NTE INEN 2794 - Servicio Ecuatoriano de Normalización

Quito – Ecuador
NORMA
TÉCNICA
ECUATORIANA
NTE INEN 2794
PRODUCTOS DE APICULTURA. PROPÓLEOS. REQUISITOS
PRODUCTS FROM BEEKEEPING. PROPOLIS. REQUIREMENTS
DESCRIPTORES: Apicultura, abejas, propóleos
ICS: 65.140
15
Páginas
NTE INEN 2794
Norma
Técnica
Ecuatoriana
PRODUCTOS DE APICULTURA. PROPÓLEOS. REQUISITOS
PNTE INEN
2794:2015
1. OBJETO
Esta norma establece los requisitos del propóleos producidos por las abejas Apis mellifera.
2. REFERENCIAS NORMATIVAS
Los siguientes documentos, en su totalidad o en parte, son referidos en este documento y son
indispensables para su aplicación. Para referencias fechadas, solamente aplica la edición citada.
Para referencias sin fecha, aplica la última edición del documento de referencia (incluyendo cualquier
enmienda).
NTE INEN 1631, Miel de abejas. Muestreo
NTE INEN CODEX CAC/MRL 1, Lista de Límites Máximos para Residuos de Plaguicidas
NTE INEN CODEX CAC/MRL 2, Límites Máximos para residuos de medicamentos veterinarios en los
alimentos
NTE INEN-CODEX 193, Norma general para los contaminantes y las toxinas presentes en los
alimentos y piensos
3. TERMINOS Y DEFINICIONES
Para los efectos de esta norma, se adoptan las siguientes definiciones:
3.1
Propóleos. Producto compuesto de sustancias resinosas, gomosas y aromáticas, ceras,
aceites esenciales, polen y microelementos, de consistencia viscosa, elaborado por las abejas (Apis
mellifera) a partir de ciertas especies vegetales, que son transportadas al interior de la colmena y
modificadas parcialmente con sus secreciones salivales. La composición de los propóleos puede
variar, según las fuentes vegetales de origen, y de su función específica dentro de la colmena.
3.2
Balsámico. Aroma propio de las resinas vegetales (por ejemplo: pino, eucalipto, etc).
4. REQUISITOS
4.1 Requisitos generales
4.1.1 Los materiales que se utilicen en la recolección del propóleos deben estar limpios y libres de
sustancias que lo contaminen.
4.1.2
El propóleos no debe contener sustancias extrañas o posibles impurezas visuales.
4.1.3 En la inspección visual, el propóleos debe tener un olor característico del producto (resinoso o
aromático) y un sabor que puede variar de suave y balsámico a fuerte y picante, según su origen
botánico o geográfico.
4.2 Requisitos específicos
4.2.1 Requisitos físico-químicos. El propóleos debe tener los requisitos físicos y químicos que se
mencionan en la tabla 1.
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TABLA 1. Requisitos físicos y químicos
Pérdida por calentamiento
Cenizas
Sustancias extraíbles en nhexano (ceras)
%
%
%
-
10,0
5,0
MÉTODO DE
ENSAYO
Anexo A.2
Anexo A.3
-
35,0
Anexo A.4
Sustancias solubles en etanol
%
35,0
-
Anexo A.5
Impurezas mecánicas
%
-
25,0
Anexo A.6
Compuestos fenólicos totales,
expresados como ácido gálico
%
5,0
-
Anexo A.7
Flavonoides
%
1,0
-
Anexo A.8
Índice de oxidación
s
-
22
Anexo A.9
nm
270
315
Anexo A.10
REQUISITO
Espectro de absorción al UV
a
UNIDAD
a
Mín.
Máx
Porcentaje de fracción de masa
4.2.2
Aditivos. No se debe agregar aditivos de ningún tipo al propóleos.
4.2.3 Contaminantes. El propóleos no debe tener metales pesados en cantidades superiores al
máximo permitido en la NTE INEN-CODEX 193.
4.2.4 Residuos de plaguicidas. El propóleos no debe tener residuos de plaguicidas en cantidades
superiores al máximo permitido en la NTE INEN CODEX CAC/MRL 1.
4.2.5 Residuos de antibióticos y medicamentos veterinarios. Los límites máximos de
residuos de medicamentos veterinarios para serán los establecidos en la NTE INEN CODEX
CAC/MRL 2.
4.2.6
seco.
Requisitos complementarios. El almacenamiento se debe llevar a cabo en un lugar fresco y
5. INSPECCIÓN
5.1 Muestreo. El muestreo debe realizarse de acuerdo con la NTE INEN 1631.
5.2 Aceptación o rechazo. Se acepta el producto si cumple con los requisitos indicados en esta
norma, caso contrario se rechaza.
6. ENVASADO
El propóleos debe ser envasado en recipientes inocuos y seguros, que no alteren las características y
composición del producto. Además, el envase debe dar al producto una protección adecuada
respecto de la humedad y la temperatura excesiva. El envasado de propóleos debe efectuarse en
envases opacos para que la incidencia de la luz sea menor.
7. ROTULADO
En todos los envases debe constar, la siguiente información:
a) nombre del producto,
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b) marca comercial,
c) identificación del lote,
d) razón social de la empresa,
e) masa nominal en unidades del SI (en gramos),
g) fecha de envasado
h) precio de venta al público, (P.V.P.),
i) país de origen,
j) condiciones de conservación: mantener en lugar fresco y protegido de la luz.
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ANEXO A
MÉTODOS DE ENSAYO
1)
A continuación se detallan los métodos de ensayo para los requisitos establecidos en la tabla 1.
NOTA. Las diferentes determinaciones se deben realizar por duplicado.
A.1 Preparación de la muestra de propóleos
La muestra de propóleos en bruto se debe mantener a -18 °C, como mínimo 24 h.
El propóleos debe ser molido finamente en un mortero de porcelana o vidrio, o bien en forma
mecánica en un molino adecuado.
Después de la molienda la muestra debe conservarse refrigerada y protegida de la luz, en recipientes
de vidrio, hasta que se lleve a cabo el análisis.
NOTA. Una vez molida la muestra se debe tener cuidado de no esperar mucho tiempo antes del análisis, debido a que las
partículas tienden a unirse nuevamente.
A.2 Determinación de la pérdida por calentamiento
A.2.1 Equipos




Balanza analítica.
Cápsulas de porcelana, de 100 mm a120 mm de diámetro.
Estufa, con circulación de aire, preferentemente forzado, que opere a una temperatura de
100 °C ± 2 °C.
Desecador, provisto de un agente desecante adecuado.
A.2.2 Procedimiento
Se pesa una cápsula de porcelana limpia, previamente seca en la estufa a 100 °C ± 2 °C (
).
Se pesa en la cápsula de porcelana, aproximadamente 4 g de la muestra (A.1), con una precisión del
0,1 mg y se registra la masa de la cápsula con la muestra ( ).
Se calienta en la estufa regulada a 100 °C ± 2 °C durante 2 h. Luego se retira la cápsula, se coloca
en un desecador hasta que llegue a temperatura ambiente, y se pesa (
).
A.2.3 Cálculos
Se calcula la pérdida por calentamiento ( ), mediante la fórmula siguiente:
donde:
pérdida por calentamiento, en fracción de masa expresada en porcentaje
masa de la cápsula con la muestra seca, en gramos
masa de la cápsula con la muestra, en gramos
1)
IRAM-INTA 15935-1:2008. “Productos del NOA (noroeste argentino). Propóleos. Parte 1 – Propóleos en bruto”
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masa de la cápsula vacía, en gramos.
Se expresa el resultado como la media aritmética de las dos determinaciones, con una cifra decimal.
A.3 Determinación de las cenizas
A.3.1 Equipos




Balanza analítica.
Cápsula de porcelana.
Desecador, provisto de un agente desecante adecuado.
Horno de mufla, que opere a una temperatura de 550 °C ± 25 °C.
A.3.2 Procedimiento
Se pesa un crisol, previamente secado en la mufla a 550 °C ± 25 °C (
).
Se pesan en el crisol, aproximadamente 4 g de la muestra (A.1), con una precisión del 0,1 mg y se
registra la masa del crisol con la muestra ( ).
Se quema la muestra en un mechero bajo la campana de extracción, y se incinera a 550 °C ± 25 °C,
hasta que se obtengan cenizas sin residuos carbonosos. A continuación se retira cuidadosamente del
horno de mufla y se deja enfriar en un desecador hasta que alcance la temperatura ambiente. Se
pesa la muestra incinerada hasta que la masa este constante.
A.3.3 Cálculos
Se calculan las cenizas ( ), mediante la fórmula siguiente:
donde:
contenido de cenizas, en fracción de masa expresada en porcentaje
masa del crisol con la muestra incinerada, en gramos
masa del crisol con la muestra, en gramos
masa del crisol, en gramos
Se expresa el resultado como la media aritmética de las dos determinaciones, con una cifra decimal.
A.4 Determinación de sustancias extraíbles en n-hexano
A.4.1 Equipos







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Balanza analítica.
Equipo para extracción tipo Soxhlet o similar.
Cartuchos de celulosa o de papel filtro, secados en estufa a 80 °C.
Calefactor eléctrico.
Estufa con circulación de aire, que opere a una temperatura de 80 °C, preferentemente
forzada.
Desecador, provisto de un agente desecante adecuado.
Equipo de destilación.
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A.4.2 Reactivos

n-hexano
A.4.3 Procedimiento
Se pesa aproximadamente 2 g de la muestra (A.1) y se coloca en un cartucho de celulosa seco, o se
los envuelve en un papel de filtro seco, en ambos casos previamente tarados, se sujeta con hilo de
algodón desgrasado, y se colocan en el cuerpo de un extractor de Soxhlet.
Se tara el balón del extractor de Soxhlet, previamente secado en estufa a 80 °C (
), y se coloca en
él un volumen adecuado de n-hexano, (aproximadamente una vez y media el volumen del sifón), se
conecta al extractor y se comienza a calentar hasta que el solvente entre en ebullición y se mantenga
en esas condiciones durante 6 h, a una velocidad de aproximadamente 120 gotas a 150 gotas de
condensado por minuto.
El remanente de la muestra se saca del extractor, se seca y se reserva para las determinaciones de
resinas solubles en alcohol e impurezas mecánicas según A.5 y A.6 respectivamente.
En el balón queda la cera y otras sustancias extraíbles disuelta en n-hexano; se evapora el n-hexano
y se coloca el balón en la estufa a 80 °C por lo menos 30 min. Se coloca en un desecador hasta
temperatura ambiente y se pesa. Se repite el último procedimiento hasta lograr constancia de masa,
lo cual se verifica cuando dos pesadas sucesivas no difieren entre sí en más de 5 mg.
A.4.4 Cálculos
Se calcula el contenido de sustancias extraíbles (
), mediante la fórmula siguiente:
donde:
contenido de sustancias extraíbles en n-hexano, en fracción de masa expresado en
porcentaje
masa del balón con sustancias extraíbles (seco), en gramos
masa del balón vacío (seco), en gramos
masa de la muestra, en gramos
Se expresa el resultado como la media aritmética de las dos determinaciones, con una cifra decimal y
cuando los resultados individuales no difieran en más de 5% del valor obtenido. De no ser así, se
repite el ensayo.
A.5 Determinación de resinas
A.5.1 Equipo






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Balanza analítica.
Equipo de extracción (Soxhlet).
Calefactor eléctrico.
Estufa con circulación de aire preferentemente forzada, que opere a una temperatura de
80 ºC.
Desecador, provisto de un agente desecante adecuado.
Equipo de destilación.
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A.5.2 Reactivos


Etanol
Solución de cloruro de hierro (III) (FeCl3) de 10 g/100 mL
A.5.3 Procedimiento
Se coloca el remanente de cada una de las muestras resultantes de la extracción de sustancias
extraíbles, según A.4.3, en el cuerpo de un extractor Soxhlet.
Se coloca en el balón del extractor Soxhlet un volumen adecuado de etanol, se arma el aparato y se
comienza a calentar hasta que el solvente entre en ebullición. Se mantiene en esas condiciones
durante 6 h como mínimo, a una velocidad de aproximadamente 120 gotas a 150 gotas de
condensado por minuto. Se continúa la extracción hasta que el líquido en contacto con la muestra se
observe incoloro.
El punto final de la extracción se controla agregando una gota de este alcohol a un tubo de ensayo
que contenga una solución de cloruro de hierro (III) (FeCl3) de 10 g/100 mL (A.5.2). Si el color de la
solución cambia de amarillento a verdoso, indica la presencia de sustancias fenólicas y por lo tanto es
necesario continuar con la extracción. En caso contrario se da por finalizada la extracción.
Se transvasa cuantitativamente el contenido del balón a un matraz aforado de 100 mL y se lleva a
volumen con etanol.
Se pipetea 50 mL y se coloca en un balón de destilación previamente pesado. Se elimina
completamente el alcohol mediante el equipo de destilación. El volumen restante se coloca en un
frasco color ámbar, con tapa y se reserva para la determinación de fenoles totales, flavonoides y
espectro de absorción al UV, según A.7, A.8 y A.10 respectivamente.
El remanente de la muestra se saca del extractor y se reserva para la determinación de impurezas
mecánicas según A.6.
Las resinas quedan en el balón de destilación, el cual se coloca en una estufa a 80 °C para evaporar
los restos de etanol. Después de evaporado el etanol, se retira de la estufa, se coloca en un
desecador hasta temperatura ambiente y se pesa. Se repite el último procedimiento hasta lograr
constancia de masa, lo cual se verifica cuando dos pesadas sucesivas no difieren entre sí en más de
5 mg.
A.5.4 Cálculos
Se calculan las resinas ( ), mediante la fórmula siguiente:
donde:
contenido de resinas, en fracción de masa expresada en porcentaje
masa del balón con resinas (secas), en gramos
masa del balón vacío (seco), en gramos
masa de la muestra, en gramos
volumen al cual se diluye el extracto etanólico total de resinas
volumen tomado para evaporar el alcohol y efectuar el cálculo
Si se trabaja de acuerdo con las condiciones indicadas, la formula anterior se reduce a la expresión
siguiente:
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Se expresa el resultado como la media aritmética de las dos determinaciones y cuando los resultados
individuales no difieran entre sí en más de 5% del valor obtenido.
A.6 Determinación de impurezas mecánicas
A.6.1 Equipos



Balanza analítica.
Estufa con circulación de aire, preferentemente forzada, que opere a una temperatura de
80 °C.
Desecador, provisto de un agente desecante adecuado.
A.6.2 Procedimiento
Se seca en la estufa a 80 °C los remanentes de cada una de las muestras provenientes de A.5 (en
cartucho o encerrada en papel), se retira de la estufa, se coloca en un desecador hasta temperatura
ambiente y se pesa. Se repite el último procedimiento hasta lograr constancia de masa, lo cual se
verifica cuando dos pesadas sucesivas no difieren entre sí en más de 5 mg.
A.6.3 Cálculos
Se calculan las impurezas mecánicas (
), mediante la fórmula siguiente:
donde:
contenido de impurezas mecánicas, en fracción de masa expresada en porcentaje
masa del cartucho (o el papel) seco, en gramos
masa del cartucho (o el papel) vacío seco, en gramos
masa de la muestra, en gramos
Se expresa el resultado como la media aritmética de las dos determinaciones y cuando los resultados
individuales no difieran entre sí en más de 5% del valor obtenido.
A.7 Determinación de compuestos fenólicos totales
A.7.1 Equipo






Espectrofotómetro, que permita hacer lecturas de absorbancia a 765 nm.
Baño de agua, que opere a una temperatura de 50 ºC.
Matraces aforados, adecuados para la preparación de las soluciones
Balón, de 1000 mL de capacidad
Condensador de reflujo
Cubetas de vidrio
A.7.2 Reactivos
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
-
Agua para análisis
Solución de referencia de ácido gálico de 0,5 mg/mL. Se disuelven 0,05 g de ácido gálico en
agua para análisis y se lleva a un volumen de 100 mL en un matraz aforado. Se mantiene la
solución refrigerada a 4 ºC, y se la utiliza después de 48 h de haberla preparado.
-
Reactivo de Folin-Ciocalteu
NOTA. El reactivo de Folin-Ciocalteau está disponible en el comercio ya listo para usar.
-
Solución de carbonato de sodio. Se disuelven 159 g de carbonato de sodio anhidro en 700
mL de agua para análisis caliente. Se enfría y se completa a 1 000 mL con agua para
análisis, en un matraz aforado.
A.7.3 Curva de calibración
NOTA. Se debe realizar una curva de calibración para cada serie de ensayos.
Se toma alícuotas de 5 mL, 10 mL, 15 mL, 20 mL y 25 mL de la solución de referencia, se colocan en
matraces aforados de 25 mL y se deja un matraz vacío como blanco. Se completa el volumen con
una solución de etanol de 10 mL/100 mL. Las diluciones así preparadas deben contener 0 mg/mL;
0,1 mg/mL; 0,2 mg/mL; 0,3 mg/mL; 0,4 mg/mL y 0,5 mg/mL, respectivamente de ácido gálico.
Se toma 1 mL de cada una de las soluciones de referencia diluidas y se coloca en matraces aforados
de 25 mL, se agregan 10 mL de agua para análisis y 1 mL del reactivo de Folin-Ciocalteu, se agita
suavemente y se deja en reposo durante 2 min.
Se añaden 4 mL de la solución de carbonato de sodio y se completa el volumen con agua para
análisis, sin agitar. Finalmente, se calienta en un baño de agua a 50 °C durante 5 min y se enfría
hasta temperatura ambiente.
Se mezcla el contenido de los matraces antes de efectuar la medición.
Se colocan las soluciones en cubetas de vidrio y se lee la absorbancia en un espectrofotómetro a
765 nm, contra un blanco preparado en las mismas condiciones conteniendo los reactivos, y
utilizando 1 mL de agua para análisis en lugar de la solución de referencia diluida.
Para el trazado de la curva de calibración es conveniente disponer de 4 a 5 repeticiones y, en
principio, considerar el valor promedio. Además, se debe tener en cuenta la dilución que se produce
en las soluciones de referencia diluidas al colocarlas en el matraz de 25 mL, donde se agregan los
reactivos para la lectura final.
A.7.4 Procedimiento
La determinación se efectúa por duplicado.
Se pipetean 5 mL (Vt) de cada uno de los extractos alcohólicos obtenidos en la determinación de
resinas (A.5) y se colocan en un matraz aforado de 100 mL (V1). Se completa con agua para análisis,
y se agita vigorosamente para estabilizar la emulsión formada.
Se toma 1 mL (VT1) de la solución anterior y se coloca en un matraz aforado de 25 mL (Vc), se
agregan 10 mL de agua para análisis y 1 mL del reactivo de Folin-Ciocalteu, se agita suavemente y
se deja en reposo durante 2 min a temperatura ambiente.
Se añaden 4 mL de la solución de carbonato de sodio y se completa el volumen con agua para
análisis, sin agitar. Finalmente, se calienta en un baño de agua a 50 °C durante 5 min, y se enfría en
baño de agua hasta temperatura ambiente.
Se mezcla el contenido de los matraces antes de efectuar la medición.
NOTA. Desde este paso se tiene hasta 30 min para realizar la lectura.
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Se coloca la solución en una cubeta de vidrio y se lee la absorbancia en un espectrofotómetro a
765 nm, contra el blanco preparado en las mismas condiciones conteniendo los reactivos, y utilizando
1 mL de agua para análisis en lugar de la muestra.
Con el valor de absorbancia obtenido, se interpola en la curva de calibración, y se determina el valor
buscado.
A.7.5 Cálculos
Se debe tener en cuenta que el extracto alcohólico (normalmente de 100 mL (Vs)) se obtuvo a partir
de 50mL (V1 + V2) de cada uno de los extractos alcohólicos provenientes de la determinación de
resinas al procesar la muestra simple y su duplicado. Por lo tanto, se considera como masa de
muestra, M, el promedio de las masas de las muestras individuales, m 1 y m2.
(1)
En caso que se varíe el volumen de extracto alcohólico, o bien se tomasen volúmenes diferentes de
50 mL de cada muestra (simple y duplicado), se debe calcular la masa de muestra como el promedio
ponderado:
La concentración de fenoles totales en la solución (F) que se coloca en la cubeta del
espectrofotómetro se calcula mediante la fórmula siguiente:
(2)
donde:
concentración de fenoles totales en la cubeta, en miligramos por mililitro;
contenido de fenoles totales de propóleos, en gramos por cien gramos;
factor para expresar la concentración, en miligramo por mililitro.
La curva de calibración relaciona la absorbancia con la concentración de la sustancia de referencia,
en este caso ácido gálico, mediante la expresión Abs = f (F). Generalmente se obtiene una recta con
ordenada al origen igual a cero. Por lo tanto:
(3)
donde:
valor de la absorbancia leído;
pendiente de la recta;
concentración de la solución de referencia, en miligramos por mililitro.
Despejando
de (3) e igualando con (2):
(4)
donde:
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valor de la absorbancia leída a 765 nm en la muestra.
La fórmula (4) es la ecuación general, pero para las condiciones enunciadas en esta técnica resulta la
siguiente:
(5)
El resultado obtenido en (5) indica el contenido de compuestos fenólicos totales, en g/100 g de
propóleos, expresado como su equivalente en ácido gálico.
A.8 Determinación de flavonoides totales
A.8.1 Reactivos
ADVERTENCIA. Debido a la peligrosidad de los reactivos utilizados en esta técnica se debe
utilizar propipeta en todas las mediciones de volumen.
-
Metanol
-
Tricloruro de aluminio, p.a.
-
Solución madre de quercetina de 1 mg/mL. Se disuelve 100 mg de quercetina dihidratada en
100 mL de metanol. Se debe conservar en la oscuridad y refrigerada.
-
Solución patrón de quercetina de 100 g/mL. Se toma 10 mL de la solución madre de
quercetina, y se diluye en matraz aforado de 100 mL con metanol. Se debe conservar en la
oscuridad y refrigerada.
-
Solución de tricloruro de aluminio de 5 g/100 mL. Se pesa 10 g de tricloruro de aluminio y se
disuelven en 200 mL de metanol.
ADVERTENCIA. Se debe trabajar con mucho cuidado, bajo una campana de extracción,
empleando guantes y mascarilla, ya que el producto es muy corrosivo e higroscópico.
A.8.2 Curva de calibración
Para la curva de calibración se preparan soluciones de 2 µg/mL, 4 µg/mL, 6 µg/mL, 8 µg/mL y 10
µg/mL de quercetina, respectivamente.
En seis matraces aforados de 25,0 mL se pipetea 0,5 mL; 1,0 mL; 1,5 mL; 2,0 mL y 2,5 mL de la
solución patrón de quercetina y se deja uno como blanco. Se agregan 0,5 mL de la solución de
tricloruro de aluminio a cada una de ellas y al blanco. Se enrasa a 25 mL con metanol. Se deja 30 min
en la oscuridad, y se leen las absorbancias a 425 nm.
A.8.3 Procedimiento
Se parte de los extractos alcohólicos obtenidos en la determinación de resinas (A.5), y se pipetea
0,1 mL (Vt) de cada uno de ellos en los respectivos matraces de 25 mL (VC), se agrega 0,5 mL de
solución de tricloruro de aluminio y se enrasa con metanol.
Se prepara un blanco con 0,1 mL de alcohol etílico y 0,5 mL de solución de tricloruro de aluminio, y se
enrasa con metanol.
Se deja 30 min en la oscuridad, se coloca en una cubeta de vidrio y se lee la absorbancia a 425 nm.
Si la absorbancia es mayor que 0,400 se repite la determinación tomando un volumen menor de
extracto alcohólico. Del mismo modo si se obtiene una lectura muy baja, se aumenta el volumen de
dicho extracto.
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A.8.4 Cálculos
Se debe tener en cuenta que el extracto alcohólico (normalmente de 100 mL) se obtuvo a partir de 50
mL de cada uno de los extractos alcohólicos provenientes de la determinación de resinas al procesar
la muestra simple y su duplicado. Por lo tanto, se considera como masa de muestra, M, el promedio
de las masas de las muestras individuales, m 1 y m2.
(6)
En caso que se varíe el volumen de extracto alcohólico, o bien se tomasen volúmenes diferentes de
50 mL de cada muestra (simple y duplicado), se debe calcular la masa de muestra como el promedio
ponderado:
La concentración de flavonoides totales (FIt) en la solución que se coloca en la cubeta del
espectrofotómetro se calcula mediante la fórmula siguiente:
(7)
donde:
factor para expresar la concentración, en miligramos por mililitro.
La curva de calibración relaciona la absorbancia con la concentración de la sustancia de referencia,
en este caso la quercetina dihidratada, mediante la expresión Abs = f (FIt). Generalmente se obtiene
una recta con ordenada al origen igual a cero. Por lo tanto:
(8)
donde:
valor de absorbancia leído;
pendiente de la recta;
concentración de la solución de referencia, en miligramos por mililitro.
Igualando (2) y (3) y despejando:
(9)
donde:
valor de absorbancia de la muestra, leído a 425 nm.
La fórmula (4) es la ecuación general, pero para las condiciones enunciadas en esta técnica, resulta
la siguiente:
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(10)
donde:
contenido de flavonoides totales de propóleos, en gramos por cien gramos.
El resultado obtenido en la ecuación10 indica el contenido de flavonoides totales, en fracción de masa
de propóleos en porcentaje, expresado como su equivalente en quercetina dihidratada.
A.9 Determinación del índice de oxidación
A.9.1 Equipo
-
Balanza analítica
Erlenmeyer de 125 mL
Embudo
Papel de filtro, de velocidad de filtración rápida.
Tubo de ensayo
Cronómetro
A.9.2 Reactivos
-
Etanol
Ácido sulfúrico
Permanganato de potasio
Solución de ácido sulfúrico de 20 mL/100 mL.
Solución de permanganato de potasio 0,1 N.
A.9.3 Procedimiento
Se pesa 0,2 g de la muestra (A.1) y se coloca en un erlenmeyer de 125 mL. Se añade 5 mL de etanol
al 96 % y se deja en reposo durante 1 h.
Se agrega 100 mL de agua para análisis, se agita, se filtra a través de un papel filtro y se recoge el
filtrado en un vaso de precipitación o erlenmeyer.
Se coloca 2 mL del filtrado en un tubo de ensayo, se añade 1 mL de solución de ácido sulfúrico y se
agita durante 1 min.
Finalmente, se agregan en el tubo 0,05 mL (1 gota) de la solución de permanganato de potasio 0,1 N
y se pone en marcha el cronómetro en el preciso momento en que la gota se pone en contacto con la
solución acidulada de propóleos, agitando constantemente. La gota debe caer directamente sobre la
solución y no sobre las paredes del tubo. Se registra el tiempo, en segundos, que la solución tarda en
decolorarse.
Se expresa el resultado, en segundos, como media aritmética de ambas determinaciones.
A.10 Determinación del espectro de absorción UV-visible
A.10.1 Equipo
-
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Espectrofotómetro de UV visible, que permita trabajar en un intervalo de longitudes de onda
comprendido entre 240 nm y 420 nm.
Cubetas de cuarzo, de 1 cm de camino óptico, para trabajar en la región UV del espectro.
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A.10.2 Reactivos
-
Etanol
A.10.3 Procedimiento
A partir del extracto alcohólico obtenido en la determinación de resinas (A.5), se efectúa una dilución
de 1 en 1 000 con alcohol etílico. Se efectúa el barrido completo de longitudes de onda desde 240 nm
hasta 420 nm.
Se grafican los valores de absorbancia medidos en función de la longitud de onda de la radiación. La
presencia de compuestos fenólicos resulta positiva si se registra un máximo de absorbancia entre
270 nm y 315 nm.
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NTE INEN 2794
8. BIBLIOGRAFÍA
IRAM-INTA 15935-1:2008. “Productos del NOA (noroeste argentino). Propóleos. Parte 1 – Propóleos
en bruto”.
IRAM-INTA 15935-2:2008. “Productos del NOA (noroeste argentino). Propóleos. Parte 2 – Extractos
de propóleos”.
ABTN NBR 16168:2013. “Apicultura — Própolis — Sistema de produção no campo”.
Salamanca, G., et al. 2001. “El sistema de control y puntos críticos en la extracción y beneficio de
propóleos”. En: http://www.beekeeping.com/articulos/salamanca/puntos_criticos_propoleo.htm#top.
Gobierno de Cataluña. 2010. “Guía de prácticas correctas de higiene para el sector apícola”.
Generalitat de Catalunya. Primera edición. Cataluña. España. Pág. 43.
AOAC Ofificial Method 923.03. 2011. “Ash of flour. Direct Method”. Association of Official Analytical
Chemists. Décimo octava edición.
Yoong, A. 2004. “Caracterización físico-química del propóleo de la Escuela Agrícola Panamericana y
su efecto antioxidante en aceite de soya”. Tesis. Carrera de Agroindustria. Zamorano. Honduras. En:
http://bdigital.zamorano.edu/bitstream/11036/1949/1/T1893.pdf. Pág. 12-28
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INFORMACIÓN COMPLEMENTARIA
Documento:
NTE INEN 2794
TÍTULO: PRODUCTOS DE
REQUISITOS
ORIGINAL:
Fecha de iniciación del estudio:
APICULTURA.
PROPÓLEOS. Código ICS:
65.140
REVISIÓN:
La Subsecretaría de la Calidad del Ministerio de Industrias
y Productividad aprobó este proyecto de norma
Oficialización con el Carácter de
por Resolución No.
publicado en el Registro Oficial No.
Fecha de iniciación del estudio:
Fechas de consulta pública:
Comité Técnico de:
Fecha de iniciación:
Integrantes del Comité:
Fecha de aprobación:
NOMBRES:
INSTITUCIÓN REPRESENTADA:
Otros trámites: Esta NTE INEN xx:xx (xxx), reemplaza a la NTE INEN xx:xx (xx)
La Subsecretaría de la Calidad del Ministerio de Industrias y Productividad aprobó este proyecto de
norma
Oficializada como:
No.
Por Resolución No.
Registro Oficial
Servicio Ecuatoriano de Normalización, INEN - Baquerizo Moreno E8-29 y Av. 6 de Diciembre
Casilla 17-01-3999 - Telfs: (593 2)2 501885 al 2 501891
Dirección Ejecutiva: E-Mail: [email protected]
Dirección de Normalización: E-Mail: [email protected]
Dirección Zonal Guayas: E-Mail: [email protected]
Dirección Zonal Azuay: E-Mail: [email protected]
Dirección Zonal Chimborazo: E-Mail: [email protected]
URL:www.normalizacion.gob.ec