IMPLEMENTACIÓN DE UN MÉTODO DE ... ALTO RENDIMIENTO EN BIOBANCOS

IMPLEMENTACIÓN DE UN MÉTODO DE PURIFICACIÓN CELULAR DE
ALTO RENDIMIENTO EN BIOBANCOS
Almeida M., Mateos S., Regalado A., Pinto R., Pérez-Caro M., Morante M.I., Márquez M.T.,
Malvar T., García-Palomo J., Chamorro E., Orfao A., García-Montero A.C.
1Banco Nacional de ADN Carlos III, Universidad de Salamanca.
INTRODUCCIÓN: Los biobancos necesitan implementar protocolos de
purificación celular de alto rendimiento para poder servir a proyectos que
requieren poblaciones celulares puras (p.e. estudios de transcriptómica).
OBJETIVO: Optimizar protocolos de purificación celular partiendo de sangre
periférica (SP), para ofertar sus subproductos (ADN, ARN, proteínas…) a los
investigadores.
MATERIAL Y MÉTODOS: Se purificaron, mediante citometría de flujo
(FACSAria III, Beckton Dickinson Biosciences) y métodos inmunomagnéticos
con micro- (Dynal®, Invitrogen™) o nano-esferas (Miltenyi Biotec), neutrófilos y
linfocitos B a partir de 618 muestras de SP de adultos sanos, obtenidas en
EDTA y ACD. Los tubos de procesamiento se trataron, o no, con albúmina
sérica bovina (BSA) al 4%, para analizar la pérdida celular por adherencia.
RESULTADOS: El rendimiento y porcentaje de recuperación de neutrófilos fue
superior en SP extraída en ACD frente a EDTA (1,77±0,86x106 vs 1,28±0,6x106
células/ml y 44,30%±14,41% vs 33,1%±13,66%, respectivamente). Además, el
tratamiento de los tubos con BSA incrementaba el rendimiento y recuperación
de neutrófilos (1,89±0,68x106 vs 1,61±0,8x106 células/ml y 48,68%±13,35% vs
40,43%±14,73%, respectivamente). La separación inmunomagnética mediante
nano-esferas proporcionó un mayor rendimiento, recuperación y pureza tanto
de neutrófilos como de linfocitos B. Por el contrario, la pureza de los linfocitos B
separados mediante citometría de flujo fue significativamente superior a la
obtenida mediante métodos inmunomagnéticos (98,76%±1,52% vs
91,35%±7,44%, respectivamente). Por su parte, la pureza de los neutrófilos
purificados con nano-esferas conjugadas con anti-CD16 fue superior a la
obtenida con anti-CD15 (99%±1,44% vs 86,2%±16,6%, respectivamente).
CONCLUSIONES: La citometría de flujo y la separación inmunomagnética
mediante nano-esferas conjugadas con anti-CD16, junto con el empleo de
tubos de procesamiento tratados con BSA al 4%, son los métodos idóneos para
obtener la máxima pureza y recuperación de linfocitos B y neutrófilos,
respectivamente, partiendo de SP extraída en ACD.
Trabajo financiado por el Instituto de Salud Carlos III, FEDER (ref.
PT13/0001/0037 y PT13/0010/0067).