24/01/18 Anticuerpo Anticuerpos Ê Glucoproteínas (INMUNOGLOBULINAS) Ê Producidas por células plasmáticas Ê Se unen de manera específica al antígeno Ê Ayudan a su destrucción o eliminación Ê Se encuentran en muchos líquidos corporales Ê Más concentrados en suero Ê Defienden al cuerpo contra Ê Virus, bacterias y protozoarios extracelulares 1 24/01/18 Estructura de las inmunoglobulinas Ê Cuatro cadenas protéicas Ê 2 cadenas pesadas Ê 4 dominios (verde) Ê 2 cadenas ligeras Ê 2 dominios (amarillas) Partes de los anticuerpos Ê 2 fragmentos Fab Ê 1 fragmento Fc 2 24/01/18 Regiones variables y constantes Ê Regiones variables Ê En la parte distal de los fragmentos Fab (en rojo) Ê Se unen al antígeno Ê Se unen a la región Fc mediante la región de bisagra Varibilidad Regiones Variables 3 24/01/18 Región constante Ê Sirve para la activación de diferentes respuestas inmunes, DESPUÉS de que el Ab se une al Ag. Ê Activación del complemento Ê Opzonización Region de Bisagra Ê Dan movilidad a las regiones Fab Ê Región rica en el aa prolina 4 24/01/18 Funciones de los Ac (Ig) ISOTIPOS (Tipos de Inmunoglobulinas) Ê IgG, IgA, IgM, IgD, IgE Ê Dependen del tipo de la cadena pesada Ê α, γ, δ, ε, µ 5 24/01/18 IgG Ê Producida en bazo, ganglios linfáticos y médula ósea Ê Más común en sangre Ê Importante en defensa mediada por Ac Ê Opsoniza, aglutina y precipita antígenos Ê Puede activar el complemento Ê Cadenas pesadas tipo γ IgM Ê Producida y secretada por células plasmáticas en bazo, ganglios linfáticos y médula ósea Ê Ig más grande: 900 KDa Ê 5 subunidades de 180 KDa Ê Cadenas pesadas tipo µ Ê Ig más producida en respuesta humoral primaria Ê Confinadas al torrente sanguíneo por su gran tamaño 6 24/01/18 IgM Ê Muy eficiente para activación de complemento, aglutinación y neutralización de virus Ê Más que IgG Ê Poca importancia en inflamación 7 24/01/18 IgA Ê Secretada por células plasmáticas localizadas bajo la superficie corporal Ê Paredes del intestino Ê Vías respiratorias y urinarias Ê Piel Ê Glándulas mamarias Ê Estructura convencional en forma de dímero Ê Cadena pesada tipo α IgA Ê No activa complemento ni es opsonina Ê Aglutina antígenos y neutraliza virus Ê Ig importante en secreciones externas de animales no rumiantes Ê Evita la adherencia de antígenos a superficies corporales 8 24/01/18 IgE Ê Producida en superficies corporales Ê Cadena pesada tipo ε Ê Concentración baja en el suero Ê Actúa como molécula de transducción de señales Ê Muy importante en la inflamación y en la mediación de alergias de tipo I IgD Ê No se ha detectado en todas las especies Ê Sólo en primates y roedores Ê Superficie de linfocitos B Ê Receptor de antígenos Ê 180,000 daltons 9 24/01/18 Alotipos e Idiotipos Ê Alotipos Ê Variaciones hereditarias en la estructura de las Ig Ê Ig de Pedro difieren de las Ig de Juan Ê Idiotipos Ê Segmento de una Ig que determina su especificidad para un Ag. Ê Cambios en las secuencias de AA de los dominios variables de las cadenas ligeras y pesadas Métodos de laboratorio con Anticuerpos Ê Anticuerpos Ê Útiles para detectar, purificar y cuantificar antígenos Ê Se producen contra casi cualquier tipo de macromoléculas 10 24/01/18 ELISA Inmunohistoquímica 11 24/01/18 Isotipos y subisotipos de Ig Anticuerpos monoclonales Ê Anticuerpos específicos de un solo tipo, producidos en cantidades ilimitadas Ê Hibridoma Ê Fusión de un Linfocito B x mieloma 12 24/01/18 13 24/01/18 Inmunoanálisis Ê Cuantificación de antígenos Ê Alta sensibilidad Ê Alta especificidad Ê ELISA (Análisis de inmunoadsorción ligado a enzimas). Ê Utiliza 2 Ac distintos que reaccionan con 2 epitopos diferentes del Ag cuya concentración se quiere medir ELISA Ê Cantidad fija de Ac se une a un soporte sólido igual 14 24/01/18 ELISA Ê Se añade la solución problema que contiene el antígeno Ê La concentración puede ser desconocida Ê Se pueden añadir soluciones estándar con concentraciones conocidas del Ag ELISA Ê El Ag que no se unió a los anticuerpos fijados en la placa, es eliminado mediante lavado 15 24/01/18 ELISA Ê Se añade el segundo anticuerpo Ê Contiene una enzima o un radioisótopo Ê Ag sirve de puente entre los Ac Ê A mayor cantidad de Ag en la solución problema, o en los estándares, mayor será la cantidad del 2º Ac marcado con la enzima o radiosótopo ELISA Ê Se elimina el exceso de Ac marcado no unido mediante lavado Ê Se mide la cantidad de Ac marcado que permanece unido 16 24/01/18 Trabajo para lo que no tienen derecho a presentar examen Ê En un estudio, se vacunó a toda la población canina de la ciudad con una vacuna contra una bacteria patógena. Se descubrió que los perros desarrollaron anticuerpos contra un epitopo en particular presente en la membrana celular del patógeno. Ê Se determinó que la estructura de este epitopo era un péptido de 10 aminoácidos de longitud. Se sintetizó este péptido en el laboratorio y se usó para inmunizar otros perros susceptibles de infección. Ê Desafortunadamente, los perros vacunados con el péptido no presentaron protección contra la bacteria. Explique porqué ocurrió esto. 17 24/01/18 Métodos de identificación de proteínas Ê Inmunoprecipitación Ê Sirve para aislar un antígeno proteico, que se encuentra presente en una mezcla de proteínas Inmunoprecipitación 18 24/01/18 Cromatografía de Afinidad Ê Se fijan anticuerpos específicos a un antígeno, a un soporte sólido Ê Agarosa Ê En una columna 19 24/01/18 Cromatografía de afinidad Ê Mezcla compleja de antígenos (que contiene el Ag de interés). Ê Se hace pasar por la columna (que contiene los Ac). Ê El Ag se une al Ac Ê Los Ag que no se unen al Ac son eliminados por un lavado Ê El Ag fijado al Ac se elimina modificando el pH 20 24/01/18 Inmunotransferencia Ê Determina cantidad y peso molecular de una proteína Ê Que está mezclada con otras proteínas 21 24/01/18 Regiones variables y constantes Ê Regiones constantes Ê Parte proximal de los fragmentos Fab y todo el fragmento Fc (en color azul) Tipos de Inmunoglobulinas o Anticuerpos Ê 5 tipos Ê IgG: más abundante en suero Ê IgM: 2a más abundante en suero Ê IgA: Saliva, leche, líquido intestinal Ê IgD: raro en líquidos corporales Ê IgE: mediadora de alergias 22 24/01/18 IgG Ê Inmunoglobulina más pequeña Ê Sale fácilmente de los vasos sanguíneos Ê Inflamación Ê Se adhiere con facilidad a Ag extraños 23
