INDIRECTA - Disolución salina de
fuerza iónica normal (NISS):
1.1 A un tubo de ensayo de vidrio limpio claramente etiquetado, añadir
2 gotas (80 μl) del suero de ensayo.
1.2 Añadir 1 gota (40 μl) de la suspensión al 3 - 5 % de eritrocitos que van
a analizarse que se han lavado tres veces y resuspendido en PBS.
1.3 Mezclar muy bien e incubar a 37 ºC durante 30 - 60 minutos.
1.4 Lavar las células cuatro veces en PBS teniendo cuidado de decantar
por completo el líquido de lavado y resuspendiendo el botón celular
después de cada lavado. Decantar el PBS por completo después del
último lavado.
1.5 Añadir 2 gotas (80 µl) de la globulina antihumana (poliespecífica)
BIOSCOT al botón celular seco. Mezclar completamente y centrifugar a
1000 fcr durante 20 segundos.
1.6 Resuspender las células mediante agitación suave y hacer una
lectura macroscópica. Nota: la agitación vigorosa puede alterar una
aglutinación débil.
1.7 La validez de todas las pruebas antiglobulina negativas debe confirmarse
mediante la adición de eritrocitos sensibilizados con IgG (células control
de Coombs).
TÉCNICA DE ANTIGLOBULINA INDIRECTA - Disolución salina de
fuerza iónica baja (LISS)
El uso de suspensiones de células ensayo en LISS permite reducir el
tiempo de incubación a 15 minutos. La sensibilidad de la técnica de
antiglobulina LISS depende del uso de una proporción igual de suero
y suspensión de eritrocitos. Por tanto, se recomienda la utilización de
pipetas semiautomáticas para la adición del suero y la suspensión
celular. Los eritrocitos deben lavarse dos veces en PBS y una vez en
LISS antes de ajustarse a una suspensión al 3 - 5 % en LISS.
2.1 A un tubo de ensayo de vidrio limpio claramente etiquetado, añadir
1 gota (40 μl) del suero de ensayo.
2.2. Añadir un volumen igual (40 μl) de la suspensión al 3 - 5 % de eritrocitos
que se van a ensayar en LISS.
2.3. Mezclar muy bien e incubar a 37 ºC durante 15 minutos. Continuar con
las etapas 1.4 a 1.7 como se especifica en la técnica de antiglobulina
indirecta (NISS).
TÉCNICA DE ANTIGLOBULINA DIRECTA
La técnica de antiglobulina directa se utiliza para demostrar in vivo
adsorción de la IgG o fragmentos del complemento a los eritrocitos. La
muestra de sangre ensayada debe estar recién extraída (menos de 24
horas) y, de preferencia, recogida en anticoagulante EDTA.
3.1 Preparar una suspensión al 3 - 5 % de los eritrocitos que van a
analizarse en PBS.
3.2 A un tubo de ensayo de vidrio limpio claramente etiquetado, añadir
1 gota (40 μl) de la suspensión celular. Continuar con las etapas 1.4 a
1.7 como se especifica en la técnica de antiglobulina indirecta (NISS).
Especificidad
%
n
%
IAT (NISS)
0
0
51
100
IAT (LISS)
19
100
157
100
DAT
13
100
47
100
Abreviaturas: IAT = Prueba de antiglobulina indirecta. DAT = Prueba de
antiglobulina directa.
NISS = Disolución salina de fuerza iónica normal. LISS = Disolución salina
de fuerza iónica baja.
Definiciones procedentes de las Common Technical Specifications
(CTS):
La probabilidad de que el dispositivo dé un
Sensibilidad diagnóstica:
resultado positivo en presencia del marcador objetivo.
Especificidad diagnóstica: La probabilidad de que el dispositivo dé un
resultado negativo en ausencia del marcador objetivo.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
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b)
2.
3.
Sensibilidad
n
c)
d)
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5th Edition 2001. The Stationary Office.
Millipore (UK) Ltd
Fleming Road
Kirkton Campus
Livingston, EH54 7BN
Reino Unido
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PI342
2015-03