DETERMINACIÓN DE GRASA Método Bligh & Dyer Sección Química de Alimentos y Nutrición ME-711.02-156 Emisión: 12-01-2009 Versión: 1 Actualización: 23-06-2014 Página 1 de 4 1. OBJETIVO Obtener la grasa de un alimento homogenizado mediante extracción directa con disolventes en frío. 2. CAMPO DE APLICACIÓN Y ALCANCE Esta técnica será aplicada a muestras de alimentos especialmente para extraer lípidos en frío para identificación por cromatografía de gases y pruebas de rancidez. 3. FUNDAMENTO El método se basa en la homogeneización de alimentos húmedos con metanol y cloroformo en proporciones tales que forman una fase sencilla miscible con el agua en los alimentos, que al adicionar posteriormente cloroformo y agua se separan dos fases con los materiales lípidos en la capa de cloroformo. 4. DOCUMENTOS DE REFERENCIAS 4.1 Bligh,E.G. and Dyer,W.J. 1959. A rapid method for total lipid extraction and purification. (Can. J.Biochem.Physiol. 37:911-917.) 4.2 Análisis Químico de Alimentos de Pearson. Egan, H; Kirk R y Sawyer R. Compañía Editorial Continental, México. 1988. 5. TERMINOLOGÍA No aplica 6. REACTIVOS, INSUMOS Y EQUIPOS 6.1 Reactivos. 6.1.1 Metanol p.a. 6.1.2 Cloroformo p.a. 6.1.3 Hidróxido de potasio p.a. 6.1.4 Éter de petróleo. 6.2 6.2.1 6.2.2 6.2.3 6.2.4 6.2.5 6.2.6 6.2.7 Insumos. Navecillas. Tubos para centrífuga 50 mL. Papel filtro whatman # 1 Micropipeta volumen variable 10000 µL. Pipeta volumétrica. Matraz redondo de fondo plano. Matraz Erlenmeyer 50 mL. DUEÑO DE PROCESO: Encargado del Laboratorio Nutrientes, Aditivos y Contaminantes ESTE DOCUMENTO FUERA DE LA INTRANET O IMPRESO SIN TIMBRE DE “DOCUMENTO CONTROLADO” SE CONSIDERA COPIA NO CONTROLADA APROBADO: Jefe Subdepartamento Alimentos y Nutrición DETERMINACIÓN DE GRASA Método Bligh & Dyer Sección Química de Alimentos y Nutrición 6.3 6.3.1 6.3.2 6.3.3 6.3.4 6.3.5 6.3.6 7. ME-711.02-156 Emisión: 12-01-2009 Versión: 1 Actualización: 23-06-2014 Página 2 de 4 Equipos. Balanza analítica rango 0,01g. Homogenizador ultraturrax. Centrífuga. Rotavapor. Estufa. Vortex. DESCRIPCIÓN DE ACTIVIDADES 7.1 Muestreo / Muestra No aplica 7.2 Preparación de Reactivos No aplica. 7.3 Preparación de curva de calibración No aplica. 7.4 Preparación de controles No aplica. 7.5 Preparación de la Muestra 7.5.1 Previo a la determinación de grasa en la muestra, debe ser calculada su humedad según ME-711.02-023 y registrar en el registro correspondiente. 7.6 Análisis de la muestra o realización de la medición. 7.6.1 Pesar aproximadamente 10 g de muestra y colocar en recipiente adecuado para la homogeneización. Agregar agua desionizada en cantidad suficiente para que la proporción final de agua sea 16 mL. Agregar 40 mL de metanol. Agregar 20 mL de cloroformo con pipeta volumétrica y extraer por 2 minutos con homogenizador. Agregar nuevamente 20 mL de cloroformo y extraer por 30 segundos con homogenizador. Agregar 20 mL de agua y extraer por 30 segundos con homogeneizador ultraturrax. Distribuir el contenido en tubos de centrífuga de 50 mL y centrifugar por 10 minutos entre 2000 –2500 rpm. 7.6.2 7.6.3 7.6.4 7.6.5 7.6.6 7.6.7 DETERMINACIÓN DE GRASA Método Bligh & Dyer Sección Química de Alimentos y Nutrición 7.6.8 7.6.9 7.6.10 7.6.11 7.7 ME-711.02-156 Emisión: 12-01-2009 Versión: 1 Actualización: 23-06-2014 Página 3 de 4 Extraer la capa inferior de cloroformo con jeringa de cada tubo sin perturbar las capas flotantes, filtrar por papel plegado y recibir el filtrado en matraz Erlenmeyer de 50 mL. Tomar una alícuota de 25 mL del filtrado con pipeta volumétrica y trasvasijar a un matraz redondo de fondo plano de 100 mL previamente secado, pesado y mantenido en desecador. Evaporar el cloroformo en rotavapor a 60 °C. Completar el secado en estufa de vacío a 60 °C por 2 horas. Enfriar en desecador. Pesar el matraz con la grasa. Cálculo de Resultados. A (g/100g) = A: P1: P2: VT: Va: VT * P2 *100 Va * P1 concentración en g/100g (%) de grasa peso de la muestra peso de la grasa seca obtenida volumen total de cloroformo (40 mL) volumen de la alícuota de cloroformo tomada (25 mL) 7.8 Aseguramiento de la calidad del ensayo. 7.8.1 Para asegurar los resultados del ensayo cada muestra para análisis se realiza en duplicado. 7.9 Expresión de los Resultados. 7.9.1 Los resultados se expresan en gramos de grasa/100 gramos de muestra. 8. CONTROL DE REGISTROS IDENTIFICACION RESPONSABLE RG-711.00.078 Registro de Análisis de análisis proximal en alimentos Profesionales y Técnicos Laboratorio de nutrientes, Aditivos y Contaminantes TIEMPO 5 años ALMACENAMIENTO MEDIO IDENTIFICACION SOPORTE Papel Estante Laboratorio Nutrientes, Aditivos y Contaminantes/ Cuadernillo anillado. RESPONSABLE 5 años. Destrucción del documento. DETERMINACIÓN DE GRASA Método Bligh & Dyer Sección Química de Alimentos y Nutrición 9. ME-711.02-156 Emisión: 12-01-2009 Versión: 1 Actualización: 23-06-2014 Página 4 de 4 CONTROL DE CAMBIOS VERSION FECHA PRINCIPALES PUNTOS MODIFICADOS 0 23-06-2014 Todos 10. RESUMEN DE MODIFICACIONES Cambio de formato PRT-711.02-156 a ME-711.02-156 CUADRO DE RESPONSABILIDADES Ejecuta el método Técnico de laboratorio Encargado de laboratorio 11. No Aplica. ANEXOS Elabora el informe de resultados Encargado de laboratorio Aprueba el informe de resultados Jefe de Subdepto. Alimentos y Nutrición