utilidad principio del ensayo interpretación de resultados

UTILIDAD
El kit Deoxinivalenol (DON) Assay es un
inmunoensayo competitivo, diseñado para la
detección cuantitativa de DON en granos de
cereales y otros productos, incluyendo piensos.
PRINCIPIO DEL ENSAYO
1.
FT: 30.941DON01M
2.
Las placas están tapizadas con anticuerpo
específico para reconocer Deoxinivalenol.
La muestra (extraída con agua destilada o
desionizada) se mezcla con DON HRPconjugado, y la mezcla se añade a los
pocillos tapizados con anticuerpos.
3.
El DON de la muestra extraída y el DON
conjugado compiten por los anticuerpos que
tapizan la placa.
4.
Se vacía el contenido de los pocillos, y los
reactivos no específicos se eliminan
mediante lavado.
5.
Se añade un substrato de la enzima (TMB)
para que se desarrolle el color azul.
6.
La intensidad de color es directamente
proporcional a la cantidad de conjugado
unido a la placa, e inversamente
proporcional a la concentración de DON de
la muestra o estándar.
7.
Se añade una solución de frenado (ácida),
que transforma el color azul en amarillo.
8.
Los pocillos se miden ópticamente
utilizando un lector de placas con filtro a
450nm. La densidad óptica de las muestras
se compara con la densidad óptica de los
estándares del kit.
Inmunología y Genética Aplicada, SA
C/ Hermanos García Noblejas 39
28037. MADRID
INTERPRETACIÓN DE
RESULTADOS
Construir una curva utilizando los valores de DO
sin modificar; o los valores de DO expresados
como un porcentaje (%B/B0) la DO del estándar
cero (0.0) frente a los contenidos de
Deoxinivalenol del estándar.
El resultado de las muestras desconocidas se
calcula mediante interpolación en esta curva.
Teniendo en cuenta que la muestra se ha diluido
1:50 durante la extracción, la curva estándar
presenta un rango de 0.5ppm a 10ppm.
Trigo, cebada, piensos y maíz
Estándar (ng/mL)
0
10
20
50
100
200
Muestra (ppm)
0
0.5
1.0
2.5
5.0
10.0
Si la muestra contiene Deoxinivalenol por
encima del estándar superior, debe volver a
diluirse adecuadamente en agua destilada y
analizarse de nuevo. Es necesario tener en
cuenta la dilución extra en los cálculos finales.
Tel.: + 34- 91 3680501
Fax: +34- 91 4087598
www.ingenasa.eu
Última revisión: 29/04/15
VARIABILIDAD
DATOS DE RECUPERACIÓN
Los datos de 15 curvas estándar consecutivas
dieron los siguientes resultados.
Sobre material de referencia
Muestra
(ppm)
0
0.5
1.0
2.5
5.0
10.0
%B/B0
%CV
100
86.2
77
57.8
41.6
28.2
5.1
5.0
7.8
11.4
10.9
Se llevaron a cabo tres experimentos
independientes sobre material de referencia
certificado (trigo), dando lugar a los siguientes
resultados:
Muestra de Trigo de
Referencia (ppm)
ppm
0.5 ± 0.07
2.5 ± 0.1
5.1 ± 0.3
0.40
2.14
4.63
Sobre muestras fortificadas
Se realizaron estudios de recuperación sobre
muestras contaminadas con 2.5 ppm de DON,
dando lugar a los siguientes resultados:
FT: 30.941DON01M
Tipo de
Muestra
Piensos
Maíz
Conservación
PRODUCTO DISTRIBUIDO POR INGENASA
IT-73840
IT-73780
9191.INGE
Ppm
%Recuperación
1.85
2.05
73.9
82.1
Refrigeración a 2-8º C
PRODUCTO FABRICADO POR:
9175.ING2
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