Reactivos necesarios:

Título: Análisis de la diversidad bacteriana en una muestra de suelo mediante técnicas
independientes del cultivo.
Horas totales: 40 horas.
Docentes: Dra. María Laura Tonelli, Dr. Jorge Angelini, Dr. Fernando Ibañez.
Número de alumnos: 10 alumnos máximo. Preferentemente con alguna experiencia en biología
molecular (como el curso anterior).
Desarrollo de las actividades:
El curso estará basado en el desarrollo de un trabajo práctico de laboratorio en el que se analizará la
diversidad bacteriana de una muestra de suelo mediante técnicas independientes del cultivo. Para ello, se
realizará extracción de ADN a partir de suelos, amplificación por PCR de algún gen específico y posterior
digestión con enzimas (RFLP), preparación de células competentes, clonado y selección de clones
positivos. Además se presentarán herramientas bioinformáticas para el análisis de los datos generados.
También se presentará el marco teórico de las metodologías y estrategias utilizadas.
Cronograma
Martes 27 de Marzo (10 a 17h)
Extracción de ADN de una comunidad
Amplificación de ADN usando cebadores universales para 16S y nifH.
Miércoles 28 (9 a 17h)
Visualización de los productos de amplificación en geles de Agarosa.
Digestión de los productos de amplificación.
Ligación de los productos de PCR a vector específico.
Preparación de geles de poliacrilamida.
Jueves 29 (9 a 17h)
Transformación de células competentes de E. coli con los productos de amplificación de los genes 16S y
nifH
Siembra del producto de las digestiones en geles de poliacrilamida y agarosa
Viernes 30 (9 a 17h)
Identificación de las colonias transformadas y repique en placas frescas
Análisis bioinformático de los RFLP y de la genoteca construida.
Lunes 2 (9 a 17h)
PCR a partir de las colonias usando los cebadores universales M13
Selección de los transformantes con el inserto de interés, preparación para su secuenciación.
Durante el desarrollo del curso se realizarán clases teóricas sobre la temática del curso, en horarios a
determinar:
Herramientas dependientes e independientes del cultivo para el análisis de la diversidad
microbiana
Técnicas de extracción de ADN de comunidades y detección de la presencia de inhibidores de
PCR
Utilización de las distintas técnicas de secuenciación para el análisis metagenómico
Introducción a las herramientas bioinformáticas para el análisis de diversidad microbiana
Técnicas para el estudio de la expresión génica