Diapositiva 1
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Cromatografía CROMATOGRAFIA: Método físico de separación en el que los componentes a separar se distribuyen en dos fases, una de las cuales constituye un lecho estacionario de gran desarrollo superficial (fase estacionaria) y la otra un fluido que pasa a través o a lo largo del lecho estacionario (fase móvil) Disolvente puro (eluyente) Extracto de hojas verdes en éter de petróleo pigmentos separados Cromatograma R volumen o tiempo Cromatograma Clasificación Columnas capilares fase estacionaria sólida soporte sólido recubierto fase estacionaria líquida con fase estacionaria líqui pared de la columna a b c capa porosa pared recubierta soporte recubierto Mecanismos interfase fase estacionaria sólida fase móvil fase estacionaria líquida fase móvil soluto . centros activos b) reparto a) adsorción fase móvil . + grupo funcional fase estacionaria sólida fase móvil fase estacionaria sólida + contraión c) intercambio iónico d) exclusión Separación cromatográfica Amovil ÅÆ Aestacionaria KA = [As]/[Am] K A > KB > KC A BC . A+B+C . ABC COLUMNA A B C DETECTOR Parámetros cromatográficos Respuesta del detector A w 1/2 9/10 h B 1/2 h w 0,1 w tM VM tR VR tiempo volumen tM: tiempo muerto (tiempo requerido para que una especie no retenida alcance el detector) VM: volumen muerto (volumen de fase móvil que se requiere para eluir una especie no retenida. tR: tiempo de retención (tiempo transcurrido desde la introducción de la muestra hasta que el componente alcance el detector) VR: volumen de retención (volumen de fase móvil que se requiere para eluir un soluto de la columna cromatográfica) h: altura de pico. w: anchura de pico. w1/2: anchura de pico a la semialtura. w0.1: anchura de pico a un décimo de la altura. Teoría de platos 1 Teoría de platos 2 Difusión por turbulencia A = λ dp λ = cte. (dimensiones, geometría, etc.) dp = diámetro medio de las partículas Difusión longitudinal perfil de concentraciones fase móvil a B = 2 γ DM γ = cte. (características del relleno) DM = coeficiente de difusión en la fase móvil b Resistencia a la transferencia de masa Fase móvil Equilibrio Fase estacionaria Fase móvil No equilibrio Fase estacionaria Ecuación de Van Deemter Resolución Factores extra-columna Introducción de la muestra: Rápida y capa de pequeño espesor (papel y capa fina: gota pequeña) Volumen muerto: el existente entre el punto de inyección y de detección, excepto el volumen ocupado por la fase estacionaria. Resumen: Deben minimizarse los espacios muertos y las dimensiones de los tubos. La muestra deberá aplicarse en una zona estrecha y deberá procurarse que penetre en la columna antes de mezclarse con el eluyente. Cromatografía y análisis químico ANALISIS CUALITATIVO: tR o VR Aplicaciones limitadas (Presencia o ausencia de componentes en mezclas que contengan un número limitado de especies de los que se conozca su identidad) ANALISIS CUANTITATIVO altura de pico: necesidad de controlar rigurosamente la temperatura, caudal de eluyente y velocidad de inyección de la muestra. área de pico: muy utilizado integradores electrónicos picos simétricos: altura x anchura a al semialtura planimetría gravimetría
