reactivo neutralizante anti-ab

REACTIVO NEUTRALIZANTE ANTI-AB
Per uso diagnostico In Vitro
Solo para exportación. No comercializable en Estados Unidos.
Codice Prodotto: 504056
Complessità CLIA: elevata
Finalità d’uso
Este producto está preparado para eliminar o reducir el marcaje producido por anticuerpos anti-AB en ensayos de
inmunofluorescencia indirecta al utilizar sustratos de tejidos de mono de INOVA Diagnostics.
Sumario y Explicación de la prueba
Algunos tejidos de mono (especialmente esófago, glándula salivar y páncreas) expresan antígenos AB y la unión de
anticuerpos anti-AB puede confundirse con una reacción real de auto-anticuerpos. En el esófago, el patrón de tinción de
AB puede ser similar al patrón de pénfigo, aunque los anticuerpos de grupo sanguíneo marcarán también los capilares
de la musculatura del esófago. En la glándula salivar se observa una tinción en conductos y capilares. En el páncreas
se observa una tinción en las células de los acinos pancreáticos y en los capilares. La utilización de este reactivo
neutralizante indicará si los patrones de tinción observados son debidos a anticuerpos anti-AB1.
Reactivos
1. El reactivo neutralizante anti-AB contiene una mezcla de antígenos AB solubles. Contiene azida sódica 0,099% y
meta-arsenito sódico 0,02% como conservantes.
Advertencias/Precauciones
Este producto contiene azida sódica 0,099% y meta-arsenito sódico 0,02% como conservantes.
El producto contiene azida sódica como conservante y debe ser manipulado con precaución, evitando su ingestión y el
contacto directo con la piel y mucosas. Si se diera dicho contacto, lavar con abundante agua y consultar al médico.
Pueden formarse azidas explosivas en contacto con el cobre y plomo de los desagües, al eliminar el reactivo dejar
correr abundantes cantidades de agua para evitar la formación de dichos compuestos.
Este producto debe ser utilizado únicamente por personas correctamente entrenadas para el fin indicado. Se
recomienda seguir el procedimiento descrito. Deben establecerse procedimientos adecuados para la manipulación y
eliminación de todas las muestras potencialmente infecciosas ensayadas con este producto, y únicamente personal con
entrenamiento adecuado debe llevar a cabo dichos procedimientos.
Condiciones de almacenamiento
El producto ha de conservarse a 2-8ºC y es estable hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta.
Procedimiento
Materiales Suministrados
1.
2.
1 x folleto de instrucciones
1 botella 5mL Reactivo neutralizante anti-AB
Material necesario no incluido
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Portaobjetos de sustrato
Tampón fosfato (PBS)
Cámara húmeda para los pasos de incubación
Conjugado IgG (H&L) FITC, adsorbido de mono
Medio de montaje y cubreobjetos
Microscopio de fluorescencia con un filtro de excitación de 495nm y un filtro barrera de 515nm
Procedimiento del test
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
Retire los portaobjetos del frigorífico y equilibre a temperatura ambiente.
Diluya dos alícuotas del suero del paciente, una en PBS y otra en el reactivo neutralizante AB.
Saque el portaobjetos de la bolsa y colóquelo en la cámara húmeda.
Añada 50μL del suero del paciente diluido en PBS y 50μL del suero del paciente diluido en reactivo neutralizante
AB en los pocillos correspondientes.
Incube durante 30 minutos a temperatura ambiente.
Lave los portaobjetos con un chorro de PBS. Lave los portaobjetos durante 5-10 minutos por inmersión en PBS
y con agitación.
Seque alrededor de cada pocillo y vuelva a colocar el portaobjetos en la cámara húmeda. Añada
inmediatamente 50µL de conjugado IgG (H&L) FITC, adsorbido de mono. No deje los pocillos sin cubrir durante
más de 15 segundos.
Incube los portaobjetos durante 30 minutos en la oscuridad.
Lave los portaobjetos con un chorro de PBS. Lave los portaobjetos durante 5-10 minutos por inmersión en PBS
y con agitación.
Seque alrededor de los pocillos, añada medio de montaje en cada pocillo y cubra con un cubreobjetos.
Observe los portaobjetos utilizando un microscopio de fluorescencia.
1
Resultados
La eliminación o reducción de la fluorescencia cuando una muestra se diluye en reactivo neutralizante AB, indica la
presencia de anticuerpos anti-AB en la misma, que se han unido a los antígenos AB presentes en el sustrato.
Limitaciones del Procedimiento
La fuente de luz, filtros y ópticas de marcas distintas de microscopios de fluorescencia influyen en la sensibilidad del
ensayo. La funcionalidad del microscopio está influida de modo significativo por su correcto mantenimiento, sobre todo
por el centrado de la lámpara de vapor de mercurio y por el cambio de la lámpara tras el periodo de tiempo
recomendado. No puede establecerse un diagnóstico basado únicamente en los resultados de este test. Deben tenerse
en cuenta también el resto de factores, como la historia clínica, otros resultados serológicos o biopsias.
Resumen del procedimiento
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
Diluya muestras y controles en PBS y reactivo neutralizante.
Añada control y muestras a los pocillos e incube durante 30 minutos a temperatura ambiente.
Lave los portaobjetos en PBS durante 5-10 minutos.
Añada conjugado IgG (H&L) FITC, adsorbido de mono en cada pocillo e incube durante 30 minutos en la
oscuridad.
Lave los portaobjetos en PBS durante 5-10 minutos.
Monte los portaobjetos.
Observe con un microscopio de fluorescencia.
Referencias
1.
Bradwell A. R. et al (2008). Atlas of Tissue Autoantibodies. Publ. The Binding Site Ltd., Birmingham UK.
Fabricante:
INOVA Diagnostics, Inc.
9900 Old Grove Road
San Diego, CA 92131
United States of America
Technical Service (U.S. & Canada Only) :
877-829-4745
Technical Service (Outside the U.S.) : 00+ 1 858-805-7950
[email protected]
Representante Autorizado:
Medical Technology Promedt Consulting GmbH
Altenhofstrasse 80
D-66386 St. Ingbert, Germany
Tel.: +49-6894-581020
Fax.: +49-6894-581021
www.mt-procons.com
624056ESP
March 2011
Revision 0
2