Efecto del genotipo y del tipo de explante sobre la obtención de

Efecto del genotipo y del tipo de explante sobre la obtención de vástagos de
Paraíso (Melia azedarach L.) mediante el cultivo in vitro de explantes foliares1
Vila, Silvia K. - Rey, Hebe Y. - Mroginski, Luis A.
Instituto de Botánica del Nordeste (IBONE) - Facultad de Cs. Agrarias - UNNE.
Sargento Cabral 2131 - C.C. 209 - (3400) Corrientes - Argentina.
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1. Trabajo parcialmente financiado por la Secretaría General de Ciencia y Técnica - UNNE
ANTECEDENTES
El paraíso (Melia azedarach L.) es una especie originaria del sur de Asia. En algunas regiones tiene relativamente fácil
crecimiento (Pennington 1981). Es un árbol de uso ornamental y forestal que se destaca por las características
tecnológicas de su madera (Mangieri et al. 1977).
Debido a que se propaga por semillas, hay variabilidad en las poblaciones sembradas. Este inconveniente puede ser
subsanado con la aplicación de métodos de multiplicación vegetativa como el cultivo in vitro de tejidos (Domecq 1988,
Ahmad et al. 1990, Thakur et al. 1998, Shahzad & Siddiqui 2001).
La producción de plantas a partir del cultivo in vitro de porciones de hojas de especies forestales Angiospermas ha sido
poco frecuente (Thorpe et al. 1991), en el paraíso aun no se han publicado trabajos que informen acerca de la obtención
de plantas a través del cultivo de hojas de plantas crecidas a campo.
El propósito de este trabajo es estudiar el efecto del genotipo y del tipo de explante sobre la obtención de plantas, a
partir del cultivo in vitro de porciones de hojas de paraíso gigante (Melia azedarach).
MATERIALES Y METODOS
Se ensayaron 7 clones de paraíso gigante (14, 24, 4, J1, J2, Lp y R). Se cultivaron porciones de folíolos (distal y
proximal) y raquis secundario (Fig. 1) provenientes de hojas de 0,5 - 1; 2 - 4 y 10 cm de longitud, de plantas crecidas
en macetas.
Los explantes fueron desinfectados en etanol al 70% (10 seg), seguido de su inmersión en NaOCl al 0,27% + 2 gotas de
Tween (5 min), finalmente fueron lavados, 4 veces, con agua destilada estéril.
Los explantes fueron asépticamente cultivados sobre la combinación de sales minerales y vitaminas de Murashige y
Skoog (1962), (MS) suplementado con 1 mg/L de bencilaminopurina (BAP) + 0,1 mg/L de cinetina (CIN) + 3 mg/L de
hemisulfato de adenina (SA). La incubación de los cultivos fue hecha a 27 ± 2oC, mantenidos en oscuridad.
Fig. 1 - Distintas porciones de hojas cultivadas in vitro
Porción
distal
Raquis
secundario
Porción
proximal
RESULTADOS Y DISCUSION
A los 35 días de cultivo fue posible apreciar la regeneración de vástagos a partir de porciones de hojas de paraíso. Si
bien en todos los clones fue posible la obtención de vástagos, hubo gran variabilidad en cuanto al porcentaje de
explantes con vástagos (3,3 - 30), dependiendo de los clones (Fig. 2). El número de vástagos por explante también fue
variable entre los distintos genotipos ensayados (Fig 3). El clon que resultó ser el más apto, tanto en el porcentaje como
en el número de vástagos obtenidos por explante, fue el clon 4 (Fig. 2 y 3). El mejor explante, independientemente del
clon, fue el raquis secundario, incluso, en algunos clones, (J1, Lp y R) es el único explante que responde. En general,
para todos los clones, los raquis secundarios de las hojas de 10 cm son las que produjeron mejores respuestas, sin
embargo, con el clon 14 sólo hubo respuesta en las hojas de 0,5 cm de longitud.
Cerca del 50% de los vástagos obtenidos, en la mayoría de los clones ensayados, enraizaron cuando se subcultivaron a
un medio compuesto de MS + 2,5 mg/L de ácido indolbutírico (IBA), durante 4 días, y posteriormente a MS sin
hormonas (Fig 4). Las plantas obtenidas fueron transferidas a macetas y mantenidas en invernáculo y luego fueron
llevadas a campo.
Fig. 4 - Efecto del genotipo sobre el enraizamiento de vástagos de paraíso.
Enraizamiento (%)
100
75
50
25
0
4
24
J1
Lp
J2
R
14
Clones
CONCLUSIONES
Se demuestra que existe variabilidad en cuanto a la capacidad organogénica entre los distintos clones, siendo el mejor el
clon 4. Además, se determinó que, en la mayoría de los clones el mejor explante para la obtención de vástagos y
posteriormente de plantas fue el raquis secundario de las hojas de 10 cm de longitud.
BIBLIOGRAFIA
Ahmad, Z., Zaidi, N., Shah, F.H. Pak. J. Bot. 22: 172-178, 1990.
Domecq, C. Phyton 48: 33- 42, 1988.
Mangieri, H.R.; Tinto, J.C.; Leonardis, R.J.; Alonzo, A.; Reuter, H.R. En: Libro del Árbol. Celulosa Argentina (ed.)
Buenos Aires. III: 62, 1977.
Murashige, T., Skoog, F. - Physiol. Plant. 15: 473-497, 1962.
Pennington, T.D. Monograph No 28. Meliaceae. The New York Botanical Garden, New York: 24 - 25, 1981.
Shahzad,A., Siddiqui S.A. Phytomorphology 51 (2): 151 - 154, 2001
Thakur, R., Rao, P.S., Bapat, V.A. Plant Cell Rep. 18: 127-131, 1998.
Thorpe, T.A., Harry, I.S., Kumar, P.P. In: Debergh, P.C., Zimmerman, R.H. (ed.): Micropropagation. Pp. 311- 336.
Kluwer Acad. Publ, Dordrecht 1991.
Fig. 2 - Efecto del tamaño de explante y porción de la hoja cultivada sobre el porcentaje de obtención de vástagos de
paraíso, en el medio MS + BAP 1mg/L + CIN 0,1 mg/L + SA 3 mg/L.
Clon 24
80
60
40
20
0,5 - 1
2-4
40
20
0
0,5 - 1
2-4
Clon 4
Clon J1
Explantes con vástagos (%)
60
40
20
2-4
10
100
80
60
40
20
0
10
0,5 - 1
2-4
Tamaño de la hoja en cm
Tamaño de la hoja en cm
Clon 14
Clon Lp
100
10
100
80
60
40
20
0
60
Tamaño de la hoja en cm
80
0,5 - 1
80
Tamaño de la hoja en cm
100
0
100
10
Explantes con vástagos
Explantes con vástagos (%)
0
Explantes con vástagos (%)
Explantes con vástagos (%)
100
0,5 - 1
2-4
80
60
40
20
0
10
Tamaño de la hoja en cm
Explantes con vástagos (%)
Explantes con vástagos (%)
Clon J2
0,5 - 1
2-4
10
Tamaño de la hoja en cm
Clon R
100
80
60
40
20
0
0,5 - 1
2-4
10
Tamaño de la hoja en cm
Porción proximal
Porción distal
Raquis secundario
Fig. 3 - Efecto del tamaño de explante y porción de la hoja cultivada sobre el número de vástagos obtenidos, en el
medio MS + BAP 1mg/L + CIN 0,1 mg/L + SA 3 mg/L.
Clon J2
Clon 24
N de vástagos
8
6
4
2
0
4
2
0,5 - 1
2-4
0
10
0,5 - 1
2-4
Tama ño de la hoja en cm
Tama ño de la hoja en cm
Clon 4
Clon J1
N de vástagos
6
6
4
o
o
4
2
2
0
0,5 - 1
2-4
0
10
0,5 - 1
2-4
10
Tama ño de la hoja en cm
Tama ño de la hoja en cm
Clon Lp
Clon 14
8
N de vástagos
8
6
6
4
o
4
o
N de vástagos
10
8
8
N de vástagos
6
o
o
N de vástagos
8
2
2
2-4
0
10
0,5 - 1
2-4
10
Tama ño de la hoja en cm
Tama ño de la hoja en cm
Clon R
8
6
4
o
0,5 - 1
N de vástagos
0
2
0
0,5 - 1
2-4
10
Tama ño de la hoja en cm
Porción proximal
Porción distal
Raquis secundario