Medio BBL preparado en placa para la detección de enterococos

 Medio BBL preparado en placa para la detección de enterococos con alto
nivel de resistencia a aminoglucósidos y vancomicina
Enterococcus Screen Agar QUAD Plate with Streptomycin / Gentamicin / Vancomycin
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8809611JAA(01)
2013-08
Español
USO PREVISTO
Enterococcus Screen Agar (agar de detección para Enterococcus) se utiliza para analizar enterococos para determinar el alto nivel
de resistencia a los aminoglucósidos y la vancomicina, con el fin de predecir la sinergia de estos antimicrobianos.
RESUMEN Y EXPLICACION
Se conoce que los enterococos causan una amplia variedad de infecciones. Las infecciones de mayor frecuencia se producen en
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las vías urinarias, el abdomen, el torrente sanguíneo, el endocardio, las vías biliares, las quemaduras y las sondas permanentes .
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Enterococcus faecalis causa del 80 al 90% de las infecciones, mientras que E. faecium causa la mayoría de las restantes . Hoy en
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día, los enterococos representan la cuarta causa más importante de bacteriemia en Estados Unidos . La tasa de casos/letalidad de
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bacteriemia enterocócica varía del 12 al 68%, con 4 al 50% de los fallecimientos debido a septicemia .
El tratamiento de las infecciones enterocócicas con solamente penicilina o vancomicina no eliminan los enterococos, lo que termina
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con una infección recurrente . Durante años se conocía que los enterococos tenían un bajo nivel de resistencia intrínseca a
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diversos -lactámicos y antibióticos aminoglucósidos . Al añadirse un aminoglucósido al que el aislado ha demostrado resultados
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de sensibilidad, se produce sinergia, tanto in vitro como in vivo, lo que produce un efecto bactericida . Se considera que dicho
efecto sinérgico se debe a que la penicilina o vancomicina dañan la integridad de la pared celular, lo que permite que el
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aminoglucósido penetre e inhiba la síntesis de proteína por parte de las bacterias . La aparición de un alto nivel de resistencia a la
estreptomicina (≥ 2.000 µg/mL), gentamicina (≥ 500 µg/mL) y vancomicina (≥ 6 µg/mL) puede hacer que las combinaciones de
penicilina o vancomicina y aminoglucósido no logren erradicar los organismos que causan la infección. Por tanto, es importante
determinar mediante pruebas el alto nivel de resistencia a la estreptomicina, gentamicina y vancomicina. Con este propósito, el
Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) recomienda el uso de Brain Heart Infusion Agar (BHIA) con estreptomicina
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(2.000 µg/mL), gentamicina (500 µg/mL) y vancomicina (6 µg/mL) .
PRINCIPIOS DEL PROCEDIMIENTO
Brain Heart Infusion Agar es un medio de uso general para el cultivo de una amplia variedad de microorganismos y se recomienda
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para las pruebas de sensibilidad de enterococos mediante detección en agar .
Los sólidos de infusión de carne y las peptonas son fuentes de nitrógeno orgánico, carbono, azufre, vitaminas y sustancias de
traza. La dextrosa es la fuente de carbohidratos. Se utiliza fosfato disódico como tampón en el medio. Se utilizan estreptomicina
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(2.000 µg/mL) y gentamicina (500 µg/mL) para detectar alta resistencia a los aminoglucósidos . Se utiliza vancomicina (6 µg/mL)
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para detectar resistencia a la vancomicina . Se añaden colorantes FD&C (para alimentos, fármacos y cosméticos), que son inertes,
para facilitar la identificación de los antimicrobianos.
REACTIVOS
Enterococcus Screen Agar
Brain Heart Infusion Agar (BHIA)
Fórmula aproximada* por litro de agua purificada
Infusión de cerebro y corazón de (sólidos) ...... 8,0 g
Digerido péptico de tejido animal ..................... 5,0 g
Digerido pancreático de caseína ................... 16,0 g
Cloruro sódico .................................................. 5,0 g
Dextrosa ........................................................... 2,0 g
Fosfato disódico ............................................... 2,5 g
Agar ............................................................... 13,5 g
La sección I está formada por BHIA (control de crecimiento).
La sección II está formada por BHIA con 0,5 g/L de gentamicina y 1,02 g/L de colorante rojo FD&C Nº 40.
La sección III está formada por BHIA con 6,0 mg/L de vancomicina y 0,56 g/L de colorante amarillo FD&C Nº 5.
La sección IV está formada por BHIA con 2,0 g/L de estreptomicina y 0,4 g/L de colorante azul FD&C Nº 1.
*Ajustada y/o suplementada para satisfacer los criterios de rendimiento.
Advertencias y precauciones
Para uso diagnóstico in vitro.
Emplear una técnica aséptica y seguir las precauciones habituales contra riesgos microbiológicos durante todos los
procedimientos. Después de su uso, las placas preparadas, los recipientes de muestra y otros materiales contaminados deben
esterilizarse en autoclave antes de ser desechados. Si se observa humedad excesiva, invertir la parte inferior sobre una tapa
desplazada y permitir secar al aire para evitar la estanqueidad entre las partes superior e inferior de la placa durante la incubación.
Instrucciones para el almacenamiento: En el momento de recibir las placas, almacenarlas en un lugar oscuro a una temperatura
de 2 – 8 °C. No congelar ni sobrecalentar. No abrir hasta que vayan a utilizarse. Reducir al mínimo la exposición a la luz. Las
placas preparadas almacenadas en su envase original a una temperatura de 2 – 8 °C hasta momentos antes de su utilización
pueden inocularse hasta su fecha de caducidad e incubarse durante los períodos de incubación recomendados. Permitir que el
medio se caliente a temperatura ambiente antes de la inoculación.
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Deterioro del producto: No utilizar las placas si muestran evidencia de contaminación microbiana, decoloración, deshidratación,
grietas o cualquier otro signo de deterioro.
RECOGIDA Y PREPARACION DE LAS MUESTRAS
Estas placas no están diseñadas para uso con muestras ni cultivos mixtos. El organismo de prueba debe encontrarse primero en
un cultivo puro y haberse identificado presuntivamente como de la especie Enterococcus.
PROCEDIMIENTO
Material suministrado: Enterococcus Screen Agar.
Materiales necesarios pero no suministrados: Medios de cultivo auxiliar, reactivos, organismos para el control de calidad y el
equipo de laboratorio que se requiere para llevar a cabo este procedimiento.
Procedimiento de análisis
1. Preparar el inóculo suspendiendo colonias bien aisladas de aislados enterocócicos de un cultivo en placa de 18 – 24 h en un
tubo de caldo de soja Trypticase y ajustar la turbidez para que sea equivalente al patrón de turbidez 0,5 de McFarland.
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2. Inocular una zona de cada sección de la placa con 10 µL de la suspensión ajustada .
3. Dejar que las zonas inoculadas se absorban en las superficies de agar.
4. Incubar las placas a 35 ± 2 °C en atmósfera aerobia durante un total de 24 h. En caso de resultado negativo a las 24 h, incubar
nuevamente las pruebas con estreptomicina durante 24 h más.
Control de calidad del usuario:
1. Examinar las placas para determinar signos de deterioro según se describe en “Deterioro del producto”.
2. Evaluar el rendimiento mediante la inoculación de una muestra representativa de placas con cultivos puros de organismos de
control estables que producen reacciones esperadas y conocidas. Se recomiendan los siguientes cultivos:
CEPAS DE PRUEBA
RESULTADOS PREVISTOS
I
II
III
IV*
Enterococcus faecalis
ATCC 29212
Sección
+
–
–
–
Enterococcus faecalis
ATCC 51299
+
+
+
+
Enterococcus gallinarum
ATCC 49573
+
–
+
–
+ = Crecimiento de más de una colonia
– = Ausencia de crecimiento o una colonia
* Si la sección IV produce resultado negativo a las 24 h, incubar nuevamente durante 24 h más.
El control de calidad debe llevarse a cabo conforme a la normativa local y/o nacional aplicable, a los requisitos de los organismos
de acreditación y a los procedimientos estándar de control de calidad del laboratorio. Se recomienda consultar las instrucciones del
CLSI y normativas CLIA correspondientes para obtener información acerca de las prácticas adecuadas de control de calidad.
RESULTADOS
Después de las 24 h de incubación, observar si las placas presentan crecimiento. El crecimiento en la sección I (BHIA de control)
indica la presencia de organismos de prueba viables en la suspensión de caldo de inóculo, y la prueba es válida. Si no se observa
crecimiento, la prueba no es válida y debe repetirse.
Crecimiento en:
Sección II: Rojo (BHIA con gentamicina) y/o
Sección III: Amarillo (BHIA con vancomicina) y/o
Sección IV: Azul (BHIA con estreptomicina)
indica que el antimicrobiano no podría producir sinergia en tratamiento combinado. La ausencia de crecimiento indica que puede
predecirse sinergia.
LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO
Este producto está diseñado para ser utilizado con las especies Enterococcus. De vez en cuando, los aislados enterocócicos con
CMI de sensibilidad antimicrobiana dudosas pueden mostrar crecimiento. Este producto suministra un método de detección para
predecir las contribuciones sinérgicas de los aminoglucósidos con penicilina o vancomicina. La contribución sinérgica de otros
aminoglucósidos no puede predecirse a partir de los resultados de estreptomicina o gentamicina ni puede predecirse la
contribución sinérgica de la penicilina a partir de los resultados de la vancomicina.
La técnica de “checkerboard” (diluciones cruzadas) y las pruebas de “time-kill” (curvas de acción bactericida) son métodos
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definitivos para la determinación de la sinergia .
La cepa de prueba enterocócica puede ser resistente a la penicilina y ampicilina por la alteración de las proteínas que se unen a la
penicilina o la producción de β-lactamasa. Consulte el documento CLSI para obtener información acerca de los métodos de prueba
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correspondientes .
CARACTERISTICAS DE RENDIMIENTO
El procedimiento de la prueba de detección en agar recomendado por el CLSI para determinar los enterococos con alta resistencia
a los aminoglucósidos y la vancomicina fue realizado de manera interna con 49 aislados de Enterococcus y se utilizó BBL Screen
Medium con BHIA con 500 µg/mL de gentamicina, 6 µg/mL de vancomicina y 2.000 µg/mL de estreptomicina. Los 49 aislados
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enterocócicos estaban formados por 21 de E. faecalis, 18 de E. faecium, 4 de E. gallinarum, 2 de E. raffinosus, 1 de
E. casseliflavus, 1 de E. mundtii y 2 de E. avium. Los patrones de resistencia de los 49 enterococos se presentan en la Tabla 1.
Tabla 1. Estudio interno
(% de correlación con los resultados previstos)
=
Gentamicina
Nº total de cepas
analizadas
49
Nº de pruebas resistentes a las
24 h/Resultados previstos
29/29 (100 %)
Nº de pruebas resistentes a las
48 h/Resultados previstos
Vancomicina
49
27/27 (100 %)
=
Estreptomicina
49
24/26 (92 %)
26/26 (100 %)
=
La caracterización fenotípica incluyó el uso de dilución en agar y/o caldo para establecer las CMI de la gentamicina, vancomicina y
estreptomicina. De los 49 aislados, todos demostraron una correlación del 100% entre los resultados de la prueba y los resultados
previstos.
Los estudios de reproducibilidad (3 veces por día durante 3 días) se llevaron a cabo con 14 aislados enterocócicos en dos
establecimientos. Los 14 aislados estaban formados por 7 de E. faecalis, 3 de E. faecium, 1 de E. gallinarum, 1 de E. avium, 1 de
E. casseliflavus y 1 de E. raffinosus. Los patrones de resistencia de los 14 enterococos se presentan en la Tabla 2.
Tabla 2. Estudio de reproducibilidad en establecimientos
(% de correlación con los resultados previstos)
=
Nº total de pruebas
Gentamicina
Nº total de cepas
analizadas
14
279
Nº de pruebas resistentes a las
24 h/Resultados previstos
162/162 (100%)
Vancomicina
14
279
135/135 (100%)
Estreptomicina
14
279
160/162 (99%)
La caracterización fenotípica incluyó el uso de dilución en agar y/o caldo para establecer las CMI de la gentamicina, vancomicina y
estreptomicina. Aquí también se demostró una correlación del 100% entre los resultados de la prueba y los previstos.
DISPONIBILIDAD
Nº de cat.
Descripción
222201
BBL Enterococcus Screen Agar QUAD Plate with Streptomycin / Gentamicin / Vancomycin, pqt. de 10 placas.
REFERENCIAS
1. Jett, B.D., M.M. Huycke, and M.S. Gilmore. 1994. Virulence of enterococci. Clin. Microbiol. Rev. 7:462-478.
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3. Emori, T.G., and R.P. Gaynes. 1993. An overview of nosocomial infections, including the role of the microbiology laboratory.
Clin. Microbiol. Rev. 6:428-442.
4. Landry, S.L., D.L. Kaiser, and R.P. Wenzel. 1989. Hospital stay and mortality attributed to nosocomial enterococcal bacteremia:
a controlled study. Am. J. Infect. Control 17:323-329.
5. Moellering, R.C., Jr., O.M. Korzeniowski, M.A. Sande, and C.B. Wennersten. 1979. Species-specific resistance to antimicrobial
synergism in Streptococcus faecium and Streptococcus faecalis. J. Infect. Dis. 140:203-208.
6. Murray, B.E. 1990. The life and times of the enterococcus. Clin. Microbiol. Rev. 3:46-65.
7. Mandell, G.L. 1984. Enigmatic enterococcal endocarditis. Ann. Intern. Med. 100:904-905.
8. Moellering, R.C., Jr., and A.N. Weinberg. 1971. Studies on antibiotic synergism against enterococci. II. Effect of various
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9. Clinical and Laboratory Standards Institute. 2013. Approved standard: M100-S23. Performance standards for
antimicrobial/susceptibility testing; 23rd informational supplement. CLSI, Wayne, Pa.
10. Sahm, D.F., and C. Torres. 1988. Effects of medium and inoculum variations on screening for high-level aminoglycoside
resistance in Enterococcus faecalis. J. Clin. Microbiol. 26:250-256.
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=
 = Becton, Dickinson and Company
7 Loveton Circle
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
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