PRÁCTICA TINCIÓN DE WRIGHT METÓDICA Extracto de las técnicas de tinción hematológicas de la casa IHR diagnóstica. Fundamento El colorante utilizado es una solución de eosina y una mezcla de azul de metileno (del 50 al 75 %) y azur B (del 10 al 25 %) junto con otros derivados del alcohol metílico. La intensidad de la coloración depende del contenido de Azur B y su relación con la mezcla eosina-azul de metileno. El resultado de la tinción puede estar influido por el pH del tampón y el tiempo de tinción. Dada la presencia de metanol en la composición del colorante, no es necesario un paso previo de fijación antes de la coloración. Sólo si se van a guardar las extensiones sin teñir de un día para otro procederemos a su fijación para evitar el deterioro del frotis. Material necesario Microscopio óptico. Cristalizador. Puentes de tinción. Pipetas Pasteur con chupete. Frasco lavador Guantes Reactivos Solución de eosina-azul de metileno según Wright. Solución tampón pH 7,0: Di-sodio hidrogenofosfato 12 H2O Potasio dihidrogenofosfato Agua desmineralizada Aceite de inmersión. 14,02g/L 3,52g/L cs Muestra Sangre capilar fresca o venosa anticoagulada. Los anticoagulantes más adecuados son la heparina y el EDTA. Técnica 1. Realizar un frotis sanguíneo muy fino. Dejar secar al aire. 2. Sobre la extensión colocada horizontalmente verter 1-2 mL de Eosina-Azul de Metileno solución según Wright. Dejar actuar 1 minuto. 3. Sobre el primer colorante, añadir la misma cantidad de Tampón fosfato pH 7,0. Soplar con una pipeta Pasteur para homogeneizar hasta que la mezcla adquiera un brillo verde metálico. 4. Dejar actuar entre 3 y 6 minutos. 5. Lavar con agua corriente. Dejar secar a temperatura ambiente. 6. Examinar al microscopio óptico con objetivo de 40x y de inmersión. Lectura de resultados Depositamos una gota de aceite de inmersión y observamos con el objetivo de 100 x. Las células se observan coloreadas de la misma manera que con la tinción de Giemsa. ACTIVIDADES DE REFUERZO 1º ¿Qué tipo de colorante utilizamos en esta tinción? 2º ¿Qué sustancia empleamos como fijador? 3º ¿Cuánto tiempo debe estar en contacto el frotis con el colorante diluido? Resultados obtenidos Dibuja las células observadas coloreando adecuadamente las características morfológicas de cada una.
