INTRODUCCIÓN: Los glúcidos (carbohidratos, hidratos de carbono, polialcoholes, azúcares) son una gran cantidad de azucares, almidones, celulosas y gomas que contienen carbono, hidrogeno y oxígeno en cantidades similares. La principal función de los carbohidratos es suministrarle energía al cuerpo, especialmente al cerebro y sistema nervioso. El cuerpo descompone los azucares y almidones en una sustancia denominada glucosa que se usa como fuente de energía. Cubiertas las necesidades energéticas, una pequeña parte se almacena en el hígado y músculos como glucógeno (normalmente no más de 0,5% del peso del individuo), el resto se transforma en grasas y se acumula en el organismo como tejido adiposo. La celulosa es el polisacárido estructural de los vegetales y forma las paredes celulares vegetales. OBJETIVOS: Identificación de los principales tipos de carbohidratos (glucosa, sacarosa, fructosa, almidón, maltosa, lactosa). Identificar la hidrólisis del enlace de un disacárido MATERIALES: - 30ml de soluciones al 5% de: glucosa, maltosa, lactosa, sacarosa y almidón. (5g sustrato+95ml agua, para 100 ml totales) - 30 tubos de ensayos (10 tubos de ensayo por cada subgrupo) - 3 gradillas - 3 vasos de precipitación de 150ml - 3 mecheros - 20ml de Reactivo de Fehling A y 20ml de Fehling B - 10ml de lugol - 10ml HCl diluido al 20% (Usar la fórmula C1·V1=C2·V2) - Bicarbonato. - 10ml de almidón puro - Agua destilada - 03 pinzas para calentar tubos PROCEDIMIENTO: Reacción de Fehling: Se basa en el carácter reductor de los monosacáridos (azúcares reductores) y de la mayoría de los disacáridos (excepto la sacarosa). Si el carbohidrato que se investiga es reductor, se oxidará dando lugar a la reducción del sulfato de cobre (II), de color azul, a óxido de cobre (I), de color rojo-anaranjado. Este es un método cualitativo, que demuestra la presencia de azúcares reductores y depende de que tengan el carbono 1 (anomérico) libre, es decir, sin formar enlace Oglucosídico con otro glúcido, por lo tanto: a) Todos los monosacáridos son azúcares reductores (Fehling positivo) b) En los disacáridos, solo la sacarosa será fehling negativo (debido a que ambos C1 están ocupados en el enlace) c) Ningún polisacárido será reductor (Fehling negativo). Se detecta su presencia con la técnica del lugol (en el caso del almidón). Técnica: Tomar la muestra que se quiera analizar (normalmente una cantidad de 3ml de glucosa) Añadir 1ml de Fehling A y 1ml de Fehling B. El líquido del tubo de ensayo adquirirá un fuerte color azul. Calentar el tubo al baño María o directamente en un mechero de Laboratorio. La reacción será positiva si la muestra se vuelve de color rojo-ladrillo. La reacción será negativa si la muestra queda azul, o cambia a un tono azul-verdoso. Reacción del Lugol: Este método se usa para identificar polisacáridos. El almidón en contacto con unas gotas de Reactivo de Lugol (disolución de yodo y yoduro potásico) toma un color azulvioleta característico (tirando a negro). La coloración producida por el Lugol se debe a que el yodo se introduce entre las espirales de la molécula de almidón. El almidón es un polisacárido vegetal formado por dos componentes: la amilosa y la amilopectina. La primera se colorea de azul en presencia de yodo debido no a una reacción química sino a la adsorción o fijación de yodo en la superficie de la molécula de amilosa, lo cual sólo ocurre en frío. Como reactivo se usa una solución denominada lugol que contiene yodo y yoduro potásico. Como los polisacáridos no tienen poder reductor, la reacción de Fehling da negativa. Técnica: Colocar en un tubo de ensayo 3ml de la solución de almidón. Añadir 3 gotas de la solución de lugol. Observar y anotar los resultados. Calentar suavemente, sin que llegue a hervir, hasta que pierda el color. Enfriar el tubo de ensayo al grifo y observar cómo, a los 2-3 minutos (mucho menos tiempo, segundos incluso), reaparece el color azul (negro). Poner 3ml de solución de glucosa, maltosa, lactosa, sacarosa y almidón en los tubos de ensayo. Pueden prepararse soluciones al 1% aproximadamente. Realizar la Prueba de Fehling como se indica al principio. Después de calentar observar los resultados. Estos resultados nos indican que los azúcares: glucosa, maltosa y lactosa tienen carácter reductor. Como se veía en la experiencia 1, la sacarosa daba la reacción de Fehling negativa por no presentar grupos hemiacetálicos libres (C1 anomérico forma parte de enlace entre monosacáridos glucosa y fructosa). Ahora bien, en presencia del ácido clorhídrico (HCl) caliente, la sacarosa se hidroliza descomponiéndose en los dos monosacáridos que la forman (glucosa y fructosa). Técnica: Tomar una muestra de sacarosa y añadir unas 10 gotas de ácido clorhídrico al 10%. Calentar a la llama del mechero durante un par de minutos. Dejar enfriar y realizar la Prueba de Fehling. Neutralizar añadiendo 3ml de solución alcalina o bicarbonato. Aplicar la prueba de Fehling, esta sale mejor en un medio que no sea ácido. La reacción positiva nos dice que hemos conseguido romper el enlace O-glucosídico de la sacarosa. El polisacárido almidón se colorea de azul-violeta en presencia de yodo, debido no a una reacción química, sino a la fijación del yodo en la superficie de la molécula del almidón, fijación que sólo tiene lugar en frío. Técnica: Machacar en un mortero, una porción de patata pelada Agregar agua destilada (20ml), mezclar y decantar o filtrar el sobrenadante en un tubo de ensayo Tomar en un tubo de ensayo 2ml del líquido sobrenadante obtenido en el paso anterior y en otro tubo tomar 2ml de solución de almidón puro. Añadir 5 gotas de Lugol en cada uno de los tubos de ensayo y agitar simultáneamente. Observar los resultados. El positivo tendría una coloración virando a negro. Lugol Almidón+lugol
