BIOSCOT® Anti-K Línea celular: MS-56 Código de

BIOSCOT®
Anti-K
Línea celular: MS-56
Código de producto: TR
IgM monoclonal humano
Reactivo para determinación de grupos sanguíneos
Para técnicas en portaobjetos, tubo, microplaca,
gel y columna
C
6. El producto debe desecharse o bien mediante inmersión durante la
noche en desinfectantes a las concentraciones apropiadas o bien
mediante tratamiento en autoclave.
IVD
0123
CONSEJO A LOS USUARIOS
USO PREVISTO
El Anti-K BIOSCOT es un reactivo para determinación de grupos sanguíneos
consistente en IgM monoclonal humano (línea celular MS-56) que detectará
el antígeno K. Este reactivo es adecuado para su uso mediante las técnicas
de portaobjetos, tubo, microplaca, gel y columna, y está diseñado para ser
utilizado por operarios entrenados en técnicas serológicas.
INTRODUCCIÓN
El sistema Kell de grupos sanguíneos
Desde que Coombs descubriera el antígeno K (KEL1 o Kell) en 1946 y Levine
descubriera su par antitético, k (KEL2 o Cellano) en 1949, la clasificación del
sistema Kell se ha ampliado para incluir 25 antígenos. Los anticuerpos Anti-K
(anti-KEL1) y anti-k (anti-KEL2) pueden producir reacciones transfusionales
graves y la enfermedad hemolítica del recién nacido.
Las frecuencias de los antígenos K y k varían en las diferentes poblaciones.
ANTÍGENO
FRECUENCIA
Raza blanca
K
k
9%
99,8 %
Raza negra
K
3,5 %
k
> 99,9 %
PRINCIPIO DEL REACTIVO
Cuando se utiliza según las técnicas recomendadas, este reactivo provocará
la aglutinación (amontonamiento) de eritrocitos portadores del antígeno
específico (prueba positiva). La falta de aglutinación de los eritrocitos
demuestra la ausencia del antígeno específico (prueba negativa).
El reactivo se ha optimizado para que pueda utilizarse mediante las técnicas
recomendadas sin ulterior dilución ni añadidos.
El producto se suministra filtrado por 0,22 µm.
MATERIALES
El Anti-K de código de producto TR contiene anticuerpos procedentes de
la línea celular MS-56. El reactivo consiste en anticuerpos monoclonales
IgM humanos en una disolución tampón que contiene protenciadores
químicos macromoleculares. Este reactivo contiene azida sódica al 0,1%
(p/v) y material bovino. Cada vial (5 ml) contiene material suficiente para
aproximadamente 125 - 200 análisis.
PRECAUCIONES
1.
Todos los productos sanguíneos deben tratarse como potencialmente
infecciosos. El donante humano o la línea celular utilizados para
producir este reactivo se han analizado y se ha demostrado que son
negativos para anti-VIH, anti-VHC, AgsHB, VEB y para virus ensayados
mediante MAP (producción de anticuerpos en ratón). Ningún análisis
conocido puede garantizar por completo que un producto derivado de la
sangre humana carezca de agentes infecciosos. Debe tenerse cuidado
en el uso y la eliminación de cada recipiente y su contenido.
2. El reactivo contiene azida sódica al 0,1% (p/v). La azida sódica puede
ser tóxica si se ingiere y puede reaccionar con el plomo o el cobre de
las tuberías para formar sales muy explosivas. Al desecharla, debe
aclararse con abundante cantidad de agua.
3. El producto debe ser transparente. La turbidez puede indicar
contaminación bacteriana. Este reactivo no debe utilizarse si se
observan un precipitado, un gel de fibrina o partículas.
4. El reactivo es solo para diagnóstico in vitro realizado por profesionales.
5. El material bovino se obtiene de fuentes aprobadas por la USDA o
de fuentes de las que se dispone de información sobre los animales
de origen. Los animales donantes han sido inspeccionados y se ha
certificado que están sanos; se considera además que tienen bajo
riesgo de EET (encefalopatía espongiforme transmisible).
Se recomienda el análisis en paralelo de un control positivo y uno negativo
con cada lote de análisis. Los análisis deben considerarse no válidos si los
controles no muestran las reacciones esperadas.
No es necesario utilizar un control del reactivo en paralelo con todos los
análisis cuando se utiliza este reactivo. Solo se recomienda utilizar un control
para el reactivo, como el BIOSCOT Monoclonal Control (código del producto:
TT), cuando se esté determinando el grupo sanguíneo de eritrocitos
procedentes de pacientes con auto-anticuerpos o anomalías proteicas
conocidos. Debe analizarse en paralelo con el reactivo.
El reactivo se ha caracterizado mediante los procedimientos recomendados
en estas instrucciones de uso; el usuario deberá determinar si es adecuado
para otras técnicas.
En caso de cambios en el rendimiento analítico del dispositivo o de que
el envase esté dañado, póngase en contacto con el departamento de
Aseguramiento de calidad de Millipore (UK) Ltd.
ALMACENAMIENTO
Conservar el producto abierto o no abierto a 2 - 8 ºC hasta la fecha de
caducidad detallada en la etiqueta.
Si el producto no se conserva a la temperatura correcta, por ejemplo, si se
guarda a temperaturas más elevadas o si se somete a ciclos repetidos de
congelación y descongelación, puede perderse rápidamente la actividad del
reactivo.
OBTENCIÓN DE LAS MUESTRAS
No se necesita preparación especial del paciente antes de la obtención de
la muestra. La sangre debe obtenerse mediante una técnica de flebotomía
aprobada conservada en los anticoagulantes citrato o EDTA. Las muestras
deben analizarse cuanto antes después de su recogida. Si va a retrasarse el
análisis, guarde la muestra a 2-8°C. No deben analizarse con este reactivo
las muestras que exhiban una hemólisis macroscópica o contaminación
microbiana. Si las muestras no se conservan a la temperatura correcta,
pueden producirse resultados falsos positivos o falsos negativos.
MATERIALES NECESARIOS, PERO NO SUMINISTRADOS
Técnica en portaobjetos:
• Portaobjetos microscópico
• Disolución salina isotónica o
plasma/suero compatibles
Temporizador
Técnica en microplaca:
• Microplaca pocillo U
• Disolución salina isotónica
•Temporizador
• Centrífuga (100 fcr)
• Agitador de microplacas
• Lector de microplacas (opcional)
Sistema Ortho BioVue:
• Casetes Ortho BioVue® Neutral
• Disolución salina isotónica,
tampón fosfato salino (PBS) o
diluyente de eritrocitos Ortho®
al 0,8%
• Micropipetas con capacidad de
dispensación de 10, 40 y 50 μl
•Temporizador
• Centrífuga idónea para los
casetes Ortho BioVue
• Lector (opcional)
Técnica en tubo:
• Tubo de ensayo
• Disolución salina isotónica
• Incubador a 37°C
•Temporizador
• Centrífuga (1000 fcr)
Tarjeta DiaMed ID (Bio-Rad):
• Tarjeta ID “NaCl, ensayo
enzimático y aglutininas frías”
• Disolución salina isotónica,
tampón fosfato salino (PBS) o
diluyente ID 2
• Micropipetas con capacidad de
dispensación de 10, 25 y 50 μl
•Temporizador
• Centrífuga idónea para tarjetas ID
• Lector (opcional)
TÉCNICA RECOMENDADA
1. TÉCNICA EN PORTAOBJETOS
1.1. Preparar una suspensión al 35 - 50 % de los eritrocitos que van a
analizarse en plasma autólogo (o compatible), suero o disolución salina
isotónica.
1.2. Añadir 1 gota (40 µl) del reactivo Anti-K a un portaobjetos de microscopio
limpio y etiquetado.
1.3. Añadir 1 gota (40 μl) de la suspensión de eritrocitos que van a
analizarse.
1.4. Mezclar el antisuero y las células en un área de unos 2 cm de diámetro
balanceando suave y continuamente el portaobjetos. Hacer una lectura
macroscópica después de 2 minutos. No confundir el secado de la
mezcla con la aglutinación.
2. TÉCNICA EN TUBO
2.1. Preparar una suspensión al 3 - 5 % de los eritrocitos que van a
analizarse en disolución salina isotónica.
2.2. Añadir 1 gota (40 μl) de reactivo Anti-K a un tubo de ensayo
adecuadamente etiquetado.
2.3. Añadir 1 gota (40 μl) de la suspensión de eritrocitos que van a
analizarse.
2.4. Mezclar y centrifugar a 1000 fcr durante 20 segundos.
2.5. Agitar suavemente el tubo para soltar los eritrocitos, y realizar un
examen macroscópico para ver si hay aglutinación.
2.6. Incubar todas pruebas negativas o débilmente positivas a 37 ºC durante
5 minutos y repetir los pasos 2.4 y 2.5. Esto puede intensificar la fuerza
de la reacción en la determinación del grupo de eritrocitos con fenotipos
débiles o variantes.
3. TÉCNICA EN MICROPLACA
3.1. Preparar una suspensión al 3 - 5 % de los eritrocitos que van a
analizarse en disolución salina isotónica.
3.2. Añadir 1 gota (40 μl) de reactivo Anti-K a los pocillos de ensayo
adecuados de una microplaca.
3.3. Añadir un volumen igual (40 μl) de la suspensión de eritrocitos que se
van a ensayar a los pocillos de ensayo adecuados.
3.4. Mezclar el contenido de cada pocillo usando medios manuales o un
agitador de microplacas.
3.5. Incubar la microplaca a temperatura ambiente durante 15 - 20 minutos.
3.6. Centrifugar la microplaca a 100 fcr durante 40 segundos.
3.7.Resuspender los eritrocitos por medios manuales o utilizando un
agitador de microplacas.
3.8. Hacer una lectura macroscópica o con un lector. El uso de un lector de
placas debe ser validado por el usuario.
4. TARJETA DIAMED ID (BIO-RAD)
4.1. Preparar una suspensión al 3 - 5 % de los eritrocitos que van a
analizarse en disolución salina isotónica o PBS o una suspensión al 0,8
% en diluyente ID 2.
4.2. Añadir 10 μl de la suspensión de eritrocitos que van a analizarse al 3 - 5 %
o 50 μl de la suspensión al 0,8 % al microtubo apropiado de la tarjeta ID.
4.3. Añadir 25 μl de reactivo Anti-K al microtubo apropiado.
4.4. Mezclar suavemente y centrifugar la tarjeta ID a la velocidad y el tiempo
recomendados en las instrucciones del fabricante de la tarjeta ID.
4.5. Hacer una lectura macroscópica o con un lector. El uso de un lector
debe ser validado por el usuario.
5. SISTEMA ORTHO BIOVUE
5.1. Preparar una suspensión al 3-5 % de los eritrocitos que van a analizarse
en disolución salina isotónica o PBS o una suspensión al 0,8% en
diluyente de eritrocitos Ortho al 0,8%.
5.2. Añadir 10 μl de la suspensión de eritrocitos que van a analizarse al
3 - 5 % o 50 μl de la suspensión al 0,8 % a la cámara de reacción
apropiada del casete Ortho BioVue.
5.3. Añadir 40 μl de reactivo Anti-K a la cámara de reacción apropiada.
5.4. Mezclar suavemente y centrifugar la casete a la velocidad y el tiempo
recomendados en las instrucciones del fabricante de la casete.
5.5. Hacer una lectura macroscópica o con un lector. El uso de un lector
debe ser validado por el usuario.
LIMITACIONES
Los eritrocitos que sean positivos en la prueba de antiglobulina directa
(DAT) pueden producir resultados falsos positivos. Se recomienda utilizar el
reactivo BIOSCOT Monoclonal Control (código de producto TT) para detectar
estos posibles resultados falsos positivos.
Las microplacas de poliestireno rígido son en general más adecuadas que las
fabricadas en PVC. Debe evaluarse cada lote de microplacas en el sistema
del usuario antes de su aceptación como adecuado para el usos sistemático.
La manipulación o el almacenamiento incorrectos de las tarjetas ID o
las casetes Ortho BioVue pueden producir resultados incorrectos. Las
tarjetas y las casetes deben conservarse y manipularse de acuerdo con las
instrucciones del fabricante.
Pueden producirse resultados falsos positivos y falsos negativos si hay
contaminación de los materiales de análisis o alguna modificación de las
técnicas recomendadas.
CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTO
Se ha ensayado el reactivo TR para determinación del grupo sanguíneo
consistente en Anti-K monoclonal (línea celular MS-56) utilizando cada
una de las técnicas recomendadas con muestras de donante, clínicas y
neonatales. La población de las muestras representaba todos los fenotipos
principales. Para cada técnica, se muestran a continuación el número total de
pruebas (n), así como la sensibilidad y la especificidad calculadas.
Anti-K Código de producto TR
TÉCNICA
SENSIBILIDAD
ESPECIFICIDAD
n
%
n
%
9
100
189
100
Microplaca
6
100
162
100
Portaobjetos
10
100
158
100
Tarjeta DiaMed
ID (Bio-Rad)
18
100
82
100
Sistema Ortho
BioVue
16
100
84
100
Tubo
Definiciones procedentes de las Common Technical Specifications
(CTS):
Sensibilidad diagnóstica:
La probabilidad de que el dispositivo dé un
resultado positivo en presencia del marcador objetivo.
Especificidad diagnóstica: La probabilidad de que el dispositivo dé un
resultado negativo en ausencia del marcador objetivo.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1.
2.
3.
4.
5.
Issitt, P.D. and Anstee, D.J. Applied Blood Group Serology, 4th Edition.
Montgomery Publication, 1998.
Guidelines for the Blood Transfusion Services in the United Kingdom,
5th Edition. The Stationary Office, 2001.
Coombs, R.R.A., Mourant, A,.E. and Race, R.R. Lancet, 1946: 264-266.
Levine, P., Backer, M., Wigod, M. and Ponder, R.A. Science, 1949, 109:
464-466.
Daniels, G. Human Blood Groups. Blackwell Science Ltd, 1995
Millipore (UK) Ltd
Fleming Road
Kirkton Campus
Livingston, EH54 7BN
Reino Unido
Tfno.: +
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PI323
2015-03