BENEMÉRITA

BENEMÉRITA
UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA
INSTITUTO DE FISIOLOGÍA
PURIFICACIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE UN ANTICUERPO
POLICLONAL DIRIGIDO CONTRA UNA PORCIÓN PEPTIDICA DEL
AMINO TERMINAL DE LA ENZIMA CONVERTIDORA DE
PROHORMONAS: PC1
TESIS PROFESIONAL
QUE PARA OBTENER EL GRADO DE:
MAESTRO EN CIENCIAS FISIOLÓGICAS
PRESENTA:
Lic. Nut. Gabriel Moreno Elizondo
ASESOR:
Dr. Osvaldo Vindrola Asti
Puebla, Pue.
Enero, 2006
ÍNDICE
i.
ii.
iii.
iv.
AGRADECIMIENTOS……………………………………………………3
ÍNDICE……………………………………………………………………..5
ÍNDICE DE FIGURAS Y TABLAS……………………………………….6
ABREVIATURAS………………………………………………………….7
I. RESUMEN…………………………………………………………………………..8
II. INTRODUCCIÓN…………………………………………………………………10
III. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA…………………………………………26
IV. HIPÓTESIS………………………………………………………………………26
V. OBJETIVOS
5.1 Objetivo general……………………………………………………………27
5.2 Objetivos particulares………………………………………………………27
VI. MATERIAL Y MÉTODOS
6.1 Obtención del péptido……………………………………………………..28
6.2 Preparación del conjugado…………………………………………………29
6.3 Especies animales…………………………………………………………..31
6.4 Líneas Celulares……………………………………………………………32
6.5 Preparación de extractos celulares…………………………………………34
6.6 Determinación de la concentración de proteínas………………………….35
6.7 Electroforesis en gel de poliacrilamida…………………………………….35
6.8 Electrotransferencia………………………………………………………..37
6.9 Cromatografía liquida de alta presión (HPLC)…………………………….38
VII. RESULTADOS…………………………………………………………………….40
VIII. DISCUSIÓN DE RESULTADOS………………………………………………..56
VIII.
CONCLUSIONES……………………………………………………………..61
IX. BIBLIOGRAFÍA…………………………………………………………………..62
Introducción
Antecedente:
A mediados de los años sesentas, dos grandes grupos de endocrinólogos: uno en Estados
Unidos encabezado por el Dr. Steiner, buscaba la enzima que sintetizaba insulina a partir de
pro-insulina; y el otro grupo en Canadá, dirigido por el Dr. Michel Chrétien, buscaba la
enzima que sintetizaba la hormona adrenocorticotrófica (ACTH) proveniente también de un
precursor de mayor peso molecular.
La pro-insulina, había sido descubierta en los años sesenta (Steiner y col., 1967) pero
pasaron casi 30 años de trabajo y no se pudo encontrar con los métodos bioquímicos
clásicos la o las endoproteasas involucradas en la síntesis de insulina. Estas enzimas
deberían estar en la vía de transporte intracelular mediada por vesículas y que involucra
desde el retículo endoplasmatico, pasando por el aparato de golgi y culminando en los
gránulos secretorios; como mas adelante se describe para las diferentes vías de secreción
(Sossin y Fisher, 1989).
El motivo fundamental fue que no se podían obtener preparados de tejidos pancreáticos que
no tuvieran contaminación con lisosomas. Lo mismo ocurría con la muestra de hipófisis
(Mains y col., 1990; Taylor y col., 2003).