PRUEBAS SECUNDARIAS

Identificación y medición de la
respuesta inmune
PRUEBAS SECUNDARIAS
La prueba a realizar depende de las
características del Ag
§ SOLUBLE
§ PARTICULADO
PRECIPITACIÓN
AGLUTINACIÓN
§ SUPERFICIE + COMPLEMENTO
FIJACIÓN DE
COMPLEMENTO
Comparación precipitación - aglutinación
Y
Antígeno
PARTICULADO
Anticuerpo
Formación de “retículo”
PRECIPITACIÓN
“Amontonamiento”
AGLUTINACIÓN
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Antígeno
SOLUBLE
Y
Y
PRECIPITACIÓN
Fundamento: un antígeno soluble, al ser puesto en
contacto con su anticuerpo específico, forma
complejos inmunes que al encontrarse en
proporciones óptimas se insolubilizan dando una
reacción de precipitación
Precipitación
Exceso de Ag
Exceso de AC
Proporciones
óptimas
Ag SOLUBLE
PROPORCIÓN
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Ag/mg
Y
Y
Y Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y YY
YY
Y
Y
MEDIO
Y
AC ESPECÍFICO
RETÍCULO
SOLUBLE
Y
MEDIO
LÍQUIDO
SÓLIDO
Test de Ascoli - Valente
CARBUNCLO
•
DIFUSIÓN DOBLE
•
INMUNOELECTROFORESIS (IEF)
•
INMUNODIFUSIÓN RADIAL (IDR)
•
CONTRAINMUNOELECTROFORESIS (CIEF)
DIFUSIÓN DOBLE
Inmunodifusión en Gel de Agar
Fundamento: empleando el medio adecuado (agar
gel), es posible hacer migrar por difusión tanto Ag
como Ac (difusión “doble”), de modo que al
encontrarse en proporciones óptimas,
interaccionen, produciendo una banda de
precipitado visible
Ejemplo: test de Coggins para diagnóstico de AIE
Test de Coggins para AIE
Placa de Petri
1
3
5
2
5
2.Sacabocados
1
1
6
7
4
6
4. Suero testigo (+)
(reactivo)
3. Suero problema
1. Agar gel
4
7
5. Antígeno específico
(reactivo)
2
6
3
5
2
7
3
4
6
2
6
2
7
7
4
4
6.Cámara húmeda
48 hs
7. LECTURA (fondo oscuro) e INTERPRETACIÓN
A
6
D. NEGATIVO
E. Fuertemente POSITIVO
2
7
C
4
B
F. POSITIVO
G
D
A. NEGATIVO
B. POSITIVO
C.
Débilmente POSITIVO
F
E
I
H
G. POSITIVO
H. Banda INESPECÍFICA
I. Banda INESPECÍFICA
APLICACIONES EN VETERINARIA
§ ANEMIA INFECCIOSA EQUINA
§ PIROPLASMOSIS EQUINA
§ LEUCOSIS BOVINA
§ BRUCELOSIS OVINA
§ BRUCELOSIS CANINA
AGLUTINACIÓN
Fundamento: un antígeno particulado (ejemplo:
bacterias, eritrocitos), al ser puesto en contacto con su
anticuerpo específico en proporciones óptimas, se une
por medio de enlaces cruzados. Este complejo de unión
agruma, produciendo una reacción de aglutinación.
FENÓMENO DE ZONA O PROZONA
Se produce cuando existe un marcado exceso de Ac con
respecto a los determinantes antigénicos de la partícula, de
tal manera que es poco probable que los dos sitios de unión
de la Ig puedan unirse a dos determinantes antigénicos de
dos partículas distintas, inhibiéndose de este modo la
aglutinación. Generalmente ocurre en las diluciones bajas de
sueros muy positivos.
A
G
L
U
T
I
N
A
C
I
Ó
N
AGLUTINACIÓN
AGLUTINACIÓN PASIVA
COAGLUTINACIÓN
HEMOAGLUTINACIÓN / INHIBICIÓN H. A.
Antígeno
particulado
(reactivo)
Y
YY
Y Y
YY
+ YY Y
Proporción
AGLUTINACIÓN
Suero problema
Medio
AGLUTINACIÓN
En PLACA
En TUBO
Salmonella Brucella Micoplasma
Brucella
BPA
SAT+2-ME
PAL
Aglutinación en placa: BPA
Prueba del Antígeno Brucélico Acidificado
1. Suero problema
Aglutinoscopio + placa de
vidrio
2. Antígeno específico
(reactivo)
8 MINUTOS
3. Mezclar
LECTURA E
INTERPRETACIÓN
Con GRUMOS
AGLUTINACIÓN POSITIVA
Sin GRUMOS
Negativa
Aglutinación en tubo: SAT + 2-ME
SAT (Seroaglutinación en Tubo)
Ig M
2- ME (2- Mercaptoetanol)
Ig G
Se realizan en
simultáneo
En TUBO: SAT + 2- ME
2. Solución fisiológica fenicada (SFF)
1. Suero problema
3. Antígeno
60 MINUTOS
SUERO
BPA (+)
SAT
1/25
2. Solución 2-ME
1/50
1/100
1/200
Título
37ºC-48 hs
2-ME
LECTURA e INTERPRETACIÓN
37ºC-48 hs
POSITIVA
INCOMPLETA
NEGATIVA
Aglutinación en tubo: PAL
PRUEBA DEL ANILLO EN LECHE
Fundamento: si en una muestra de leche se encuentra
un anticuerpo específico, y se le agrega un antígeno
particulado coloreado, ambos se unirán, formando un
complejo Ag-Ac que se adhiere a los glóbulos de grasa y
asciende con la nata
PAL
2. Antígeno (reactivo)
1. Leche problema
LECTURA e INTERPRETACIÓN
37ºC-1 hora
+
++
+++
++++
APLICACIONES EN R. A.
BRUCELOSIS BOVINA
Prueba
TAMIZ
COMPLEMENTARIAS
BPA – ELISA I
SAT + 2-ME – FPA
ELISA C
DEFINITORIA
VIGILANCIA
EPIDEMIOLÓGICA
FC
PAL - ELISA I
PRUEBAS TERCIARIAS
v IN VITRO
NEUTRALIZACIÓN
v IN VIVO
PROTECCIÓN
NEUTRALIZACIÓN
Fundamento: estimación de la capacidad de una
anticuerpo de neutralizar la actividad biológica
de un antígeno cuando se mezcla con él in vitro
PROTECCIÓN
Fundamento: forma de análisis de neutralización
que se realiza totalmente in vivo para determinar
la capacidad protectora de un anticuerpo
específico frente a su antígeno
RESPUESTA INMUNE CELULAR
v PURIFICACIÓN DE LINFOCITOS
v IDENTIFICACIÓN LINFOCITOS T
v IDENTIFICACIÓN LINFOCITOS B
v PRUEBA DE FUNCIÓN DE LINFOCITOS