Medios_de_cultivos

Objetivos
Preparación de medios de
cultivo
Curso: “Métodos en fitopatología”
„ Conocer a que denominamos medio de
cultivo en el laboratorio de Fitopatología.
„ Reconocer la existencia de diferentes tipos
de medio.
„ Reconocer la utilidad de los diferentes
medios de cultivo en el trabajo con
patógenos de plantas.
Dr. Pedro Mondino
24 de abril de 2009
Objetivos
„ El alumno debe:
1) ser capaz de elaborar medios de cultivo
con el fin de ser utilizados posteriormente
para el aislamiento de hongos, bacterias o
microorganismos epifíticos.
„ 2) Desenvolverse con soltura en la
utilización de protocolos.
„
Condiciones que debe reunir un Medio de
cultivo
Medios de cultivo
„ Los medios de cultivo de microorganismos
(hongos, bacterias, levaduras) son esenciales
en el Laboratorio de Fitopatología por lo que
a diario se preparan y utilizan.
„ Los medios de cultivo son una mezcla de
nutrientes que, en concentraciones adecuadas
y en condiciones físicas óptimas, permiten el
crecimiento de los microorganismos.
Disponibilidad de nutrientes en los
Medios de cultivo.
„ Para
que los microorganismos crezcan
adecuadamente, un medio de cultivo artificial
debe reunir una serie de condiciones:
„ contener los nutrientes y factores de crecimiento
necesarios
disponer de oxígeno
„ temperatura adecuada
„ humedad
„ pH.
„ exento de microorganismos contaminantes.
„
„ Un medio de cultivo para que permita el crecimiento
adecuado de microorganismos debe contener como
mínimo:
„ Carbono
„ Nitrógeno
„ Azufre
„ Fósforo
„ Sales inorgánicas que suplan iones (K, Mg, Fe,
Ca, etc.).
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Disponibilidad de nutrientes en los Medios de
cultivo
Medios de cultivo según su composición
„ Medios Naturales. Consisten únicamente en un
„ Estos nutrientes generalmente se aportan con
Extracto de malta, Peptona, Papa, extracto de
levadura, etc.
Medios de cultivo según su composición
„ Medios definidos o sintéticos: son los medios que tienen una
„
„
„
„
„
„
„
„
composición química definida cuali y cuantitativamente.
Generalmente se usan en trabajos de investigación.
Ej: Medio Czapek.
Nitrato de Sodio 2 g/l
Fosfato bipotásico 1 g/l
Cloruro de potasio 0,5 g/l
Sulfato de magnesio heptahidratado 0,5 g/l
Sulfato de hierro heptahidratado 0,01 g/l
Sacarosa 30 g/l
Agar-agar 15 g/l
Medios complejos
„ Agar Papa Dextrosa:
„ Medio para el cultivo y conteo de levaduras y
„
„
„
„
hongos en general.
Agar -15g
Dextrosa - 20g
Infusión papa - 4g
Agua destilada 1L
material vegetal. Ejemplos: un trozo de papa. Agar
jugo de manzana, Agar durazno, Agar y jugo de
vegetales.
Medios de cultivo según su composición
„ Medios complejos o de composición
indefinida: Son medios cuya composición no
se conoce con exactitud.
„ contienen nutrientes en abundancia pero sin
saber con exactitud la composición cualitativa
ni cuantitativa de estos nutrientes.
„ Ej: Agar Papa; Agar Malta;
Medios de cultivo según su estado físico
„ Los medios de cultivo utilizados pueden ser de
diferentes tipos:
„ Medios sólidos.
„ Medio semisólidos.
„ Medios líquidos.
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Medios de cultivo
Medios sólidos de cultivo
„ Usualmente para preparar un medio sólido se parte
de un medio líquido al que se le añade un agente
solidificante como el agar
„ El agar es un polisacárido extraído de algas.
„ En los medios sólidos la proporción de Agar es
siempre por encima del 15%
Medios de cultivo
„ El agar es el elemento solidificante más
empleado en la preparación de medios de
cultivo.
„ Sus características principales son:
Medios semi-sólidos de cultivo
„ En los medios semi-sólidos la proporción de Agar es
de alrededor del 5%
„
Se licua completamente a temperaturas de 80 –100
ºC y se solidifica al enfriarse a 40 grados.
„ No afecta el crecimiento de hongos ni bacterias.
„ No es utilizado por los microorganismos que crecen
en él.
Medio Agar Agua
Medios de cultivo
„ En ocasiones se añaden al medio de cultivo sustancias
„ Se trata de un medio sin el agregado de nutriente
alguno.
„ Utilidad
indicadoras de actividades metabólicas.
„ También se pueden añadir sustancias que ejercen acción
inhibitoria selectiva de ciertos microorganismos.
„
Aislamiento de hongos a partir de tejido vegetal. Se
logra que el crecimiento sea el resultado de la
nutrición que posee el tejido vegetal.
„ Ensayos de evaluación de actividad antifúngica.
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Medios de cultivo
Medios de cultivo según su utilidad
práctica
„ Generales: Sirven para el cultivo de una gran variedad
„ La exactitud en los procedimientos de
fabricación, preparación, conservación y uso,
de los medios de cultivo asegura la
exactitud, confiabilidad y reproducibilidad de
los resultados obtenidos en los ensayos o
experimentos.
Medios de cultivo según su utilidad
práctica
„ Medios diferenciales: Son aquellos destinados a
facilitar la discriminación de microorganismos
de una mezcla por sus propiedades diferenciales
de crecimiento en dichos medios.
Temperaturas de incubación
„ En general los microorganismos patógenos de
plantas crecen a temperaturas en el entorno de
24 a 28 ºC.
„ En ocasiones incubamos a temperaturas
diferentes:
A 37 ºC cuando queremos descartar el crecimiento
de agentes de control biológico a la temperatura del
cuerpo humano.
„ A 5ºC o menos cuando buscamos microorganismos
adaptados a crecer en la cámara frigorífica.
„ Venturia inaequalis debe incubarse a temperaturas
de entre 16 y 20 ºC
„
de microorganismos.
„ Ej: Agar Papa destrosado (PDA); Agar Nutriente
(NA)
„ Selectivos: Son medios a los que se les agregan
sustancias para inhibir el crecimiento de otros
microorganismos.
„ Ej: Agar Malta acidificado y con antibiótico para
inhibir el crecimiento de bacterias.
„ Diferenciales:
Medios de cultivo según su utilidad
práctica
„ Medios selectivos: Son aquellos que
favorecen por su diseño el crecimiento
específico de un microorganismo particular o
grupo de microorganismos. Es de gran
utilidad para el aislamiento de
microorganismos a partir de una población
microbiana mixta
Condiciones adecuadas de humedad
„ Un nivel mínimo de humedad, tanto en el
medio como en la atmósfera, es
imprescindible para un buen desarrollo de
las células vegetativas de los cultivos
microbianos.
„ En las estufas de cultivo se debe
proporcionar una fuente adecuada de
humedad para evitar así que se deseque el
medio.
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Presencia de oxígeno
„ Los microorganismos aerobios necesitan que el
oxígeno llegue en forma adecuada al medio.
„
En los medios líquidos se recurre a la agitación, de
lo contrario solamente habrá crecimiento en la
parte superior.
Preparación de medio Agar Malta con
antibiótico
Presencia de oxígeno
„ Los microorganismos aerobios necesitan que el oxígeno
llegue en forma adecuada al medio. Los anaerobios por
el contrario crecen en ausencia de oxígeno. Ej. Erwinia
Preparación de medio Agar Nutriente
„ Receta del agar malta
„ Extracto
de malta 20 g/L.
20 g/L
„ pH = 5,4
„ Sulfato de estreptomicina al 0,02%
„ (0,1 ml de la solución stock/100 ml de
medio).
„ Agar
Preparación de medio Agar Nutriente
„ 3 g de extracto de Carne de buey
„ 5 g de peptona trípsica de gelatina
„ 15 g de agar
„ de cloruro sódico y glucosa
„ agua destilada hasta 1000 ml
„ Receta NAD (Nutriente agar destrosa)
„ Agar
nutriente 23g
5g
„ Agua destilada 1000 ml.
„ Destrosa
Esterilidad de los Medios de cultivo
„ Los medios de cultivo han de estar perfectamente
estériles para evitar otros microorganismos puedan
interferir con el crecimiento del que queremos
cultivar.
„ Los medios de cultivo se esterilizan en el autoclave.
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Medios de cultivo
„ En 1887 un ayudante de Koch llamado Petri,
comienza a utilizar placas de vidrio planas
„ Hoy existen de plástico.
„ Procedimiento seguido para dispensar el
medio en placas de Petri
Medios de cultivo
„ Los medios se pueden utilizar en frascos,
placas de Petri o tubos.
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