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EJEMPLOS DE APLICACIONES DE LA TÉCNICA DE
INMUNOFLUORESCENCIA AL DIAGNÓSTICO DE
ENFERMEDADES INFECCIOSAS Y PARASITARIAS
Vet. CHIAPPARRONE, María Laura
Área de Enfermedades Infecciosas
2015
Inmunofluorescencia directa (IFD) para Campylobacter fetus
Un ejemplo de la aplicación de la técnica de inmunofluorescencia directa es
el diagnóstico de rutina de la Campylobacteriosis genital bovina, enfermedad de
transmisión venérea causada por Campylobacter fetus que se caracteriza por
producir mortalidad embrionaria en las hembras, mientras que en el toro no se
observan signos clínicos.
El diagnóstico de rutina se realiza a partir de muestras de esmegma
prepucial en toros, mucus cérvico-vaginal en hembras y líquido de abomaso fetal.
Imagen N° 1. Toma de muestra de esmegma prepucial.
Las muestras clínicas son colectadas en solución fisiológica formolada para
el caso del esmegma prepucial y en medios de transporte como Caldo Brucella
para el caso de mucus cérvico-vaginal y líquido de abomaso. Una alícuota de la
misma se coloca en un portaobjeto, se seca a temperatura ambiente o 37 °C y se
fija con alcohol o acetona, luego se agrega el conjugado (en este caso un
anticuerpo específico contra C. fetus marcado con isotiocianato de fluoresceína) y
se incuba en cámara húmeda a 37 °C durante aproximadamente 40-60 minutos.
A continuación se realizan lavados para eliminar el exceso de reactivo y
luego se realiza la observación al microscopio de fluorescencia.
Imagen N° 2. Flujograma de procesamiento de muestras en inmunofluorescencia
directa para C. fetus.
En caso de que C. fetus esté presente en la muestra clínica analizada, al
agregar el conjugado, éste se unirá al antígeno y se observará fluorescencia.
Imagen N° 3. Esquema de reacción de inmunofluorescencia directa para C. fetus.
En casos positivos se observa el C. fetus fluorescente y su morfología
característica.
Imagen N° 4. Inmunofluorescencia directa para C. fetus: reacción positiva.
Inmunofluorescencia indirecta para Neospora caninum
La Neosporosis bovina es una enfermedad reproductiva causada por el
protozoo Neospora caninum que provoca abortos en bovinos y trastornos
nerviosos en caninos. En bovinos, el diagnóstico de rutina de esta enfermedad se
hace mediante inmunofluorescencia indirecta a partir de muestras de suero.
En esta técnica se utilizan portaobjetos con taquizoítos de N. caninum
adheridos, se conoce como taquizoíto a uno de los estadíos parasitarios del
agente etiológico. A partir de una muestra de sangre bovina sin anticoagulante, se
obtiene un suero límpido y translúcido, no hemolítico. Se coloca una gota de la
muestra clínica en un portaobjeto y se deja incubar en cámara húmeda a 37 °C
durante aproximadamente 40-60 minutos. A continuación, se realizan lavados y
con el objetivo de evidenciar si se produjo la unión antígeno-anticuerpo, se agrega
un anticuerpo antigammaglobulina marcado con isotiocianato de fluoresceína, con
incubación en cámara húmeda a 37 °C durante aproximadamente 40-60 minutos.
Finalmente, se realiza la observación en microscopio de fluorescencia.
Imagen N° 5. Flujograma de procesamiento de muestras en inmunofluorescencia indirecta
para N. caninum.
Imagen N° 6. Esquema de reacción positiva de inmunofluorescencia indirecta
para N. caninum.
Imagen N° 7. Esquema de reacción negativa de inmunofluorescencia indirecta
para N. caninum.
En el caso de sueros positivos, es decir con presencia de anticuerpos
contra N. caninum, se observa fluorescencia de morfologías compatibles con
taquizoítos. Contrariamente, en sueros negativos, no se observará fluorescencia.
Imagen N° 8. Inmunofluorescencia indirecta para N. caninum.
Imagen izquierda: reacción positiva. Imagen derecha: reacción negativa.