IA-MBA-PT-029 Determinación de Clostridium perfringens

LANASEVE
Rige a partir
de:
10/11/10
Código:
IA-MBA-PT- 029
Determinación de Clostridium perfringens en agua
potable
Versión 05
Página - 1 - de 3
Elaborado por: .Jefe de Sección
Revisado por: Encargada de Calidad de Sección
Aprobado por: Jefe de Sección
1. Objetivo
Disponer de un método para determinar Clostridium perfringes.
2. Alcance
Para aplicar en muestras de agua potable.
3. Responsabilidad y Autoridad
El Jefe de Sección: debe velar por el cumplimiento de las normas establecidas en este procedimiento.
Los analistas deben realizar el ensayo según lo descrito en este procedimiento.
4. Definiciones
No aplica
5. Abreviaturas y/o Siglas
No aplica
6. Referencias y/o Bibliografía
IA-MBA-PE-009-RE- 008 Hoja de trabajo
IA-MBA-PO-004 Control de Equipo
Directiva 98/83/CE relativa a la calidad de las aguas destinadas al consumo humano
7. Descripción del procedimiento
7.1 Fundamento Teórico
Filtración de un volumen específico de agua a través de una membrana con un tamaño de 47 mm y poro
de 0,45 μm que permite retener la bacteria.
La
membrana es colocada en un agar selectivo/ diferencial que contiene D-cicloserina, polimixina, β-D-
glucosuro de indoxil, bifosfato de Fenolftaleína y Cloruro de hierro III. Después de incubación anaeróbica
las colonias típicas presentan color amarillo opaco, que expuestas a vapores de hidróxido de amonio se
tornan color rosa a rojo.
Normativo Propiedad del SENASA, el documento vigente se encuentra en INTERNET cualquier versión impresa es una copia no
controlada
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7.2 Equipo, Materiales, Medios de cultivo y reactivos
7.2.1 Equipo
Incubador 44ºC ± 1°C
Sistema para filtración de agua (Embudos, bomba para vacío, soporte para embudos)
7.2.2 Materiales
Pinzas estériles
Membranas Millipore 0,45 µm estériles
Jarra de anaerobiosis
Sobres de Anaerogen o similar para 2.5 l o 3.5 l
7.2.3 Medios de cultivo y reactivos
Agar base m-CP
Suplemento m-CP (Polimixina-B sulfato y D-cycloserine)
Indoxyl-β-D-glucósido
Fenolftaleína difosfato solución 0,5%
FeCl3 · 6H2O (solución 4,5%)
Hidróxido de amonio
7.3 Procedimiento
7.3.1
Colocar la membrana Millipore en el embudo de filtración, utilizar pinzas estériles.
7.3.2
Sellar el embudo
7.3.3
Depositar 100 ml de agua en el embudo y filtrar por vacío.
7.3.4
Remover la membrana con pinzas estériles y colocarla en el medio de cultivo agar m-CP
7.3.5
Incubar las placas a 44 °C ± 1 °C por (21 ± 3) horas en jarra de anaerobiosis.
7.3.6
Después del período de incubación examinar las placas y considerar las colonias de color amarillo
opaco como colonias típicas.
7.3.7
Exponer las colonias a vapores de hidróxido de amonio por 20-30 segundos, las colonias se tornan
de color rosado.
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7.3.8
Registrar la información en el formulario IA-MBA-PE-009-RE- 008 Hoja de trabajo
7.3.9
Reportar como ufc/ en 100 ml.
7.4 Puntos Críticos de Control
Control de temperaturas de los incubadores, se debe mantener el registro de la temperatura óptima del
equipo, así como las medidas correctivas en caso de alguna variable según IA-MBA-PO-004 Control de
Equipo.
8. Anexos
No aplica
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