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XIX Verano de la Investigación Científica y Tecnológica del Pacífico
EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD ESPECÍFICA DE LA ENZIMA CATEPSINA B
DE CAMARÓN BLANCO (Litopenaeus vannamei) A DIFERENTES VALORES
DE pH.
Est. QBC. Kathia Itzel Ramírez Armenta1, Dr. Julio Humberto Córdova Murueta2.
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Departamento de Ciencias Químico Biológicas. Universidad de Sonora, Unidad Regional Centro.
Centro de Investigaciones Biológicas del Noroeste, Unidad La Paz. [email protected]
Planteamiento del problema
Proteasas lisosomales, llamadas catepsinas, principalmente de la clase serino y
cisteíno proteasas, catalizan la hidrólisis de una amplia variedad de sustratos
proteicos, actividad clave para diversos procesos fisiológicos (Barret, 1977). Las
catepsinas se encuentran en diversos tejidos y sus concentraciones varían
dependiendo del tipo de célula (Argarwal, 1990). Si bien en mamíferos la
catepsina B ha sido ampliamente estudiada, en invertebrados se tienen pocos
reportes de su caracterización. El objetivo principal es evaluar la actividad
específica de la enzima catepsina B de Litopennaeus vannamei a diferente pH con
la finalidad de iniciar la caracterización bioquímica de la enzima.
Metodología
La actividad específica se cuantificó utilizando el sustrato Z-arg-arg-7-amino-4metilcoumarin (SIGMA C-5429). La mezcla de reacción consistió en 10 µL extracto
enzimático de glándula digestiva de camarón con 20 µL de sustrato y 70 µL de
amortiguador de acetato de sodio 100 mM, DTT 2 mM, EDTA 1.5 mM y Tritón X100 al 0.05%. Se registraron los valores de fluorescencia emitida a 440nm,
durante 5 min con intervalos de lectura cada 30 segundos (Stephens, et. al. 2012).
Los valores de pH a evaluar fueron 4, 5, 5.5 y 6.
Conclusiones
Los resultados obtenidos muestran una actividad enzimática óptima a pH 6.0 con
respecto al resto de los valores de pH evaluados. Esto podría explicarse en
función de la actividad de la enzima, si bien se sabe que es una enzima lisosomal,
se ha visto que tiene participación a nivel digestivo en camarón ya que el jugo
gástrico donde participa como proteasa digestiva varía entre 5 y 6.
En estudios posteriores se evaluará el efecto de la temperatura sobre la actividad
enzimática de la catepsina B, así como constantes catalíticas y la identificación de
la proteína en el perfil de peptidasas de la glándula digestiva lo que permitirá una
caracterización bioquímica completa que proporcionará un mejor entendimiento de
la función de esta enzima en organismos invertebrados marinos.
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Pacífico
Agosto 2014