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XIX Verano de la Investigación Científica y Tecnológica del Pacífico
EVALUACIÓN DE LA PARTICIPACIÓN DEL CANAL CATIÓNICO TRPV4 EN LA
DIFERENCIACIÓN DE CÉLULAS EPITELIALES
Hilario Ruelas Ramírez. Centro Universitario de Ciencias Exactas e Ingenierías de la
Universidad de Guadalajara, [email protected]. Asesora María del Refugio García
Villegas Centro de Investigación y Estudios Avanzados del Instituto Politécnico Nacional,
[email protected]
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
Las células epiteliales forman una barrera que separa dos compartimientos en la
membrana celular y las polariza, con lo que la composición de estos
compartimientos no es la misma. Esta función de barrera se logra sellando las
uniones intercelulares del epitelio y esto es llevado a cabo mediante un conjunto de
estructuras membranales , entre ellas las uniones estrechas. El establecimiento de
las uniones estrechas entre las células MDCK es uno de los pasos previos a la
diferenciación de este tejido, ya que después de llegar a confluencia comienza su
diferenciación.
Una de las formas de medir la formación de las uniones estrechas es la medición
de la resistencia eléctrica transepitelial (TER, por sus siglas en inglés). Se ha
encontrado en otros estudios que la activación del canal iónico TRPV4 aumenta la
TER, además de que este canal forma heterotetrámeros con otro canal, el TRPP2.
METODOLOGÍA
Se usó la línea celular Madin-Darby canine kidney (MDCK), la cual se cultivó y se
mantuvo resembrando para su uso constante. Asimismo, se realizó una co-tinción
y microscopía de inmunofluorescencia de los canales TRPV4 y TRPP2 para ver su
localización en las células 24 horas después de haber sido sembradas y en células
diferenciadas (analizadas 7 días después de haber llegado a confluencia). Junto
con la microscopía de inmunofluorescencia, se planea hacer un Western Blot para
medir la cantidad del canal TRPV4 y TRPP2 en las mismas 2 etapas que la
inmunofluorescencia.
Se planea realizar otras pruebas como la medición de la TER de las células MDCK
en presencia de un activador y de un bloqueador del canal TRPV4 para ver si
modulación de éste tiene efecto sobre la permeabilidad celular.
CONCLUSIONES GENERALES
Lo que se ha encontrado es que la localización del canal TRPV4 cambia con el
tiempo de cultivo celular; a las 24 horas se encuentra en el núcleo, mientras que en
células diferenciadas se localiza en el cilio, al igual que el canal TRPP2.
El proyecto no ha sido terminado, por lo que otra fase de éste se encuentra en
desarrollo y pretende explicar la localización del canal TRPV4 en el núcleo.
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Pacífico
Agosto 2014