Nombre: Oscar Alessandro Reyes Lico Carnet: 09565 Fecha: 11/02/2009 Sección: 82 Laboratorio de Biología Pasaporte # 3: ANÁLISIS QUÍMICO DE LOS COMPONENTES DEL PROTOPLASMA • Introducción: Este reporte trata sobre algunas pruebas que se utilizan para el análisis químico de los componentes del protoplasma. Se hablará sobre los experimentos que se hicieron en el laboratorio, y comprobaremos dichas muestras. Hay algunas pruebas que utilizan científicos y ciertas personas para poder observar si ciertos componentes o muestras contienen o no, sustancias que a ellos les interesan como pueden ser las proteínas, grasas, almidón, etc. Para cada sustancia hay una prueba y es lo que miraremos a continuación. Algunas pruebas son: la prueba de Biuret en la cual se pueden observar mejor las proteínas; la prueba de Sudán III, en la cual se observan las grasas; la prueba de Benedict, que se pueden observar los azúcares; la prueba de Lugol que se puede observar el almidón; la prueba de solubilidad que sirve para ver si ciertas sustancias son solubles con otras. Estas pruebas son las que mencionaremos en este reporte. Hay muestras que no mencionaremos en este reporte pero si existen y se aplican, como podemos mencionar: la prueba de ninhidrina, prueba de coagulación, prueba de sulfato de amonio, prueba xantoprotica, prueba de los grupos SH, prueba de sakaguchi, prueba de Hopkins-Cole, Prueba de Millón, prueba de Molish, prueba de Barfoed, prueba de Bial o de Orcinol-HCI, y otras más. (http://webdelprofesor.ula.ve/farmacia/gmendez/manuales%20PDF/EXPERIMENT O%204%20IDENT%20CARB%2006-05.pdf) • Objetivos: o Conocer las distintas técnicas que hay para el análisis químico del protoplasma y saber para qué sirve cada una. o Verificar que funcionen las pruebas que hay para el análisis químico del protoplasma (prueba de Biuret, prueba de Solubilidad, prueba de Sudán III, prueba de Benedict y prueba de Lugol). o Conocer cómo actúan ciertas sustancias cuando están en contacto con otras. o Poder observar cómo se disuelve la clorofila de una planta y si esa tiene almidón. o Poder observar donde se encuentra el almidón y las grasas de una papa, un güisquil y una cebolla, y cuáles son las diferencias de cada uno. • Desarrollo: El primer grupo hizo la prueba de Biuret, que es la prueba para observar las proteínas. En esta prueba este grupo utilizó un huevo, el cual le sirvió para utilizar la albúmina que es la proteína que se encuentra en la clara de huevo. Este grupo agrego en su tubo de ensayo 1ml. de clara de huevo y 1 ml. de agua de tubo. Después de hacer esto agregaron 5 gotas de solución Biuret y agitaron el tubo. El siguiente grupo fue el nuestro, y se hizo la prueba de Solubilidad y la prueba de Sudán III, que es la prueba para observar los lípidos. Para la prueba de solubilidad se necesitó Agua destilada, Alcohol (Etanol), Cloroformo, Carbonato de sodio al 5% y Ácido clorhídrico al 1%. Después de tener estas 5 sustancias se añadió 3ml. de cada una en cada tubo y se indicó cada tubo, al concluir se colocó 5 gotas de aceite vegetal a cada tubo y se agitó. En la siguiente prueba se añadió un poco de Sudán III al tubo de ensayo con el agua destilada del experimento anterior y se agitó. El tercer grupo hizo la prueba de Benedict y la prueba de Lugol. La prueba de Benedict nos sirve para observar los azúcares y la prueba de lugol nos sirve para observar los almidones. En la prueba de Benedict este grupo necesitó dos tubos de ensayo, en un tubo se agregó 3ml. de glucosa al 5% y en el otro tubo, un poco de agua destilada. Al concluir se le agregó 5 gotas de solución Benedict a cada tubo y se pusieron a calentar en un baño de agua de 3 a 5 minutos. El cuarto grupo hizo el análisis de una planta para observar la presencia de almidón. Este grupo utilizó una hoja de Coleus sp., la cual se puso en un vaso con agua a hervir durante 3 minutos. Pasados los 3 minutos, se sacó la hoja y se puso calentar con 10 ml. de etanol en un baño de María hasta que se disolviera la clorofila. Después se sacó la hoja y se puso en una caja de Petri, se lavó suavemente con agua de chorro y se le puso unas gotas de lugol sobre la hoja. El último grupo le tocó ubicar las sustancias celulares. Para realizar esta práctica se necesitó un güisquil, una papa y una cebolla. Primero se quitó una delgada porción de epidermis del güisquil, se puso con una gota de agua en el portaobjetos, se añadió una gota de lugol, se puso el cubreobjetos y se observó en el microscopio. Luego se repitió el procedimiento, solamente que ahora con una papa, una cebolla y el güisquil, y en vez de lugol se utilizó Sudán III. • Observaciones y Resultados: Técnicas de Análisis químico del protoplasma • Grupo # 1: Proteínas Prueba de Biuret: Lo que se observó en el tubo de ensayo fue un líquido de color violeta, lo cual confirma que la solución reaccionó con la albúmina y por lo tanto la prueba de Biuret es la indicada para observar las proteínas. • Grupo # 2: Grasas Prueba de Solubilidad: En esta prueba se pudo observar que las únicas sustancias que son solubles al aceite son en el Carbonato de Sodio al 5% que tomó un aspecto como de espuma de color blanco y el Ácido Clorhídrico al 1% que tomó un color amarillo claro. En las demás sustancias el aceite no se disuelve, solo al agitarlo se vuelven un montón de burbujas pero al estabilizarse queda una burbuja de aceite rodeada de la sustancia. Prueba de Sudán III: En esta prueba se observó que la mezcla de Sudán III con el agua destilada y aceite vegetal de la prueba anterior, las burbujas de aceite tomaron un color rojo fuerte y el agua un rojo pálido, lo cual comprueba que la prueba Sudán III es la indicada para observar las grasas. • Grupo # 3: Azúcares Prueba de Benedict: En esta prueba se observó que al poner a calentar ambos tubos solo en el tubo donde estaba la glucosa hubo efecto, se puso de color amarillo claro, y en el tubo donde estaba el agua destilada no paso nada, lo cual comprueba que la prueba de Benedict es la indicada para observar azúcares. Aplicación al análisis de productos de seres vivos • Grupo # 4: Hojas Análisis de las hojas de una planta para la presencia de almidón: En esta prueba se observó que al calentar la hoja con etanol en el baño de María la clorofila se disolvió, ya que la hoja se puso un poco transparente. Al agregar unas gotas de lugol sobre la hoja, ésta iba cambiando de color y se podía ver que partes de la hoja tenían almidón, se pudo concluir que el almidón se encuentra donde hay clorofila y que la prueba de lugol es la indicada para observar el almidón. • Grupo # 6: Alimentos Ubicación de sustancias celulares: En el primer experimento se pudo observar que en el güisquil había almidón pero no se lograba ver con nitidez, se vio mejor en la papa, ya que en ella se lograban ver los empaquetados de almidón. En el siguiente experimento a la papa, al güisquil y la cebolla se agregó Sudán III y se logró ver las grasas en la membrana celular, nuclear, en la mitocondria, citoplasma y otros. • Interpretación de Resultados y Discusión: La prueba de Biuret según la página que encontré en internet: (http://webdelprofesor.ula.ve/farmacia/gmendez/manuales%20PDF/EXPERIMENT O%204%20IDENT%20CARB%2006-05.pdf) “es una prueba general para polipéptidos y proteínas ya que sirve para reconocer las uniones peptidicas”. En esta página nos explica que “la positividad se manifiesta por la aparición de una coloración violeta”. Lo que tengo duda, y lo busqué pero no lo encontré, es por qué la sustancia agarra una coloración violeta, por qué ciertas sustancias al combinarlas con otras agarran ciertos colores y no todos son iguales. Esta es una duda que tal vez no se sepa o que tal vez sea por las sustancias que tienen las distintas pruebas. Otra cosa que me quede con inquietud fue sobre la prueba de solubilidad, ya que algunas sustancias se disolvieron pero hubo unas que “medio” se disolvieron ya que tomaron un color, pero quedaron burbujas de aceite, este fue el caso del HCL. En el caso del Carbonato de Sodio también me quedo un poco de inquietud ya que se volvió espuma y la cantidad disminuyó. El grupo 4 analizó una hoja de una planta para la presencia de almidón. Lo que se observó fue que la hoja no se puso en todas sus partes transparentes, y es lo que me dio curiosidad, porque con las gotas de lugol que le agregaron se podían ver que partes de la hoja tenían clorofila; yo pensaba que la hoja en todas sus partes tenía clorofila, fue por eso que me creo confusión. • Conclusiones: o o o o o o Cada sustancia mezclada con alguna solución de una prueba da como resultado la observación clara de ciertas sustancias. Cada solución mezclada con una sustancia da como resultado un color diferente para cada una. Los empaquetados de almidón son más visibles en la papa que en el güisquil, y una de las razones es que a la papa no le pega directamente el sol por eso el almidón se queda mayormente en la epidermis de la papa. Cuando una solución está contaminada el experimento no sirve, como fue el caso del grupo 1, que el biuret estaba contaminado, por eso no les salió. El almidón de una hoja se encuentra mayormente donde hay clorofila. Cuando una solución se mezcla con una sustancia la cual no es la correcta para la solución, a la sustancia no le pasa nada. • Bibliografía: Villee, C. 1993. Biología. 7ma edición. McGRAW-HILL INTERAMERICANA, México, D.F. 875 pp. Experimento 4. Webdelprofesor. http://webdelprofesor.ula.ve/farmacia/gmendez/manuales%20PDF/EXPERIMENT O%204%20IDENT%20CARB%2006-05.pdf Villee, C., Solomon, E., Martin, C., Martin D., Berg, L. y Davis, P. 1992. Biología. 2da edición. McGRAW-HILL INTERAMERICANA, México, D.F. 1404 pp.