INFORME DE PRÁCTICAS: TINCIÓN SIMPLE • Objetivo. Realizar una tinción simple de hongos cultivados anteriormente y visualizarlos en el microscopio óptico. • Fundamento teórico. La tinción simple se basa en la afinidad del colorante por los componentes celulares. Se utiliza para destacar el microorganismo completo, para que se vean las formas y las estructuras celulares básicas. Sirve solamente para incrementar el contraste; todas las células absorberán el colorante y quedarán teñidas del mismo color. Por tanto, la tinción simple mejora la observación de la célula completa. Los colorantes más utilizados son: azúl de metileno, fuchsina, verde malaquita, violeta de genciana, cristal violeta, verde janús y rojo fenol. El microscopio óptico basado en lentes ópticos, también se le conoce como microscopio de luz o microscopio de campo claro. El desarrollo de este aparato suele asociarse con los trabajos de Anton van Leeuwenhoek. Aumenta el tamaño de los objetos que son muy pequeños y no pueden verse a simple vista, a su vez puede ser monocular o binocular entre otros. El moho es un hongo que se encuentra tanto al aire libre como en lugares húmedos y con baja luminosidad. Existen muchas especies, que son microscópicas del reino Fungi y que crecen en formas de filamentos pluricelulares o unicelulares. El moho crece mejor en condiciones cálidas y húmedas; se reproducen y propagan mediante esporas. Las esporas del moho pueden sobrevivir en variadas condiciones ambientales, incluso en extrema sequedad, a pesar de que ésta no favorece su crecimiento normal. • Materiales -Asa de siembra -Papel de filtro -Mechero -Microscopio óptico -Azul de metileno -Cristalizador -Portaobjetos -Agua destilada -Placa Petri con muestra de hongos de una mazana • Seguridad en el laboratorio Uso obligatorio de bata. Tener especial cuidado con el mechero, los materiales frágiles y las lentes del microscopio. Mantener orden y limpieza en el laboratorio. • Procedimiento -En primer lugar, añadimos una gota de agua al portaobjetos. -Con ayuda del asa de siembra cogemos un poco de la muestra del moho y la extendemos sobre el portaobjetos. -Lo acercamos a la llama del mechero para que se seque, con mucho cuidado de que no se queme la muestra. (También se puede dejar secar al aire) -Añadimos una gota del tinte y dejamos que se fije. -Lavamos la preparación con agua destilada para eliminar el exceso de colorante. - Dejamos secar y observamos en el microscopio. • Resultados y conclusiones. Al utilizar bastante cantidad el azul de metileno, los microorganismos se tiñeron de un azul muy intenso y se podían ver perfectamente en el microscopio. En nuestra preparación (objetivos x4, x10) pudimos observar cocos agrupados principalmente en colonias, pero algunos también en tetradas, de forma individual y en forma de diplococos. Al aumentar hasta el x100 pudimos observar pequeños tubos que son las hifas y en conjunto forman el micelio. Si nos fijamos también vemos esporangios que sería parte del aparato reproductor del hongo, y numerosas esporas. El método de tinción es una forma fácil y rápida de ver algunos microorganismos y observando estas muestras podemos deducir que son unos hongos que se reproducen bastante rápido. • Gestión de residuos Limpiamos el portaobjetos y los materiales utilizados. Guardamos el microscopio en su sito. Judith Nsue Sara Pardo Sheila Redondo Ensayos Microbiológicos CAC1
