Relatório do Grupo de Trabalho de CROMOSOMA Y - (GEP

Protocolo AIM-Indels Multiplex
Reactivos:
- 10x Primer mix 46p:
Incluye todos los cebadores a 1μM
- 10x Primer mix Refuerzo
Incluye un 6plex refuerzo para MIDs 196 / 881 / 3854 / 772 / 3626 / 2719 a 1µM
-
QIAGEN Multiplex PCR kit
(http://www.qiagen.com/products/pcr/multiplexpcrsystem/multiplexpcr.aspx#)
PCR:
Volumen por muestra
2x Qiagen Multiplex
PCR Master Mix
5 µl
10x Primer mix 46p
1 µl
10x Primer mix Ref.
1 µl
H20
2 µl
↓
+ 1 µl DNA (0,5 – 10 ng/µl)
9 µl
10 µl Volumen final
Termociclado:
30x *
95 ºC
94 ºC
60 ºC
72 ºC
72 ºC
4 ºC
15 min
30 seg
90 seg
45 seg
60 min
∞
* Para ADN de buena calidad/cantidad reducir a 27/28 ciclos
Nota post-PCR: No existen requisitos específicos en esta fase que no sean el uso del Size Standard
Liz 500 y el Filter set G5 en el módulo de corrida. Se puede por ejemplo seguir el protocolo que se
utiliza regularmente en el laboratorio para los kits de STRs de AB como el Identifiler.