PRÁCTICAS DE FISIOLOGÍA DE LA SANGRE Y SISTEMA INMUNE

PRÁCTICAS DE FISIOLOGÍA DE LA SANGRE Y SISTEMA INMUNE
3.
Recuento celular sanguíneo
Para realizar un recuento celular sanguíneo:
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Nos colocamos los guantes.
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Cogemos dos eppendorfs.
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Para el recuento leucocitario, en uno de ellos ponemos 100μl de líquido de Türck (que
contiene ácido acético que hará explotar los eritrocitos -no nos interesan para este recuentoy azul de metileno, que es básico y tiñe ácido -los núcleos).
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Para el recuento eritrocitario, ponemos 1000μl de PBS en el segundo eppendorf.
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Procedemos a obtener sangre capilar.
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Desinfectamos el dedo (índice o anular) con una torunda o un poco de algodón empapado en
alcohol de 70º y dejamos que se seque.
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Pinchamos con una lanceta en el lateral de la porción distal del dedo y lo apretamos para
aumentar la presión y que salga más cantidad de sangre.
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Con una pipeta de laboratorio, previamente calibrada,
cogeremos 5μl de sangre para cada eppendorf, utilizando una
punta limpia para cada uno. Para que se mezcle bien la sangre
con el líquido, con la pipeta aspiraremos el contenido y lo
soltaremos varias veces. Obtendremos una dilución 1/20 en el
eppendorf que contiene el líquido de Türck y una dilución
1/200 en el que contiene el PBS.
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Para el recuento leucocitario, necesitamos una Cámara de Neubauer que, tras su llenado,
colocaremos bajo el microscopio.
Con la pipeta, iremos echando gotitas de la dilución preparada con líquido de Türck en el
borde de un cubreobjetos que habremos colocado, en la porción donde se encuentra el
retículo. La cámara se llenará por capilaridad.
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El retículo del que hablamos, es una cuadrícula de recuento que
presenta la cámara, que consta de 9 cuadrados grandes. Los 4
cuadrados que encontramos en las esquinas están divididos a su vez en
16. Éstos son los que se utilizan para el recuento leucocitario. El
cuadrado central se utiliza para el eritrocitario.
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La fórmula que utilizamos es la siguiente:
Nº de leucocitos contados x 20 (factor de dilución) x 10 (volumen líquido que hay entre el
portaobjetos y el cubreobjetos).
Durante la práctica no da tiempo a que todo el
mundo realice su propio recuento leucocitario.
Observando la cámara de Neubauer a través del
microscopio, con la muestra de una compañera de
clase, contamos 33 leucocitos x 20 x 10= 6600
leucocitos (dentro de los parámetros normales).
En la foto vemos 3 leucocitos -señalados por
flechas- dentro de uno de los cuadros.
(Repasadas en azul las líneas de la cuadrícula para
que se vean mejor).