Enumeración de levaduras en productos lácteos: Una comparación de técnicas inmunológicas y genéticas. Presentado por: Mallory Salgado Raul Almanza 8-996-114 Samuel Coutte 8-991-2089 01 Introducción y Objetivos Introducción Las levaduras son contaminantes significativos en diversos productos lácteos, especialmente en aquellos fermentados como el yogur y la leche agria. En estos productos, el ambiente ácido favorece el crecimiento de las levaduras, lo que las convierte en una de las principales causas de deterioro. Aunque bajo buenas prácticas de manufactura el yogur debería contener menos de 10 células de levadura por gramo, una carga inicial superior a 100 células por gramo puede causar un deterioro rápido, manifestado a través de hinchamiento de los envases debido a la producción de gas, cambios de sabor y la formación de colonias visibles de levaduras. Para superar estos inconvenientes, se han propuesto técnicas alternativas, entre las que destacan los inmunoensayos y la tecnología de PCR. Estas técnicas ofrecen métodos rápidos y precisos para la detección de microorganismos en alimentos, aunque su aplicación en la detección de levaduras es todavía limitada Objetivos Comparar técnicas inmunológicas y de PCR para la detección rápida de especies de levaduras deterioradas en leche y yogur 02 CONTENIDO Materiales y metodos Microorganismos Se emplearon cepas de levaduras obtenidas de la Colección Española de Cultivos Tipo Kluyveromyces marxianus Candida zeylanoides Saccharomyces cerevisiae Se usaron mohos para pruebas de especificidad de los anticuerpos. Penicillium camemberti Mucor racemosus Medios de cultivo Reactivos Medio LM: Contiene 10 g/litro de glucosa, 5 g/litro de Solución salina amortiguadora de fosfatos (PBS): Para el lavado y suspensión de células de levadura. Reactivos para ELISA: Se usaron anticuerpos polipéptido, 3 g/litro de extracto de levadura, y 3 g/litro de extracto de malta, usado para el crecimiento de las levaduras. Sabouraud dextrosa agar: Suplementado con cloranfenicol (0.4 g/litro) para el recuento de levaduras y mohos, incubado a 25°C por 72 horas. policlonales generados en conejos y se biotinilaron para la detección. Solución de limpieza de leche: Proporcionada por Promega Corp., utilizada para preparar muestras de leche y yogur para análisis de ELISA y extracción de ADN. Muestras de alimento Metodología Cultivo de microorganismos Preparación de extractos antigénica y producción de anticuerpos Técnicas de ELISA Extracción de AND y analisis por PCR Análisis de Resultados ELISA (Inmunoensayo Enzimático) Fortalezas - Velocidad - Aplicación simultanea Limitaciones identificadas - Baja sensibilidad - Interferencia de la matriz alimenticia - Baja especifidad Análisis de Resultados PCR (Reacción en Cadena de la Polimerasa) Fortalezas - Alta sensibilidad y especificidad - Mejora con enriquecimiento - Detección rápida Limitaciones identificadas - Posibilidad de falsos negativos - Posibles falsos positivos con ADN de celulas muertas Conclusiones • Eficacia de las Técnicas de ELISA • Ventajas del PCR • Importancia del PCR para el Control de Calidad Muchas Gracias!! Bibliografía García T, Mayoral B, González I, López-Calleja I, Sanz A, Hernández PE, Martín R. Enumeration of yeasts in dairy products: a comparison of immunological and genetic techniques. J Food Prot. 2004 Feb;67(2):357-64. doi: 10.4315/0362-028x-67.2.357. PMID: 14968970.
