Caracas, 01/11/04

Red Interamericana de Laboratorios de
Análisis de Alimentos
Inter American Network of Food Analysis
Laboratories
PROCEDIMIENTO OPERATIVO:
EFECTIVIDAD DE
DESINFECTANTES
Versión 1.1
GRUPO TÉCNICO DE MICROBIOLOGÍA
NOVIEMBRE 2009
1. OBJETIVO
Establecer un procedimiento para la determinación de la efectividad de los
diferentes desinfectantes utilizados en el laboratorio.
2. APLICACIÓN
A todo desinfectante que ingresa para ser utilizado en el laboratorio.
3. INTRODUCCIÓN
Los desinfectantes ejercen su acción sobre alguna estructura o algún
mecanismo vital de los microorganismos. La eficacia de un producto desinfectante
depende de la naturaleza del microorganismo, del número de células iniciales, de
la concentración y tiempo de contacto del sanitizante. La concentración requerida
para la efectividad del desinfectante depende de su estructura química, pH,
temperatura y presencia de materia orgánica .
Es imprescindible cuantificar la susceptibilidad de los microorganismos a los
desinfectantes para poder predecir futuros problemas y tratamientos adecuados.
Los laboratorios de microbiología deben por lo tanto evaluar la efectividad de los
desinfectantes que usan.
4. TERMINOS Y DEFINICIONES
Desinfección
Es un proceso en el que se destruyen las formas vegetativas de los
microorganismos más comunes, pero no necesariamente esporas. Generalmente
el desinfectante es un producto químico excesivamente toxico para ser usado
directamente sobre tejidos vivos.
5. PRINCIPIO
Para garantizar la efectividad de los desinfectantes es necesario someterlos a
diferentes pruebas de acuerdo al uso que se les va a dar. En el caso del área
microbiológica donde se trabaja con microorganismos y en su mayoría estos
suelen ser patógenos es preciso contar con desinfectantes que demuestren su
acción germicida.
6. MATERIALES Y EQUIPOS

Incinerador de asas

Cámara de Bioseguridad con filtro HEPA

Agitador vortex con velocidad regulable

Estufa de cultivo a 35ºC

Autoclave eléctrica con ciclo de esterilización automático

Asas de inoculación

Cronometro

Caldo BHI

Diluyente en tubos (peptona al 0,1%)

Desinfectante a ser controlado

Leche en polvo
7. BIOSEGURIDAD
Para realizar este procedimiento de forma segura es necesario seguir las normas
básicas de bioseguridad que se aplican en los laboratorios de microbiología,
teniendo en cuenta que se trabaja con microorganismos vivos, para lo cual es
indispensable el uso de todos los equipos y materiales de protección personal,
previniendo los siguientes riesgos:
8. REACTIVACIÓN DE CULTIVOS DE REFERENCIA
Periodicidad: El control de la efectividad de los desinfectantes es realizado cada
vez que se rotara el uso de los mismos y cuando se va utilizar una marca o
principio activo diferente de los ya probados
Pasos a seguir:
1º. Sembrar diferentes tipos de bacterias (especialmente aquellas que
generalmente son aisladas de los alimentos que se analizan y son
manejadas de rutina en el laboratorio) en 10 ml de caldo BHI (por lo menos
5 microorganismos)
2º. Incubar a 35ºC durante 24 Hrs.
3º. Hacer un pool de los cultivos en fase estacionaria, tomando 0.5 ml de cada
tubo de caldo BHI.
4º. Hacer diluciones decimales del pool hasta 10-2 .
5º. Preparar el desinfectante según indicaciones del fabricante y/o en las
concentraciones que se quieran probar.
6º. Preparar la materia orgánica, consistente en una solución al 10% de leche
en polvo. A partir de esta realizar diluciones hasta 10-2.
7º. Poner 0.1 ml de la dilución 10-2 de la materia orgánica a 9 ml de
desinfectante preparado.
8º. Añadir al tubo con desinfectante, 0.1 ml del pool de microorganismos de la
dilución 10-2 e inmediatamente controlar el tiempo hasta los primeros 5 seg.
9º. Repetir esta operación a los 10, 15, 20, 30 segundos, en diferentes caldos
con el desinfectante e incubar los caldos BHI a 35ºC. Paralelamente se
incuban tubos con caldo BHI sin inocular.
10º.
Observar los tubos a las 24, 48, 72 y 96 Hrs., y registrar los
resultados que van presentando: Anotar positivo cuando hay enturbiamiento
y negativo cuando no presenten enturbiamiento.
11º.
Retirar aquellos tubos que presentan enturbiamiento y seguir
cultivando los negativos hasta cumplir las 96 horas.
12º.
De acuerdo a los resultados obtenidos se elegirá como más
adecuada aquella concentración y menor tiempo de exposición que no haya
presentado enturbiamiento luego de las 96 horas de cultivo.