•Guerrero Merino Lizbeth •López Uribe Ángel René •Ramos Mora

•Guerrero
Merino Lizbeth
•López
Uribe Ángel René
•Ramos
Mora Luis Alberto
•Ruiz
Gayosso Ana Karen
Clonación
Se refiere al proceso de aislar una secuencia de ADN de
interés, insertarlo en un plásmido o vector de clonación y
obtener múltiples copias de ella en un organismo
(generalmente procariota) por acción de la DNA
polimerasa.
Vector de clonación
 Molécula
pequeña de ADN que puede
replicarse de manera autónoma en un
huésped (células bacterianas o de
levaduras).
 Los vectores se utilizan para clonación
porque pueden seguir su desarrollo
normal a pesar de que secuencias
adicionales de ADN sean incorporadas en
su material genético.
3 Características importantes
La mayoría de los plásmidos naturales no cumplen todas
estas condiciones entonces…
Construcción de plásmidos
artificiales o VECTORES DE
CLONACIÓN
1.Combinar en una misma molécula
diversos rasgos útiles de los plásmidos
naturales como:
 La presencia en el plásmido del gen de
resistencia permite seleccionar las
bacterias que portan estos plásmidos
II. Promotores fuertes
 Muchos
genes se expresan sólo bajo
ciertas circunstancias metabólicas y/o en
tejidos específicos
 Sustituir el promotor del donador por
uno que asegure su expresión
 Pueden ser inducibles bajo ciertas
condiciones de crecimiento
pET-24 cumple con las características de un
vector de clonación
EXISTEN DIFERENTES
VECTORES
DEPENDIENDO DE LA
LONGITUD DEL GEN DE
INTERÉS POR CLONAR
Ejemplos
-Plásmidos
-Fago lambda
-Cósmidos
-Fásmidos (fagémidos)
-Cromosomas Artificiales:
Bacterias (BAC)
Levaduras (YAC)
Plásmidos
Moléculas de ADN circular (generalmente bacteriano)
separadas del cromosoma principal y con capacidad de
replicación independiente de la bacteria.
Tamaño de inserto: 20 kb
Fago Lambda
Es un virus bacteriófago,
cuya región central del
genoma es prescindible y se
puede sustituir por un
inserto de ADN.
Tamaño de inserto 1015 kb.
Se forma un multímero que
luego se utiliza para rellenar
cápsides del fago mediante
empaquetamiento in vitro.
Cósmidos
Son vectores híbridos entre el
fago H y un plásmido. Se pueden
replicar en una bacteria o
empaquetarse como un fago.
Tamaño de inserto hasta 45
kb.
Se remueve casi todo el ADN del
H y se deja sólo las secuencias
que actúan como señales de
empaquetamiento (cos). Casi
todo se rellena con el inserto que
queremos clonar.
Replicación a modo de plásmido
Otros vectores
Fásmidos: Son vectores que combinan las características de
un fago filamentoso y un plásmido y contienen tanto el origen
de replicación del fago como del plásmido.
Cromosomas artificiales: Se desarrollaron con el objetivo
de clonar grandes segmentos de cromosomas eucarióticos.
Vector recombinante
 Resulta
de la inserción del gen de interés
(transgen) en el vector de clonación.
Como insertar el gen de interés en
el vector de clonación
 Fragmentación
del DNA vector
 DNA de interés (producto de PCR o de
enzimas de restricción)
 Ligación
Vector recombinante
Vector en la práctica

Vector recombinante que contiene gen de la βlactamasa (transgene)
Producción de
Vector recombinante
Transformación
en célula
Clonación