Guía de Laboratorio: Hematología - Recuento Celular y Hemostasia

EDTA
Es la sal Na2, K2 o K3 del EDTA.
Respeta la morfología eritrocitaria y
leucocitaria. (Hasta 2 horas).
Conserva las células hasta por 24
horas a 4 ºC.
Inhibe la aglutinación plaquetaria.
La concentración recomendada de
EDTA es de 1,5 mg/mL. de sangre.
RESPETAR EL VOLUMEN
CITRATO
DE SODIO
Impide que el calcio se ionice.
De elección para pruebas de
hemostasia, donde se emplea en
proporción de 1: 9 (0,5 mL de ACG
para 4,5 mL de sangre total).
La muestra se debe centrifugar lo
antes posible y se debe procesar
antes de las 4 horas de la extracción.
2
Perfil que agrupa una serie de parámetros que evalúan la integridad
cualitativa y cuantitativa de los elementos celulares presentes en la sangre.
RECUENTO
LEUCOCITARIO
RECUENTO DE
GLÓBULOS
ROJOS
HEMOGLOBINA
HEMATOCRITO
Análisis cuantitativo y cualitativo de los parámetros
relacionados con los leucocitos o glóbulos blancos en
la sangre periférica.
RECUENTO
TOTAL DE
LEUCOCITOS
RECUENTO
DIFERENCIAL DE
LEUCOCITOS
RECUENTO TOTAL DE LEUCOCITOS
PRINCIPIO
La sangre anticoagulada se deposita en un líquido que
permite evidenciar los leucocitos, manteniéndolos visibles,
mientras que los eritrocitos son hemolizados.
EQUIPOS, MATERIALES
Y REACTIVOS
- Microscopio.
- Cámara de Neubauer.
- Pipeta de Thoma.
- Solución de Turk al 1%.
- Contador manual.
PROCEDIMIENTO
1. Se aspira la sangre con la pipeta de Thoma
hasta la marca de 0,5 y se limpia la punta.
2. Con la misma pipeta cargar hasta la marca de
101 la sol. de Turk (sin burbujas).
3. Tapar ambos extremos y homogenizar por 2’-3’.
4. Montar la laminilla de vidrio en la cámara para
recuento que debe estar limpia y seca.
5. Agitar la pipeta, descartar las cuatro primeras
gotas y luego colocar una gota en la cámara.
6. Deje reposar por 3 minutos.
7. Con objetivo de 10x contar en 4 cuadrados
grandes angulares.
RECUENTO TOTAL DE LEUCOCITOS
Además de los leucocitos contados dentro de cada uno
de los cuadrantes, se deben contar todos los leucocitos
que se encuentren adheridos en la línea horizontal superior
y vertical exterior, o de lo contrario, todos los leucocitos,
adheridos a la línea horizontal inferior y vertical interior.
FÓRMULA
VALORES
REFERENCIALES
5 000 - 10 000
Leucocitos/mm3
PROCEDIMIENTO
1. Se examina la lámina a pequeño aumento para comprobar si los
elementos celulares están bien distribuidos.
2. Si es favorable se examina con el objetivo de inmersión. La parte
ideal para visualizar células para la fórmula leucocitaria es en la
parte final del cuerpo y comienzos de la cola, recorriendo la lámina
hasta contar 100 leucocitos (agranulocitos y granulocitos).
3. A medida que se va contando, se va anotando el número de
cada una de las clases de glóbulos blancos observados.
RECUENTO DE GLÓBULOS ROJOS
Corresponde a la cantidad de eritrocitos presentes en
sangre periférica por unidad de volumen de sangre,
que usualmente es el microlitro (ul.).
RECUENTO MANUAL
RECUENTO ELECTRÓNICO
• Procedimiento tedioso.
• Alto consumo de tiempo.
• Coeficiente de variación
muy amplio (10-22%).
• Procedimiento rápido y
simple.
• Coeficiente de variación
inferior al 1%.
RECUENTO DE GLÓBULOS ROJOS
PRINCIPIO: La sangre se diluye en un líquido que permite observar
claramente los hematíes, luego esta dilución se coloca en una cámara
de Neubauer y se cuentan en el microscopio a un objetivo de 40x.
EQUIPOS, MATERIALES
Y REACTIVOS
- Microscopio.
- Cámara de Neubauer.
- Pipeta de Thoma.
- Diluyente de Hayem.
- Contador manual.
PROCEDIMIENTO
1. Se aspira la sangre con la pipeta de Thoma
hasta la marca de 0,5 y se limpia la punta.
2. Con la misma pipeta cargar hasta la marca de
101 el diluyente de Hayem.
3. Tapar ambos extremos y homogenizar por 2’-3’.
4. Agitar la pipeta, descartar las cuatro primeras
gotas y luego colocar una gota en la cámara.
5. Deje reposar por 3 minutos.
6. Con el objetivo de 40x contar sobre el
cuadrado grande central de la cámara (sólo en 5
cuadrados pequeños).
RECUENTO DE GLÓBULOS ROJOS
Se debe contar sobre el cuadrado grande central de
la cámara sólo en 5 cuadrados pequeños (ABCD y E):
uno central y cuatro angulares (80 cuadritos en total),
se incluyen las células que cubren o tocan por dentro
o por fuera las líneas limitantes superior e izquierda en
el cuadrado pequeño del recuento y no se consideran
los correspondientes a los límites inferior y derecho.
FÓRMULA
VALORES
REFERENCIALES
Hombres: 4.5 – 5.5 mill./mm3.
Mujeres: 4 – 5 mill./mm3.
RN: 5 – 6 mill./mm3.
Representa la fracción de volumen eritrocitario y
corresponde al volumen ocupado por los eritrocitos en
relación con el volumen total de sangre, que es
expresado en porcentaje o una fracción decimal de ésta.
HEMATOCRITO ELECTRÓNICO
HEMATOCRITO MANUAL
• Macrométodo.
• Microhematocrito.
• Medida
directa
independiente.
e
• Cálculo matemático que
relaciona el recuento de
eritrocitos y el VCM.
• Es 2% a 3% menor que el
hematocrito manual.
EQUIPOS Y
MATERIALES
- Capilares rojos y azules
(75mm x 1,5 mm).
- Plastilina.
- Microcentrífuga.
PROCEDIMIENTO
1.Tomar la muestra en capilares rojos heparinizados
directamente del pulpejo del dedo, o utilizar
capilares azules sin heparina para sangre venosa
con EDTA. Debe llenarse aprox. 70%-80% del capilar.
2.Ocluir (tapar) un extremo del capilar con plastilina.
3.Colocar el capilar sobre la plataforma del cabezal
de la microcentrífuga, con el extremo ocluido
adherido al reborde externo de la plataforma.
4.Centrifugar por 5 minutos entre 10 000- 12 000 rpm.
VALORES
REFERENCIALES
Hombres: 40% - 50%
Mujeres: 38% - 44%
Recién nacidos: 50% - 58%
HEMOGLOBINA
Es la proteína transportadora de oxígeno. Representa hasta el
32% de la masa total del eritrocito. Es el mejor índice para medir
la capacidad transportadora de gases, tanto para oxígeno (O2)
como para dióxido de carbono (CO2) por parte del eritrocito.
MÉTODO
MANUAL
MÉTODO
ELECTRÓNICO
HEMOGLOBINA
Principio: La sangre se diluye en líquido de Drabkin, el cual
hemoliza y convierte la hemoglobina en cianometahemoglobina
(cianuro de hemoglobina). Esta solución se lee por medio de un
espectrofotómetro. Su grado de absorbancia es proporcional a
la cantidad de hemoglobina que contenga la sangre.
EQUIPOS, MATERIALES
Y REACTIVOS
- Hemoglobinómetro.
- Pipeta de Sahli.
- Tubos de ensayo.
- Líquido de Drabkin.
PROCEDIMIENTO
1.En un tubo de 13x100 colocar exactamente 5 mL. de
reactivo de Drabkin.
2.La sangre que puede utilizarse es de punción del dedo
(sangre capilar) o de sangre venosa recién extraída.
3.Con una pipeta automática o pipeta de Sahli se toma
exactamente 0,02 mL (20 ul.) de sangre total, luego
limpiar la punta de la pipeta y se vierte en el tubo que
contiene reactivo de Drabkin y se mezcla.
4.Dejar en reposo entre 5 a 15 minutos.
5.Leer la absorbancia con filtro verde a 540 nm. llevando
a cero el equipo con agua destilada/Drabkin.
HEMOGLOBINA
En las soluciones de referencia comerciales casi siempre indica la
concentración en miligramos por 100 mL (generalmente en mg%).
Se preparan diluciones con líquido de Drabkin de tal manera que los
patrones contengan concentraciones de 60 mg, 40 mg, 20 mg de CNHi.
Leer los tubos en absorbancia con filtro verde a 540 nm, llevando el
fotómetro a cero con el líquido de Drabkin.
Para calcular la concentración de
hemoglobina en cada tubo, realizar
el siguiente cálculo:
Hb en g/100 mL. = P x D
1000
P: [ ] del patrón
D: Dil. de la
muestra de sangre que es 251 veces.
60 mg. :15 g/100mL.
40 mg. : 10 g/100 mL.
20 mg. : 5 g/100 mL.
VALORES
REFERENCIALES
Niños al nacer: 13,6 - 19,6 g/dL.
Niños de 1 año: 11,3 - 13,0 g/dL.
Mujeres: 11,5 - 16,5 g/dL.
Hombres: 14,0 - 18,0 g/dL.
Conjunto de pruebas que
exploran la participación de
todos los componentes de la
hemostasia: endotelio vascular,
actividad plaquetaria, factores
plasmáticos y fibrinolíticos.
TP
RECUENTO DE
PLAQUETAS
TPTA
FIBRINÓGENO
TIEMPO DE
COAGULAC.
Y DE SANGRÍA
Explora la vía extrínseca de la coagulación. Puede prolongarse por:
anticoagulantes orales (cumarínicos), déficit de vitamina K, enfermedad
hepática, CID, disfibrinogenemia y déficit aislado de FVII (también es útil
para la sospecha de los déficits de FII, FV, FX). Muy utilizada con fines de
screening, diagnóstico y control del tratamiento con anticoagulantes orales.
ÍNDICE DE QUICK (%)
Es otra forma de expresar el
tiempo de protrombina, en
tanto
por
ciento
(%)
respecto a un plasma
control. Los valores normales
oscilan en torno a un 70120%.
RATIO INTERNACIONAL
NORMATIZADO (INR)
Indica la relación entre un
lote particular de factor tisular
con una muestra normalizada
a nivel internacional. El rango
normal para una persona
sana es de 0,8 a 1,2.
VALORES
REFERENCIALES
10-14 segundos
Principio: Mide el tiempo en que tarda en coagular una muestra de
plasma, desprovisto de plaquetas y anticoagulado con citrato sódico,
al ponerlo en contacto con una suspensión de tromboplastina
cálcica (sustituto de la tromboplastina tisular fisiológica).
1. Agregar en un tubo la cantidad a trabajar de reactivo para
MATERIALES Y
TP e incubar por 5-10 minutos.
REACTIVOS
2. En otro tubo añadir 50 uL. de plasma del paciente e
incubar por 5 minutos.
- Plasma citratado.
3. Agregar 100 uL. del reactivo incubado al tubo que
- Reactivo para TP.
contiene el plasma del paciente y simultáneamente disparar
- Pipetas.
el cronómetro. Agitar levemente para homogenizar y dejar
- Tubos de ensayo.
incubando por aprox. 8-10 segundos.
- Baño María.
4. Remover el tubo del baño maría e inclinarlo para verificar
- Cronómetro.
la formación del coágulo.
5. De no haberse formado, se sigue incubando el tubo y se
repite el punto anterior cada 4 seg. hasta observar la
PROCEDIMIENTO
coagulación y se para y anota el tiempo exacto.
MATERIALES Y
REACTIVOS
- Plasma citratado.
- Cefalina caolín.
- Cloruro de calcio.
- Pipetas.
- Tubos de ensayo.
- Baño María.
- Cronómetro.
V. R. : 33-48 seg.
PROCEDIMIENTO
PRINCIPIO: Mide la fase intrínseca de la coagulación, en presencia de una
“tromboplastina parcial” (cefalina), la cual sustituye la acción del factor
plaquetario tres. Se obtiene máximo efecto de contacto por adición del caolín.
1. Preincubar 50 uL. de cloruro de calcio por 5 minutos.
2. En un tubo de ensayo agregar 50 uL. de plasma y 50
uL. de cefalina caolín e incubar por 5 minutos.
3. Luego añadir 50 uL. de cloruro de calcio previamente
incubado y simultáneamente disparar el cronómetro.
Agitar levemente el tubo para homogenizar y dejar
incubando por aprox. 30 a 32 seg.
4. Remover el tubo del baño maría e inclinarlo para
verificar la formación del coágulo.
5. . De no haberse formado, se sigue incubando el tubo
y se repite el punto anterior cada 4 seg. hasta observar
la coagulación y se para y anota el tiempo exacto.
Es una glicoproteína presente en el plasma y en los gránulos plaquetarios.
Última proteína de la cascada de la coagulación (Factor I) y es el factor
que se encuentra en mayor concentración plasmática.
MATERIALES Y
REACTIVOS
- Plasma citratado.
- A (Trombina).
- B (Sol. De Imidazol).
- Pipetas.
- Tubos de ensayo.
- Baño María.
- Cronómetro.
PROCEDIMIENTO
PRINCIPIO: Mide la cantidad de fibrina generada
al añadir trombina al plasma del paciente.
1. Incubar el reactivo A por 5 minutos.
2. En un tubo de ensayo preparar una dilución 1:10
del plasma del paciente con Reactivo B.
2. Precalentar 100 uL. de la dilución por 2 minutos.
3. Finalizado el tiempo se agrega 50 uL. de reactivo
A y se registra el tiempo de formación del coágulo.
VALORES REFERENCIALES:
200-400 mg/dL.
Desempeñan una función importante en el mecanismo de la hemostasia, así como
en la respuesta de la lesión vascular. La detención de la hemorragia depende de
la formación de un trombo plaquetario que se consolida con la formación de
fibrina por activación del mecanismo de la coagulación; su disminución o
incorrecto funcionamiento se relaciona con transtornos hemorrágicos.
MÉTODO
MANUAL
MÉTODO
AUTOMATIZADO
*RECUENTO EN CÁMARA DE NEUBAUER
Principio: El recuento de plaquetas se realiza en la cámara
de Neubauer previa lisis de los hematíes.
EQUIPOS, MATERIALES
Y REACTIVOS
- Sangre con EDTA.
- Cámara de Neubauer.
- Oxalato de Amonio 1%.
- Pipetas.
- Tubos de ensayo.
- Microscopio.
PROCEDIMIENTO
1. Homogenizar bien la muestra obtenida con EDTA.
2. Hacer una dilución de 20 uL. de sangre total con
380 uL. de oxalato de amonio en un tubo (dil. 1/20).
3. Dejar en reposo por 15 minutos en una gradilla.
4. Agregar una gota de la dilución en la cámara de
Neubauer, dejar en reposo por 15 minutos y tapar
con un papel húmedo para evitar su evaporación.
5. Enfocar a 40x y contar las plaquetas en el
cuadrado central de 1 mm2
*RECUENTO EN CÁMARA DE NEUBAUER
FÓRMULA
VALORES REFERENCIALES:
150 000 – 450 000 plaquetas/mm3
*RECUENTO EN LÁMINA
Se obtiene el promedio de la suma del total de
plaquetas contadas en 10 campos con objetivo de 100x
de un frotis sanguíneo y se multiplica por 20 000.
EQUIPOS, MATERIALES
Y REACTIVOS
- Sangre con EDTA.
- Lámina portaobjetos.
- Col. Wright.
- Aceite de inmersión
- Contador de células.
- Microscopio.
VALORES REFERENCIALES:
150 000 – 450 000 plaquetas/mm3
PRINCIPIO: Se observa la formación del coágulo en tubos en
condiciones estandarizadas; esta prueba mide el
mecanismo intrínseco de la coagulación.
- Tubos de ensayo.
- Materiales para
punción venosa.
- Baño María.
- Cronómetro.
PROCEDIMIENTO
MATERIALES Y
EQUIPOS
VALORES REFERENCIALES:
5-10 minutos.
1. Extraer poco más de 3 mL. de sangre venosa.
Cronometrar el tiempo desde que se extrae la sangre.
2. En dos tubos de ensayo, agregar 1 mL. de sangre en
cada uno, taponar con parafilm e incubar.
3. A los 5 minutos, sacar el primer tubo del baño maría
e inclinar hacia un plano de 90º en rotación a
intervalos de 30 segundos hasta que la sangre
coagule.
4. Inmediatamente después, examinar el segundo
tubo y verificar el tiempo de la formación del coágulo.
5. Se reporta como tiempo de coagulación la media
de los dos tubos.
La lesión estandarizada de un número pequeño de capilares, nos permite
observar la retracción del capilar, la cantidad y calidad de las plaquetas,
al medir el tiempo que tarda en cesar la hemorragia.
PRINCIPIO: Con una lanceta se hace una incisión estandarizada
en el lóbulo de la oreja. La sangre fluye por esta incisión y se
mide el tiempo que transcurre hasta que se detiene el sangrado.
- Lanceta estéril.
- Alcohol.
- Papel secante.
- Cronómetro.
VALORES REFERENC.:
1-3 minutos.
PROCEDIMIENTO
MATERIALES
1. Dar masaje suave al lóbulo de la oreja, limpiarla
con alcohol y dejarlo secar.
2. Hacer una punción de 2 a 3 mm de profundidad
con la lanceta (movimiento rápido y firme).
Simultáneamente poner en marcha el cronómetro.
3. Con una tira de papel secante, absorber cada 15
segundos la gota de sangre sin tocar la herida.
4. Parar el cronómetro en el momento en que el
papel secante ya no se manche de sangre.
Su estudio consiste en precisar e informar las alteraciones morfológicas
de los elementos formes de la sangre; este es un examen sencillo,
poco costoso, rápido en la realización del informe de sus resultados,
pero a la vez requiere de mucho cuidado y experiencia.
*ALTERACIONES
MORFOLÓGICAS
29
*ALTERACIONES
POR EL TAMAÑO
*ALTERACIONES
POR LA TINCIÓN
30
*ALTERACIONES POR INCLUSIONES CITOPLASMÁT.
31
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33