CULTIVO DE MICROORGANISMOS

CULTIVO DE
MICROORGANISMOS
MEDIOS DE
CULTIVO
CULTIVO DE MICROORGANISMOS
 fuente de energía exógena
 nutrientes esenciales: agua, carbón, nitrógeno,
minerales
 condiciones ambientales apropiadas: pH,
temperatura, presión osmótica y oxígeno
atmosférico.
Fuente de energía exógena
 Catabolismo: conjunto de reacciones de
degradación de sustancias en las que se
produce (o libera) energía.
 Anabolismo: conjunto de reacciones químicas
encaminadas a la síntesis de componentes
celulares. Son reacciones de biosíntesis, que
consecuentemente requieren energía.
Dependiendo de la energía que toman del medio
para crecer
 Fotótrofos: luz
 Quimiótrofos: compuestos químicos
Estos a su vez se pueden dividir según sea el
compuesto químico que utilizan.
* Quimiolitótrofos: inorgánico
* Quimioorganótrofos: orgánico
Requerimientos para el desarrollo bacteriano
 Autótrofos: obtienen C y N de la materia orgánica
simple
 Heterótrofos: Requieren compuestos orgánicos
más complejos como fuente de C y de N, así como
proteínas y derivados y requieren carbohidratos y
grasas
nutrientes esenciales
 “peptonas”: proteínas digeridas
parcialmente ( polipéptidos, dipéptidos y
aminoácidos)
 Carbohidratos
 Minerales: Na, K, Mg, Ca, Cl, Fe, Zn, Mn, Mo,
Se, Co, Cu, Ni
condiciones ambientales apropiadas
 pH
 temperatura
 presión osmótica
 oxígeno atmosférico
pH
 Basófilas
 En la mayoría de las bacterias el crecimiento
óptimo es entre 6.5 y 7.5.
 Acidófilas Muy pocas bacterias crecen a un pH
menor de 4.0. Sin embargo, las bacterias
clasificadas como son tolerantes a la acidez, un
ejemplo es Thiobacillus thiodans que crece a un
pH óptimo de entre 2.0 a 3.5.
pH
Temperatura
GRUPO
CRIÓFILAS O
PSICRÓFILAS
TEMPERATURA
MÍNIMA °C
0
TEMPERATURA TEMPERATURA
ÓPTIMA °C
MÁXIMA °C
15- 20
30
MESÓFILAS
15-25
37
43
TERMÓFILAS
25-45
50-55
85
Presión osmótica
 Halófilos : organismos capaces de vivir en medios
salinos como el mar (3.5% NaCl)
 Osmófilos: organismos que pueden vivir en
ambientes ricos en azúcar
 Xerófilos: organismos q sobreviven en ambientes
muy secos
Oxígeno
 Aerobios: microorganismos que viven en ambientes con
tensiones normales de O₂ (21% de O₂ )
 Microaerofílicos: microorganismos que viven en presencia de
niveles de O₂ que están bajo la concentración presente en el
aire (<21%)
 Anaerobios facultativos microorganismos que pueden vivir en
presencia o en ausencia de O₂
 Anaerobios estrictos: microorganismos incapaces de crecer en la
presencia de O₂
Oxígeno
aerobio
microaerofílico
Anaerobio
facultativo
Anaerobio
estricto
Dispositivo para anaerobias
CRECIMIENTO BACTERIANO
FASES
Fase de latencia: etapa en la
cual un inóculo proveniente
de otro medio de cultivo
2. Fase exponencial o
logarítmica: las bacterias
están dividiéndose.
3. Fase estacionaria: etapa en
que los nutrientes se agotan
4. Fase de muerte: las bacterias
ya no crecen ni realizan
actividades metabólicas. Hay
lisis celular
Número de
microorganismos (log)
1.
tiempo
CLASIFICACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO
 COMPOSICIÓN
 DE ACUERDO A SU USO EN EL LABORATORIO
COMPOSICIÓN
 SINTÉTICO: Son aquellos medios preparados con alta
pureza y en los cuales la composición se conoce en forma
precisa. Su uso es muy definido, por ejemplo medios para
ensayo de vitaminas o para enriquecimiento.
 NO SINTÉTICO: Estos se preparan a partir de una gran
variedad de productos crudos como son extractos de carne,
extractos de levaduras, hidrolizados proteicos (peptonas) etc.
y aunque se conoce cuáles son los ingredientes, estos pueden
variar ligeramente, por ejemplo el contenido de aminoácidos
entre la carne de un animal y otro.
DE ACUERDO A SU USO EN EL
LABORATORIO
~ Medios de cultivo de uso general. En este grupo se encuentran los medios que
contienen los nutrientes básicos y no contienen sustancias inhibitorias por lo que en
ellos pueden crecer una gran variedad de heterótrofos. Entre estos medios
tenemos : Agar de soya y tripticaseína, agar de Müller Hinton, agar nutritivo, etc.
~ Medios de cultivo diferencial. Este tipo de medios es usado para distinguir entre
diferentes tipos de bacterias. Usualmente contienen colorantes o indicadores de
pH que darán un color característico a las colonias o viraran el color del medio de
cultivo de acuerdo al microorganismo que se trate.
Un medio puede ser diferencial y selectivo al mismo tiempo.
~ Medios de cultivo selectivos. Este es un medio nutritivo al que se le añaden
productos que actúan como agentes inhibitorios, de tal manera que sólo permiten
el crecimiento de cierto grupo de microorganismos. Se usan para aislar organismos
particulares e inhibir el crecimiento de los no deseados.
Medios selectivos y diferenciales
 Agar de MacConkey el cual contiene una mezcla de sales biliares que
inhiben a los microorganismos Grampositivos, además de lactosa y como
indicador rojo de fenol para distinguir las bacterias que fermentan la
lactosa de las que no lo hacen.
 Agar EMB (Eosina azul de metileno) mediante el azul de metileno y la
eosina inhibe los organismos Grampositivos. Al mismo tiempo, al igual que
el Agar de MacConkey, permite diferenciar bacterias que fermentan la
lactosa y/o a la sacarosa de las que no lo hacen.
 El Agar de sal y manitol, por su alto contenido de NaCl (7.5%) inhibe a las
bacterias que no lo toleran, al mismo tiempo con el indicador rojo de fenol
sirve para detectar la fermentación del manitol. Se utiliza para el
aislamiento y diferenciación del género Staphylococcus.
MEDIOS DE CULTIVO
A. Medios líquidos
B. Medios sólidos: llevan un agente solidificante (Agar) que es
un polisacárido acídico producido por ciertas algas rojas que
gelifica por debajo de 45° C. Se usa a una concentración del
1.5%.
C. Medios semisólidos: agar a una concentración del 0.7%.