guia para la vigilancia por laboratorio de tos ferina

GUIA PARA LA VIGILANCIA POR LABORATORIO DE TOS FERINA
DIRECCION DE REDES EN SALUD PÚBLICA
GRUPO DE MICROBIOLOGIA
19 DE DICIEMBRE DE 2014
Dirección
Fernando Pio de la Hoz
Director General Instituto Nacional de Salud
Coordinación
Mauricio Beltrán Durán
Director Técnico Redes en Salud Pública
Cesar Augusto Ramirez Segura
Subdirector Laboratorio Nacional de Referencia
Dirección de Redes en Salud Pública
Carolina Duarte Valderrama
Coordinadora Grupo de Microbiología
Laboratorio Nacional de Referencia
Dirección de Redes en Salud Pública
Esther Cristina Barros- Marysol Gonzalez Hormiga
Equipo Técnico Subdirección Laboratorio Nacional de Referencia
Dirección de Redes en Salud Pública
Elaborado por
Efraín Andrés Montilla Escudero
Grupo de Microbiología
Subdirección Laboratorio Nacional de Referencia (SLNR)
Dirección Redes en Salud Pública
Fabiola Rojas Baquero
Grupo de Microbiología
Subdirección Laboratorio Nacional de Referencia (SLNR)
Dirección Redes en Salud Pública
OBJETIVOS DE LA GUÍA
Trazar lineamientos técnicos y operativos de la vigilancia por laboratorio del evento Tos
ferina.
Precisar la organización de la Red Nacional de Laboratorios para la vigilancia de la Tos
Ferina, así como describir las funciones en cada uno de los niveles.
Describir los procesos de obtención, transporte y conservación de las muestras para la
vigilancia del evento.
Detallar los fundamentos técnico-científicos de los ensayos de laboratorio útiles en la
vigilancia de la Tos Ferina
DEFINICIONES Y ABREVIATURAS
Ácido Desoxirribonucleico (ADN): es un polímero de monómeros de nucleótidos
(deoxyadenilato, deoxyguanidilato, deoxycitidilato y timidilato) donde se almacena la
información genética y responsable de la transmisión hereditaria
Agar Regan Lowe con cefalexina (RL+C): medio selectivo usado para aislamiento de
Bordetella, contiene compuestos que absorben moléculas tóxicas como iones pesados,
radicales libres, ácidos grasos que puedan contener la muestra e inhibir la bacteria. El
medio está elaborado a base de carbón activado, glicerol, peptonas y sangre de caballo
desfibrinada al 10%. La cefalexina se utiliza para inhibir la mayoría de la microbiota
bacteriana presente en el tracto respiratorio.
Agar Regan Lowe sin cefalexina (RL-C): tiene el mismo fundamento y composición del
medio agar Regan Lowe, pero sin cefalexina que inhibe el crecimiento de Bordetella
holmesii.
Aspirado nasofaríngeo (ANF): muestra extraída por succión de la parte posterior de la
nasofaringe mediante sonda.
Frotis nasofaríngeo (FNF): muestra extraída con un escobillón flexible de dacrón, rayón o
nylon de la parte posterior de la nasofaringe
Medio de transporte Regan Lowe semisólido: la misma composición del medio agar
Regan Lowe pero a la mitad de su concentración y se usa para el transporte de muestras
nasofaríngeas en pacientes o casos probables de tos ferina; el medio aporta la humedad,
inhibición de microbiota acompañante y aporte de nutrientes suficientes al género
Bordetella mientras se siembra en agar Regan Lowe.
Reacción en cadena de la polimerasa (PCR): técnica de biología molecular cuyo objetivo
es obtener un gran número de copias de un fragmento de ADN particular, partiendo de
una única copia del fragmento original.
Tos Ferina: enfermedad respiratoria bacteriana aguda, prevenible por vacuna, altamente
contagiosa, causada por Bordetella pertussis, cuya sintomatología es ocasionada por las
toxinas que libera el microorganismo cuando invade el epitelio ciliado respiratorio y
afectando el árbol traqueo bronquial del individuo susceptible.
Síndrome Coqueluchoide: a diferencia de la tos ferina es un término que se ha utilizado
para incluir aquellos pacientes que presentan un cuadro clínico indistinguible de tos ferina,
es un cuadro clínico con diferentes etiologías infecciosas o no infecciosas. Los agentes
involucrados pueden incluir virus y bacterias, entre los que destacan H.influenzae,
Moraxella catarrhalis, M. pneumoniae, Adenovirus, virus Influenza, Parainfluenza 1-4,
Virus sincitial respiratorio, citomegalovirus y virus de Epstein Barr.
GENERALIDADES
Agente infeccioso
La tos ferina es una enfermedad causada principalmente por Bordetella pertussis, sin
embargo existen otras especies del género que puedan causar infección respiratoria
parecida a la tos ferina como B.parapertussis, B.holmesii y B. bronchiseptica este último
conocido como un patógeno animal pero que rara vez infecta a personas
inmunocomprometidas. Bordetella spp. es un cocobacilo Gram negativo pequeño entre
0,2 - 0,5 µm de diámetro y entre 0,5 - 2,0 µm de largo, inmóvil, no esporulado, aerobio
estricto de requerimientos nutricionales especiales que se encuentra de forma aislada o
en pares y raras veces en cadenas cortas.
Frecuencia
Es una enfermedad que afecta a todos los grupos de edad afectando especialmente a
menores de un año donde los lactantes presentan más riesgo de complicaciones y
letalidad, a continuación en la figura 1 se muestra la incidencia de la enfermedad en
Colombia desde el 2003, en menores de un año, menores de 5 años y población general
x 100.000h. Ver Gráfica 1.
Gráfica 1. Incidencia de tos ferina por 100 000 habitantes, Colombia 2003 –2014 periodo
epidemiológico VII
9,0
8,0
250,0
7,0
200,0
6,0
5,0
150,0
4,0
100,0
3,0
2,0
50,0
1,0
0,0
2003
2004
2005
2006
2007
2008
2009
2010
2011
2012
2013
2014*
Incidencias menores de 1 año
39,7
70,4
58,5
55,7
11,3
28,7
26,6
38,6
98,5
255,4
193,8
32,6
Incidencias menores de 5 años
9,5
15,7
13,5
13,1
2,5
6,9
8,7
8,6
21,9
61,7
54,3
6,1
Incidencias población general
1,1
1,7
1,4
1,5
0,3
0,7
1,0
0,9
2,2
8,5
6,3
0,8
% Coberturas de vacunación
92
89
93
94
93
92
92
88
85
84
91
91
Fuente: Sivigila, 2011- periodo epidemiológico VII de 2014
0,0
incidencia población general
Incidencia menores de 1 y 5 años
300,0
Modo de transmisión
El agente causal de la tos ferina se transmite por contacto directo (persona a persona) a
través de aerosoles creados por la expulsión de secreciones de las mucosas del tracto
respiratorio de una persona infectada a una susceptible.
Transmisibilidad
Es máxima durante el período catarral (primeros 5 a 7 días), antes de la fase paroxística y
puede extenderse hasta tres semanas de comenzados los paroxismos típicos en los
pacientes que no han recibido tratamiento. Es altamente contagiosa si la exposición con el
infectado es prolongada y estrecha como en el hogar, colegio, sala cuna, jardín infantil.
Posee una alta transmisibilidad, presentando una tasa de ataque secundaria en los
susceptibles de un 80%.
Reservorio
El hombre es su único reservorio y huésped. B.pertussis se aloja transitoriamente en la
nasofaringe de los pacientes, de personas oligosintomáticas y asintomáticas estos
últimos, definidos como portadores transitorios.
Incubación
El periodo de incubación de la Tos ferina es de 7 a 10 días y en raras ocasiones excede
los 14 (rango: 6 a 21 días).
Inmunidad
Los individuos que han contraído la tos ferina desarrollan inmunidad de tipo humoral que
protege contra una nueva infección sintomática durante 15 años volviéndose susceptible a
una reinfección en edad adulta.
Entre las vacunas contra B.pertussis existen las elaboradas con bacteria inactivada, que
confiere protección contra la enfermedad en aproximadamente al 75-80% de la población
que ha recibido tres dosis. No impiden la colonización nasofaríngea y la inmunidad
otorgada por las vacunas protege contra las formas graves de enfermedad disminuyendo
la probabilidad de hospitalización, complicaciones, letalidad y secuelas. La protección se
pierde progresivamente al cabo de 5-6 años, quedando adolescentes y adultos
nuevamente susceptibles de enfermar pero sin la gravedad del lactante. Actualmente, se
encuentra disponibles vacunas de tipo acelular que contiene antígenos purificados de B.
pertussis y reactogenicidad menor a las vacunas completas.
Distribución del evento en el país
La tos ferina en los últimos 4 años ha estado en el 75% del territorio nacional (Figura 1);
afectando principalmente a los menores de 1 año (Grafica 1).
Figura 1. Incidencia de tos ferina en población general por departamento de procedencia,
Colombia, 2011 -2014
Superan la incidencia nacional
No superan la incidencia nacional
Sin casos positivos
Año
2011
2012
2013
2014
Incidencia nacional x
100 000 habitantes
2,2
8,5
6,3
0,8
Antioquia
Bogotá, d.C.
Arauca
Huila
Caldas
Cundinamarca
Nariño
Antioquia
Bogotá, D.C.
Vaupés
Caldas
Huila
Vichada
San Andrés
San Andrés
Departamentos que
superan las incidencia
nacional
Departamentos con
silencio epidemiológico
Antioquia
Amazonas
Vichada
Fuente: Sivigila, 2011- periodo epidemiológico VII de 2014
Antioquia
Bogotá, d.C.
Huila
Sucre
Caquetá
Risaralda
N. Santander
Cesar
Amazonas
Guaviare
Aspectos clínicos:
Se distinguen varias fases de la infección por Tos ferina:
Fase catarral: de aproximadamente dos semanas de duración, se caracteriza por
inflamación de la mucosa, descarga nasal, lagrimeo, tos leve y fiebre de leve a moderada
(semejante a un resfriado común).
Fase paroxística: dura aproximadamente cuatro semanas, se caracteriza por tos en
quintas en espiración (con 5 a 15 accesos de tos), que puede continuar con un estridor
inspiratorio, y que con frecuencia termina en expulsión de mucosidades y cianosis
marcada. La tos puede acompañarse de vómito; con frecuencia se presenta hipotonía y
ocasionalmente, pérdida de conocimiento.
Se pueden presentar diferentes complicaciones en la fase paroxística entre ellas;





La infección bacteriana secundaria, que puede manifestarse como neumonía, es la
causa más frecuente de muerte relacionada con la tos ferina.
Otitis media y sepsis.
Manifestaciones neurológicas, incluidas crisis convulsivas y encefalopatía con
alteración del estado de conciencia.
Problemas nutricionales y deshidratación, debidos principalmente al vómito, a
dificultades en la alimentación y a las prácticas inadecuadas de alimentación de los
niños enfermos.
Complicaciones secundarias al aumento de la presión durante los accesos paroxísticos
graves de tos como hemorragias subconjuntivales, epistaxis, edema de la cara,
neumotórax, hematomas subdurales, hernias, prolapso rectal y en los adultos,
incontinencia urinaria e incluso fracturas costales.
Fase de convalecencia: dura aproximadamente dos semanas y se caracteriza porque los
episodios de tos son menos intensos y los demás signos desaparecen. La mayoría de los
casos leves o atípicos se presentan entre adolescentes y adultos.
Tos Ferina maligna: los niños menores de 6 meses de edad o con un esquema de
vacunación incompleto (menor de 3 dosis) puede desarrollar una forma grave del
coqueluche llamado tos ferina maligna, definida como falla respiratoria, hipoxemia
refractaria e hipertensión pulmonar, presentando una alta tasa de morbilidad y a pesar de
las medidas terapéuticas empleadas puede llegar a una mortalidad hasta del 75 %. Estas
fases clínicas se encuentran resumidas en la Figura 2.
Figura 2. Etapas y duración de la tos ferina en semanas
Diagnóstico diferencial
El síndrome coqueluchoide puede tener varias causas y estas pueden ser infecciosas y
no infecciosas. Dentro de las infecciosas los agentes etiológicos bacterianos conocidos
son: Bordetella parapertussis, Bordetella bronchiseptica, Bordetella holmesii, Mycoplasma
pneumoniae, Chlamydiophila pneumoniae, Chlamydia trachomatis, Bramanhella
catarralis, Haemophilus influenzae; entre los agentes virales estan Rhinovirus, Bocavirus,
Metapneumovirus, Adenovirus, Virus sincitial respiratorio (VSR), Virus parainfluenza
humano y Virus influenza. Como causas no infecciosas: el reflujo gastroesofágico, asma
bronquial, aspiración de cuerpos extraños, aspiración de sustancias tóxicas, fibrosis
quística, adenopatías, compresiones externas o internas, hiperreactividad bronquial. En
algunas ocasiones se presentan coinfecciones de varios agentes como causa del
síndrome coqueluchoide.
DIAGNÓSTICO POR LABORATORIO
Tipos de muestras, recolección y transporte
Hisopado nasofaríngeo
Revise la demostración de colección de hisopos nasofaríngeos en la página web del
Centro de Control y Prevención de Enfermedades (CDC, por sus siglas en inglés):
http://video.cdc.gov/asxgen/nip/isd/swabdemo.wmv
Los especímenes deben ser obtenidos de la parte posterior de la nasofaringe (ver Figura
3). No se deben colectar torundas con especímenes de la garganta o de la parte nasal
anterior, ya que se obtienen bajos niveles de recuperación y no pueden ser procesadas y
analizadas.
Figura 3. Recolección de Hisopado Nasofaríngeo
Fuente: http://www.antimicrobe.org/images-Monographs/b83_f1.jpg
Inmovilice e incline la cabeza del paciente. Se deben usar guantes desechables para
colectar los hisopos, y se deben cambiar entre cada hisopo.
Cuidadosamente inserte el hisopo nasofaríngeo hasta que la misma llegue hasta la parte
posterior de la fosa nasal. La punta de la torunda nasofaríngea a usarse durante la
colección debe ser hecha de poliéster (anteriormente conocida como Dacrón), rayón, o
nylon, con un mango suave y flexible hecho de aluminio o plástico. Varias compañías
distribuyen estas torundas. (Debido a posible inhibición en la reacción de PCR, no se
deben usar hisopos con punta de alginato de calcio o algodón.)
Una vez insertada, deje la torunda en el mismo sitio hasta unos 10 segundos. Este
procedimiento podría inducir tos y lagrimeo. Si el paciente muestra resistencia durante la
inserción de la torunda, remuévala e intente insertarla en la fosa nasal opuesta.
Remueva el hisopo suavemente.
Luego de la colección, coloque el hisopo nasofaríngeo en un envase que contenga medio
de transporte Regan-Lowe. De igual forma, puede colocar la torunda en un tubo estéril si
medio de transporte, si la misma será usada sólo para PCR.
Rotule el tubo y transpórtelo al laboratorio a 24 horas de tomada la muestra en una
nevera portátil con bolsas de hielo para mantener una temperatura de 4ºC. Figura 4.
Flujograma recolección de muestras de hisopado nasofaríngeo.
Figura 4. Recolección de muestras de hisopado nasofaríngeo
Muestra obtenida con
hisopo nasofaríngeo con
punta de dacrón, rayón o
nylon
Hisopado
nasofaríngeo
No
Repetir la toma con los
escobillones adecuados
Recuerde: el algodón y el
alginato de calcio inhiben la
PCR como también los ácidos
grasos presentes en el
algodón inhiben el
crecimiento de B. pertussis.
Si
Recuerde que el algodón y
el alginato de calcio inhiben
la PCR y los ácidos grasos
presentes en el algodón
inhiben el crecimiento de B.
pertussis.
CULTIVO
PCR
Colocar el hisopado dentro del medio
de transporte Regan Lowe, cortando
el exceso del aplicador con una tijera
Colocar el hisopado en un tubo estéril
tapa rosca.
Envío de
muestra
Envío de
muestra
Relección de aspirados nasofaríngeos (Usando el equipo de aspirado con jeringa)
1. Acueste al paciente de espaldas con el cuello extendido. Es muy importante que el
cuello esté extendido, ya que permite una mejor recolección de aspirado en la
nasofaringe. (Figura 5)
Figura 5. Recolección de aspirado nasofaríngeo con equipo de aspirado con jeringa
2. Retire la tapa de la jeringa (sin
descartarla) e inserte el catéter en la punta
de la jeringa. Se deben usar guantes
desechables durante la colección de
aspirados y deben ser cambiados y
desechados entre cada aspirado.
3. Lubrique generosamente el catéter
usando el gel lubricante incluido en el
equipo.
4. Pídale al paciente que sople su nariz
para remover cualquier exceso de
mucosidad de la cavidad nasal.
Fuente: http://www.cdc.gov/pertussis/clinical/diagnostic-testing/specimen-collection.html
5. Pídale al paciente que aguante su respiración (dependiendo de la edad del mismo y su
disponibilidad para hacerlo). Sin aplicar succión, inserte el catéter por la nariz hasta que el
mismo muestre resistencia a la nasofaringe, (aproximadamente la distancia desde la
punta de la nariz hasta la abertura externa del oído cuando se mide en línea recta), Figura
6. Si se está aspirando a un niño, puede ser un poco difícil que aguante su respiración.
Aunque es preferible que se aguante la respiración, no es un requisito.
6. Usando movimientos ligeros, rápidamente empuje y
aplique succión suavemente, dejando el catéter en su sitio
por unos segundos. Puede ayudar si usted coloca sus
dedos y “guía” el catéter mientras se inserta en el área
nasofaríngea. Si se utiliza una jeringa de 5 ml que sólo
contiene 3 ml de fluido, el volumen total debe ser utilizado
durante la colección.
7. En caso de que el niño esté llorando durante el
procedimiento, trate de sincronizar la aspiración con la
exhalación del llanto, ya que debe ayudar a prevenir que la
solución salina salga de la nasofaringe. El aspirado
recolectado debe ser de aproximadamente 2 ml en
volumen.
8. Cuidadosamente retire el catéter de la nariz.
9. Despegue el catéter y coloque la tapa de la jeringa.
Figura 6. Recolección aspirado
10. Rotule la jeringa y transporte el espécimen al laboratorio usando bolsas refrigerantes
para mantenerlo a una temperatura de 4-8 ºC. No congele el espécimen en la jeringa.
Durante las primeras 24 horas después de tomada la muestra se deben obtener
alícuotas del aspirado y se debe transferir el espécimen al medio de cultivo
seleccionado.
En la figura 7 se esquematiza el flujograma para la recolección de muestras de aspirado
nasofaríngeo.
Las recomendaciones para el momento de recolección de la muestra, recolección,
interferencias medicamentosas y los Recipientes y materiales indicados para la
recolección y conservación de la muestra se encuentran resumidas en la tablas 1,2 y 3.
Figura 7. Recolección de muestras de aspirado nasofaríngeo
Aspirado nasofaríngeo
Muestra obtenida con
un volumen mayor a
800 µl con evidencia de
células epiteliales
Repetir la toma
No
Si
CULTIVO
Siembre directamente
por agotamiento en
una placa de agar
Regan Lowe
PCR
Tome un escobillón
nasofaríngeo e imprégnelo
con el ANF introduciéndolo
hasta la mitad del medio de
transporte Regan Lowe
Envío de muestra
Seguir con las
condiciones de
cultivo
instrucciones
cultivo
Enviar el aspirado en un tubo estéril tapa
rosca sin la sonda con el volumen mínimo
de 800 µl en la jeringa donde se tomó el
aspirado o en la trampa de trake
debidamente sellado con papel parafilm o
vinipel
Envío de muestra
Tabla 1. Momentos para la recolección y conservación de la muestra
Ensayo
Cultivo
PCR
Serología (solo en
brotes)
Para procesar en
primeras 24
horas
Conservar a
temperatura
ambiente
Conservar a
temperatura
ambiente
Conservar a 4° C
Para procesar después de las 24
horas
Conservar a 4° C, pero es óptimo que la
muestre llegue el mismo día para tener
éxito en el aislamiento
Conservar a 4° C; empieza a disminuir la
sensibilidad después de 72 horas
Conservar a 4° C hasta ≥ 8 días.
Conservar a -20 a -80°C > 8 días.
Momento de la enfermedad
adecuado para la toma
En fase catarral hasta la
segunda semana de la fase
paroxística.
Desde inicio de síntomas y fase
paroxística
Primera muestra en fase
catarral, segunda muestra en
fase convaleciente o 15 días
después de la primera toma.
Tabla 2. Recomendaciones sobre ingesta de medicamentos y toma de muestra
Prueba
Recomendaciones con
medicamentos
Recomendaciones en la
toma de muestra
Cultivo
Tomar la muestra antes de
inicio del tratamiento o de la
profilaxis.
Tomar únicamente la
muestra con hisopos
nasofaríngeos y colocarlo
inmediatamente en medio
de transporte Regan Lowe
No tomar con hisopos de
algodón.
PCR
Tomar la muestra antes de
inicio de tratamiento o de
profilaxis; si se inició el
tratamiento se puede tomar
la muestra en máximo 3
días para realizar PCR en
tiempo real.
Tomar únicamente la
muestra con hisopos
nasofaríngeos
No tomar con hisopos de
algodón o alginato de
calcio.
Serología
No es crucial.
Tomar la muestra en
ayunas, si no es posible
tomar la muestra así haya
ingerido alimentos.
Al obtener la muestra es
necesario mezclar por
inversión varias veces y
dejar coagular de 30-45
minutos (máximo dos horas)
antes de centrifugar.
Transferir el suero a un
criotubo dentro de las 24
horas
Documentos para el envío de muestras



Para los aislamientos de Bordetella spp. diligenciar formato envío de cepas para
bacteriología general y anaeróbica FOR-R01.5030-005 de solicitud del análisis.
Formato de datos básicos del Sistema Nacional de Vigilancia en Salud Pública del
INS.
Ficha epidemiológica de tos ferina INS: 800.
Tabla 3. Recipientes y materiales indicados para la recolección y conservación de la
muestra
Muestra
Aspirado
Hisopado
Suero
Aislamiento
Recipiente primario
1. crioviales, tubo tapa rosca.
2. agregar 5 gotas del aspirado
en medio de transporte Regan
Lowe e insertar un hisopo hasta
la mitad del medio.
Tomar dos hisopados:
1.tubo tapa rosca estéril.
2.medio de transporte Regan
Lowe
Criovial
Medio de transporte Aimes con
carbón.
Para procesar en
menos de 24 horas
Para procesar después de las 24
horas
Conservar a
temperatura ambiente
Conservar a 4° C,
Conservar a
temperatura ambiente
Conservar a 4° C;
Conservar a 4° C
Conservar a 4° C hasta ≥ 8 días.
Conservar a -20 a -80°C > 8 días.
Temperatura
ambiente
Temperatura ambiente
Volumen de la muestra


Aspirado nasofaríngeo: mínimo 800 µl
Suero: 1 ml
Aptitud de la muestra




Se rechazarán muestras sin ficha epidemiológica.
Se rechazarán muestras tomadas con hisopos orofaríngeos, hisopos de algodón y
alginato de calcio.
Se rechazarán muestras de aspirado que no contengan contenido.
Se rechazarán muestras derramadas, mal identificadas o no marcadas.
Identificación de la muestra
La muestra debe venir identificada con el Nombre y apellido del paciente, numero de
documento de identidad y fecha de recolección de la muestra.
Bioseguridad
Los aislamientos y el procesamiento primario de la muestra (hidratar, resuspender,
alicuotar y extraer ADN) deben realizarse en una cabina de bioseguridad tipo II.
Elementos de protección personal (EPP)
El personal asistencial que recolecta la muestra y el da laboratorio que realiza el
procesamiento de la muestra debe utilizar elementos de protección personal como
guantes de late Guantes de látex, nitrilo o vinilo; bata; tapabocas, gafas.
Personal que recolecta la muestra
La recomendación de los perfiles de los profesionales la salud para la recolección de
muestras son los siguientes:
Aspirados: Enfermeros, médicos, auxiliar de enfermería.
Hisopado: Bacteriólogo, médicos, enfermeros, auxiliar de laboratorio y enfermería.
Sueros: Bacteriólogo, médicos, enfermeros, auxiliar de laboratorio y enfermería.
Ensayos de Laboratorio asociados a la vigilancia del evento
La Inmunofluorescencia directa (IFD) no está recomendada para el diagnóstico de tos
ferina según los lineamientos del Centro de Prevención y Control de Enfermedades y la
Organización Mundial de la Salud (OMS), está técnica es útil en la identificación de
aislamientos a partir de cultivos.
En la tabla 4 se resumen los ensayos recomendados para el diagnóstico de tos ferina y en
la tabla 5 los ensayos disponibles en plan obligatorio de salud (POS) de Colombia.
Figuras 8 y 9 se encuentran esquematizados el algoritmo diagnóstico del cultivo y para
PCR en tiempo real
Tabla 4. Ensayos de laboratorio recomendadas por la OMS para el diagnóstico de
tosferina
Prueba
Cultivo
Sensibilidad
12-60 %
Especificidad
100%
Principio
Utilidad
Aislamiento del microorganismo a partir de
muestra nasofaríngea en medio selectivo y
con agentes protectores que elimina radicales
libres, sulfuros e iones metálicos que pueda
contener la muestra y que puedan inhibir el
crecimiento del microorganismo, además
aporta aminoácidos y acido nicotínico
esenciales para el desarrollo de Bordetella
pertussis.
Amplificación de fragmentos de ácidos
nucleicos de las secuencias de inserción y el
gen de la subunidad 1 de la toxina pertussis
presentes en muestras nasofaríngeas:

IS481:B.pertussis,
B.holmesii,
B.bronshiseptica

hIS1001: B.holmesii.

pIS1001: B.parapertussis

ptxS1:
B.pertussis,
B.parapertussis
Específico, pero poco sensible necesario en
la vigilancia del microorganismo; no es
necesario hacer otra prueba diagnóstica si la
prueba es positiva, la sensibilidad se aumenta
si se procesa en los hospitales y clínicas o en
el Laboratorio de Salud Pública lo procesa en
menos de 24 horas si la muestra es
transportada en medio semisólido de agar
Regan Lowe.
Más rápida y sensible, que las técnicas
disponibles actualmente para el diagnóstico
de tos ferina; se puede obtener la especie
causante. Es necesario tener procesos
estandarizados para evitar la contaminación
de muestras.
PCR
70-99 %
86-100 %
ELISA
(Suero
pareado)
90-92 %
72-100 %
Detección de anticuerpos contra la toxina
pertussis isotipo IgG.
Indicación eficaz de títulos de anticuerpos
contra la toxina pertussis.
52-94 %
Detección de anticuerpos contra la toxina
pertussis isotipo IgG.
Tiene importancia en caracterización de
brotes. Útil para el diagnóstico post-antibiótico
y para quienes en los últimos 3 años no
hayan recibido dosis de DPT o DTaP.
ELISA
(mono
suero)
63-89 %
Tabla 5. Ensayos de laboratorio recomendadas por la OMS y que se encuentran
disponibles en Colombia
*Clasificación Única De Procedimientos en Salud (CUPS)
CUPS*
Técnica de laboratorio
Indicación
901202
Cultivo
906004
búsqueda de anticuerpos
IgG contra la antitoxina
pertúsica
PCR en tiempo real (IS481,
ptxS1,IS1001)
Se debe realizar desde el nivel 2 o IPS con
microbiología
Recomendado como diagnóstico únicamente con
suero pareado en población no vacunada o con más
de tres años de aplicada la última dosis
Más rápida, sensible para detección del agente
No se encuentra
Figura 8. Algoritmo de diagnóstico y resultados por el laboratorio para cultivo
Figura 9. Algoritmo de diagnóstico y resultados por el laboratorio para PCR en tiempo
real.
CONTROL DE CALIDAD
Programa de Evaluación Externa del Desempeño Directa (PEEDD)
Este programa se implementará para el ensayo PCR en tiempo real y/o convencional y se
realizará un envío anual a los Laboratorios de Salud Pública.
Programa de Evaluación Externa del Desempeño Indirecta (PEEDDI)
Trimestralmente se deberán enviar las bases de datos del diagnóstico de tos ferina al
Grupo de microbiología, a partir de estas bases se realizará un muestreo y se
seleccionaran unas muestras para realizar esta evaluación. Las muestras seleccionadas
serán solicitadas por el responsable del evento en el Grupo de Microbiología del INS.
Es importante aclarar que para esta estrategia los laboratorios que realizan diagnóstico de
tos ferina deben conservar las muestras nasofaríngeas realizadas durante el trimestre a
4-8°C en alícuotas de 500ul como mínimo, teniendo en cuenta las precauciones de
manipulación para evitar contaminación cruzada.
ESTRUCTURA Y FUNCIONES DE LA RED NACIONAL DE LABORATORIOS (RNL)
PARA EL EVENTO
Funciones del Laboratorio Nacional de Referencia (LNR)
Dentro de las funciones enmarcadas en la vigilancia por laboratorio del evento se
encuentran:



Apoyar al diagnóstico a los departamentos con menos de 30 muestras al año.
Realizar la caracterización y confirmación de los brotes de tos ferina, el número de
muestras dependerá el análisis epidemiológico.
Realizar el control de calidad directo (PEEDD) e indirecto (PEEDDI).
Otras funciones:
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Brindar asesoría técnica al Ministerio de Salud y Protección Social para la
formulación de políticas y lineamientos del evento.
Elaborar informes, guías y documentos técnicos científicos.
Definir las técnicas de confirmación en los laboratorios.
Difundir los lineamientos de remisión, transporte, conservación de las muestras y
de los aislamientos.
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Realizar la estandarización y/o validación de las metodologías diagnosticas para
su implementación en el país.
Capacitar a los profesionales de la Red de Laboratorios.
Participar en programas Interlaboratorios internacionales o de ensayos de aptitud.
Funciones del Laboratorio de salud pública departamental (LSPD).
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Adoptar las políticas nacionales de la RNL.
Monitorear la red de hospitales y clínicas que realicen diagnóstico de tos ferina y
verificar los estándares de calidad.
Participar en las evaluaciones externas del desempeño.
Mantener técnicas de diagnósticas actualizadas para la confirmación de tos ferina
de acuerdo a las recomendaciones nacionales.
Realizar evaluaciones de desempeño a los laboratorios de su red de laboratorios.
Confirmar los aislamientos de Bordetella spp y realizar el envío de cepas
confirmadas al laboratorio de referencia.
Capacitar a la red de laboratorios en la toma, diagnóstico, interpretación de las
pruebas y envío de muestras nasofaríngeas para diagnóstico de tos ferina.
Funciones de los laboratorios públicos y privados o referentes para el evento en el
nivel municipal y/o local según corresponda.
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Informar a los laboratorios de salud pública las técnicas de diagnóstico que
realizan en sus laboratorios para tos ferina.
Realizar el cultivo de tosferina en los laboratorios que tengan áreas microbiología
o bacteriología.
Participar en evaluaciones externas del desempeño para tos ferina.
Realizar la remisión de muestras con la documentación establecida para la
vigilancia del evento (ficha de notificación INS:800).
Informar a los epidemiólogos y al LSP de los casos confirmados por el laboratorio.
Figura 10. Flujograma de las muestras y aislamientos a través de la red de laboratorios
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
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hisopado nasofaríngeo. Disponible en: http://www.youtube.com/watch?v=PyjEf1rgVvo
Centro de Control de Enfermedades. Pertussis: Tomando un espécimen clínico de
aspirado nasofaríngeo. Disponible en: http://www.youtube.com/watch?v=7BxEHCrXj_M
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MICROBIOLOGY, 12, 274-88.
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chain reaction assays to detect Bordetella spp. Diagn Microbiol Infect Dis. 2008;
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World Heath Organization. (2014). Laboratory manual for the diagnosis of whooping cough
caused
by
Bordetella
pertussis/Bordetella
parapertussis.
Obtenido
de
http://whqlibdoc.who.int/hq/2004/WHO_IVB_04.14_eng.pdf