Laboratorio de Microbiología Profesora Yvette Ludeña Departamento de Biología Universidad Nacional Agraria La Molina PRÁCTICA 5 AISLAMIENTO DE HONGOS DEL MEDIO AMBIENTE Objetivo Aislar en medio de cultivo casero hongos que frecuentan en el medio ambiente y determinar sus características. PASO 1: Preparación de PDA (Agar papá dextrosa) casero Materiales - Gelatina de sobre común ½ papa mediana 500ml de agua de caño (aproximadamente) Un colador limpio 3 recipientes de vidrio o plástico que simulen placas petri. Papel films (o bolsas de plástico nuevas, pequeñas y transparentes) Recomendaciones Nota. Si usted sufre de asma, NO realice el experimento porque el desarrollo de hongos le puede causar una reacción alérgica. Antes de realizar el procedimiento que se describe más adelante utilizar obligatoriamente: - Mandil de laboratorio - El cabello recogido. En caso tenga disponible, colocarse una cofia o gorra de laboratorio desechable. Procedimiento 1. Pelar y picar la ½ papa. 2. Colocar en una olla y agregar los 500ml de agua (aproximadamente) y hervir por 5-10min hasta que observe una cocción media de la papa. 3. Dejar enfriar por unos minutos y filtrar (o colar) para recuperar el almidón (que está en el agua) y eliminar el resto de la papa. El filtrado se utilizará para preparar la gelatina. 4. Calcular cuànto del filtrado se tiene aproximádamente y volver a calentar proceder a preparar la gelatina. 5. Agregar al filtrado medio sobre de gelatina. Recuerde que, el objetivo es tener una consistencia más dura de la gelatina una vez que solidifique. Por lo tanto, considere utilizar la cantidad necesaria del filtrado. Nota. Puede seguir las instrucciones de preparación de gelatina que indica en el sobre. 6. Una vez preparada la mezcla anterior (gelatina), dejar reposar por unos minutos. 7. Limpiar y desinfectar una mesa con alcohol al 70% . 8. En la mesa de trabajo, colocar los recipientes de vidrio limpios y previamente desinfectados con alcohol. Echar la gelatina preparada solo hasta la cuarta parte de cada recipiente. 9. Dejar enfriar por unos 5 minutos e inmediatamente tapar con el papel film. 10. Dejar reposar hasta que solidifique completamente. IMPORTANTE. Durante este tiempo NO mover los recipientes. PASO 2: Aislamiento de hongos del medio ambiente Materiales - Hisopo Alcohol 70% Procedimiento 1. Lávese las manos con agua y jabón. Luego desinfecte con alcohol al 70%. 2. Rotular los tres recipientes: A (Medio ambiente), B y C (control). 3. Elegir un punto determinado en el ambiente que quiera evaluar. 4. Destapar el recipiente A y exponer el medio de cultivo al aire (se asume que las esporas de hongos se encuentran suspendidas). El tiempo de exposición puede ser de 5 a 10 minutos. Volver a tapar el recipiente e identificar con el lugar muestreado. 5. En el recipiente B. Con un hisopo frotar la superficie de cualquier objeto (celular, laptop o moneda, etc). Abrir el recipiente B y sembrar (frotar) con el mismo hisopo la superficie del medio (se asume la presencia de hongos en las superficies de estos objetos). 6. El recipiente C, se utilizará como control. 7. Colocar los recipientes en una caja y ubíquelo en un lugar oscuro y alejado de la ventana por 4 a 5 días. 8. Transcurrido el tiempo, examinar los recipientes y realizar una descripción macroscópica de los hongos desarrollados.
