BIOSCOT® Anti-C Línea celular: MS-24 Código: BN Anti

BIOSCOT®
Anti-C
Anti-E
Anti-c
Anti-e
Línea celular: MS-24
Líneas celulares:
MS-80/MS-258
Línea celular: MS-33
Líneas celulares:
MS-16/MS-21/MS-63
Código: BN
Código: TA
Código: TK
Código: TU
IgM monoclonal humano
Reactivos para determinación de grupos sanguíneos
Para técnicas en portaobjetos, tubo, microplaca, gel y
columna
C
IVD
0123
Ningún análisis conocido puede garantizar que un producto derivado de la
sangre humana carezca por completo de agentes infecciosos. Debe tenerse
cuidado en el uso y la eliminación de cada recipiente y su contenido.
2. Estos reactivos contienen azida sódica al 0,1% (p/v). La azida sódica puede
ser tóxica si se ingiere y puede reaccionar con el plomo o el cobre de las
tuberías para formar sales muy explosivas. Al desecharla, debe aclararse con
abundante cantidad de agua.
3. Estos productos deben ser transparentes. La turbidez puede indicar
contaminación bacteriana. Estos reactivos no deben utilizarse si se observan
un precipitado, un gel de fibrina o partículas.
4. Estos reactivos son solo para diagnóstico in vitro realizado por profesionales.
5. Los materiales bovino y porcino se obtienen de fuentes aprobadas por
la USDA o de fuentes de las que se dispone de información sobre los
animales de origen. Los animales donantes del material bovino han sido
inspeccionados y se ha certificado que están sanos; se considera además
que tienen bajo riesgo de EET (encefalopatía espongiforme transmisible).
6. Los productos deben desecharse o bien mediante inmersión durante la
noche en desinfectantes a las concentraciones apropiadas o bien mediante
tratamiento en autoclave.
CONSEJO A LOS USUARIOS
USO PREVISTO
Los reactivos para determinación de grupos sanguíneos humanos monoclonales
Rh-Hr BIOSCOT detectarán los siguientes antígenos:
El Anti-C, línea celular MS-24, código de producto BN, detectará el antígeno C.
El Anti-E, línea celular MS-80/MS-258, código de producto TA, detectará el
antígeno E.
El Anti-c, línea celular MS-33, código de producto TK, detectará el antígeno c.
El Anti-e, línea celular MS-16/MS-21/MS-63, código de producto TU, detectará el
antígeno e.
Estos reactivos son adecuados para su uso mediante las técnicas de portaobjetos,
tubo, microplaca, gel y columna, y están diseñados para ser utilizados por
operarios entrenados en técnicas serológicas.
Se recomienda el análisis en paralelo de un control positivo y uno negativo con
cada lote de análisis. Los análisis deben considerarse no válidos si los controles
no muestran las reacciones esperadas.
No es necesario utilizar un control del reactivo en paralelo con todos los análisis
cuando se utilizan estos reactivos. Solo se recomienda utilizar un control para
el reactivo, como el BIOSCOT Monoclonal Control (código del producto: TT),
cuando se esté determinando el grupo sanguíneo de eritrocitos procedentes de
pacientes con auto-anticuerpos o anomalías proteicas conocidos. Debe analizarse
en paralelo con el reactivo.
Estos reactivos se han caracterizado mediante los procedimientos recomendados
en estas instrucciones de uso; el usuario deberá determinar si son adecuados
para otras técnicas.
INTRODUCCIÓN
En caso de cambios en el rendimiento analítico del dispositivo o de que el envase
esté dañado, póngase en contacto con el departamento de Aseguramiento de
calidad de Millipore (UK) Ltd.
El sistema Rh de grupos sanguíneos
ALMACENAMIENTO
El sistema Rh de grupos sanguíneos contiene más de cuarenta antígenos o
complejos antigénicos expresados sobre los eritrocitos humanos. Los cinco
antígenos Rh básicos y sus anticuerpos específicos son importantes en las
pruebas anteriores a las transfusiones y para la predicción de la enfermedad
hemolítica del recién nacido.
Las frecuencias de los antígenos Rh varían en las diferentes poblaciones.
En la población de raza blanca general, las frecuencias de los antígenos son
aproximadamente:
ANTÍGENO
FRECUENCIA
C
E
c
e
70 %
30 %
80 %
98 %
PRINCIPIO DEL REACTIVO
Cuando se utilizan según las técnicas recomendadas, estos reactivos provocarán
la aglutinación (amontonamiento) de eritrocitos portadores del antígeno específico
(prueba positiva). La falta de aglutinación de los eritrocitos demuestra la ausencia
del antígeno específico (prueba negativa).
Estos reactivos se han optimizado para que puedan utilizarse mediante las
técnicas recomendadas sin ulterior dilución ni añadidos.
Estos productos se suministran filtrados a través de 0,22 μm.
MATERIALES
El Anti-C de código de producto BN contiene anticuerpos procedentes de la
línea celular MS-24. El Anti-E de código de producto TA contiene anticuerpos
procedentes de las líneas celulares MS-80 y MS-258. El Anti-c de código de
producto TK contiene anticuerpos procedentes de la línea celular MS-33. El Anti-e
de código de producto TU contiene anticuerpos procedentes de las líneas celulares
MS-16, MS-21 y MS-63 Los reactivos consisten en anticuerpos monoclonales
IgM humanos en una disolución tampón que contiene protenciadores químicos
macromoleculares. Los reactivos contienen azida sódica al 0,1% (p/v) y material
bovino. El reactivo Anti-e (TU) contiene también material porcino. Cada vial (5 ml)
contiene material suficiente para aproximadamente 125 - 200 análisis.
PRECAUCIONES
1. Todos los productos sanguíneos deben tratarse como potencialmente
infecciosos. Los donantes humanos o las líneas celulares utilizados para
producir estos reactivos se han analizado y se ha demostrado que son
negativos para anti-VIH, anti-VHC, AgsHB, VEB y para virus ensayados
mediante MAP (producción de anticuerpos en ratón).
Conserve los productos abiertos o no abiertos a 2-8ºC hasta la fecha de caducidad
detallada en la etiqueta.
Si los productos no se conservan a la temperatura correcta, por ejemplo, si se
guardan a temperaturas más elevadas o si se someten a ciclos repetidos de
congelación y descongelación, puede producirse una pérdida acelerada de la
actividad del reactivo.
OBTENCIÓN DE LAS MUESTRAS
No se necesita preparación especial del paciente antes de la obtención de la
muestra. La sangre debe obtenerse mediante una técnica de flebotomía aprobada
conservada en los anticoagulantes citrato o EDTA. Las muestras deben analizarse
cuanto antes después de su recogida. Si va a retrasarse el análisis, guarde la
muestra a 2-8°C. No deben analizarse con este reactivo las muestras que exhiban
una hemólisis macroscópica o contaminación microbiana. Si las muestras no se
conservan a la temperatura correcta, pueden producirse resultados falsos positivos
o falsos negativos.
MATERIALES NECESARIOS, PERO NO SUMINISTRADOS
Técnica en portaobjetos:
• Portaobjetos microscópico
• Disolución salina isotónica o
plasma/suero compatibles
Temporizador
Técnica en microplaca:
• Microplaca pocillo U
• Disolución salina isotónica
•Temporizador
• Centrífuga (100 fcr)
• Agitador de microplacas
• Lector de microplacas (opcional)
Sistema Ortho BioVue:
• Casetes Ortho BioVue® Neutral
• Disolución salina isotónica,
tampón fosfato salino (PBS) o
diluyente de eritrocitos Ortho® al
0,8%
• Micropipetas con capacidad de
dispensación de 10, 40 y 50 μl
•Temporizador
• Centrífuga idónea para los
casetes Ortho BioVue
• Lector (opcional)
Técnica en tubo:
• Tubo de ensayo
• Disolución salina isotónica
• Incubador a 37°C
•Temporizador
• Centrífuga (1000 fcr)
Tarjeta DiaMed ID (Bio-Rad):
• Tarjeta ID “NaCl, ensayo
enzimático y aglutininas frías”
• Disolución salina isotónica,
tampón fosfato salino (PBS) o
diluyente ID 2
• Micropipetas con capacidad de
dispensación de 10, 25 y 50 μl
•Temporizador
• Centrífuga idónea para tarjetas ID
• Lector (opcional)
TÉCNICA RECOMENDADA
CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTO
1. TÉCNICA EN PORTAOBJETOS
1.1 Preparar una suspensión al 35 - 50 % de los eritrocitos que van a analizarse
en plasma autólogo (o compatible), suero o disolución salina isotónica.
1.2 Añadir 1 gota (40 µl) del reactivo Anti-C, Anti-E, Anti-c o Anti-e a un
portaobjetos de microscopio limpio y etiquetado.
1.3 Añadir 1 gota (40 μl) de la suspensión de eritrocitos que van a analizarse.
1.4 Mezclar el antisuero y las células en un área de unos 2 cm de diámetro
balanceando suave y continuamente el portaobjetos. Hacer una lectura
macroscópica después de 2 minutos. No confundir el secado de la mezcla
con la aglutinación.
Se han ensayado el reactivo BN para determinación del grupo sanguíneo
consistente en Anti-C monoclonales (línea celular MS-24), el reactivo TA para
determinación del grupo sanguíneo consistente en Anti-E monoclonales (líneas
celulares MS-80/MS-258), el reactivo TK para determinación del grupo sanguíneo
consistente en Anti-c monoclonales (línea celular MS-33) y el reactivo TU para
determinación del grupo sanguíneo consistente en Anti-e monoclonales (líneas
celulares MS-16/MS-21/MS-63) utilizando cada una de las técnicas recomendadas
con muestras de donante, clínicas y neonatales. La población de las muestras
representaba todos los fenotipos principales. Para cada técnica, se muestran
a continuación el número total de pruebas (n), así como la sensibilidad y la
especificidad calculadas.
2. TÉCNICA EN TUBO
2.1. Preparar una suspensión al 3 - 5 % de los eritrocitos que van a analizarse en
disolución salina isotónica.
2.2. Añadir 1 gota (40 μl) de reactivo Anti-C, Anti-E, Anti-c o Anti-e a un tubo de
ensayo adecuadamente etiquetado.
2.3. Añadir 1 gota (40 μl) de la suspensión de eritrocitos que van a analizarse.
2.4. Mezclar y centrifugar a 1000 fcr durante 20 segundos.
2.5. Agitar suavemente el tubo para soltar los eritrocitos, y realizar un examen
macroscópico para ver si hay aglutinación.
2.6. Incubar todas pruebas negativas o débilmente positivas a 37 ºC durante 5
minutos y repetir los pasos 2.4 y 2.5. Esto puede intensificar la fuerza de la
reacción en la determinación del grupo de eritrocitos con fenotipos débiles o
variantes.
3. TÉCNICA EN MICROPLACA
3.1. Preparar una suspensión al 3 - 5 % de los eritrocitos que van a analizarse en
disolución salina isotónica.
3.2. Añadir 1 gota (40 μl) de reactivo Anti-C, Anti-E, Anti-c o Anti-e a los pocillos
de ensayo adecuados de una microplaca.
3.3. Añadir un volumen igual (40 μl) de la suspensión de eritrocitos que van a
ensayarse a los pocillos de ensayo adecuados.
3.4. Mezclar el contenido de cada pocillo usando medios manuales o un agitador
de microplacas.
3.5. Incubar la microplaca a temperatura ambiente durante 15 - 20 minutos.
3.6. Centrifugar la microplaca a 100 fcr durante 40 segundos.
3.7. Resuspender los eritrocitos por medios manuales o utilizando un agitador de
microplacas.
3.8. Hacer una lectura macroscópica o con un lector. El uso de un lector de placas
debe ser validado por el usuario.
4. TARJETA DIAMED ID (BIO-RAD)
4.1. Preparar una suspensión al 3 - 5 % de los eritrocitos que van a analizarse en
disolución salina isotónica o PBS o una suspensión al 0,8 % en diluyente ID
2.
4.2. Añadir 10 μl de la suspensión de eritrocitos que van a analizarse al 3 - 5 %
o 50 μl de la suspensión al 0,8 % al microtubo apropiado de la tarjeta ID.
4.3. Añadir 25 μl de reactivo Anti-C, Anti-E, Anti-c o Anti-e al microtubo apropiado.
4.4. Mezclar suavemente y centrifugar la tarjeta ID a la velocidad y el tiempo
recomendados en las instrucciones del fabricante de la tarjeta ID.
4.5. Hacer una lectura macroscópica o con un lector. El uso de un lector debe ser
validado por el usuario.
5. SISTEMA ORTHO BIOVUE
5.1. Preparar una suspensión al 3-5 % de los eritrocitos que van a analizarse en
disolución salina isotónica o PBS o una suspensión al 0,8% en diluyente de
eritrocitos Ortho al 0,8%.
5.2. Añadir 10 μl de la suspensión de eritrocitos que van a analizarse al 3 - 5 %
o 50 μl de la suspensión al 0,8 % a la cámara de reacción apropiada de la
casete Ortho BioVue.
5.3. Añadir 40 μl de reactivo Anti-C, Anti-E, Anti-c o Anti-e a la cámara de reacción
apropiada.
5.4. Mezclar suavemente y centrifugar la casete a la velocidad y el tiempo
recomendados en las instrucciones del fabricante de la casete.
5.5. Hacer una lectura macroscópica o con un lector. El uso de un lector debe ser
validado por el usuario.
LIMITACIONES
Se ha demostrado que muchos anticuerpos IgM monoclonales humanos anti-Rh
poseen actividad aglutinina fría anti-I/i, en particular con las células de médula o
tratadas con enzimas. Esto puede ponerse de manifiesto si las pruebas se incuban
por debajo de la temperatura recomendada.
Los eritrocitos que sean positivos en la prueba de antiglobulina directa (DAT)
pueden producir resultados falsos positivos. Se recomienda utilizar el reactivo
BIOSCOT Monoclonal Control (código de producto TT) para detectar esos posibles
resultados positivos.
Las microplacas de poliestireno rígido son en general más adecuadas que las
fabricadas en PVC. Debe evaluarse cada lote de microplacas en el sistema del
usuario antes de su aceptación como adecuado para el usos sistemático.
Anti-C Código de producto BN
TÉCNICA
SENSIBILIDAD
ESPECIFICIDAD
n
%
n
%
Tubo
528
100
343
100
Microplaca
70
100
42
100
Portaobjetos
73
100
39
100
Tarjeta DiaMed ID (Bio-Rad)
50
100
50
100
Sistema Ortho BioVue
46
100
54
100
Anti-E Código de producto TA
TÉCNICA
SENSIBILIDAD
ESPECIFICIDAD
n
%
n
%
Tubo
54
100
158
100
Microplaca
54
100
158
100
Portaobjetos
31
100
81
100
Tarjeta DiaMed ID (Bio-Rad)
33
100
67
100
Sistema Ortho BioVue
20
100
80
100
Anti-c Código de producto TK
TÉCNICA
SENSIBILIDAD
ESPECIFICIDAD
n
%
n
%
Tubo
178
100
34
100
Microplaca
178
100
34
100
Portaobjetos
92
100
20
100
Tarjeta DiaMed ID (Bio-Rad)
79
100
21
100
Sistema Ortho BioVue
81
100
19
100
Anti-e Código de producto TU
TÉCNICA
SENSIBILIDAD
ESPECIFICIDAD
n
%
n
%
Tubo
227
100
5
100
Microplaca
227
100
5
100
Portaobjetos
109
100
3
100
Tarjeta DiaMed ID (Bio-Rad)
80
100
20
100
Sistema Ortho BioVue
88
100
12
100
Definiciones procedentes de las Common Technical Specifications (CTS):
Sensibilidad diagnóstica:La probabilidad de que el dispositivo dé un resultado
positivo en presencia del marcador objetivo.
Especificidad diagnóstica: La probabilidad de que el dispositivo dé un resultado
negativo en ausencia del marcador objetivo.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1.
2.
3.
Issitt, P.D. and Anstee, D.J. Applied Blood Group Serology, 4th Edition.
Montgomery Publication, 1998.
Daniels, G. Human Blood Groups. Blackwell Science Ltd, 1995
Guidelines for the Blood Transfusion Services in the United Kingdom, 5th
Edition. The Stationary Office, 2001.
La manipulación o el almacenamiento incorrectos de las tarjetas ID o las casetes
Ortho BioVue pueden producir resultados incorrectos. Las tarjetas y las casetes
deben conservarse y manipularse de acuerdo con las instrucciones del fabricante.
Pueden producirse resultados falsos positivos y falsos negativos si hay
contaminación de los materiales de análisis o alguna modificación de las técnicas
recomendadas.
Millipore (UK) Ltd
Fleming Road
Kirkton Campus
Livingston, EH54 7BN
Reino Unido
Tfno.: +
44 (0)1506 404000 Fax: +44 (0)1506 404001
PI286
2015-03