PRÁCTICA 2: Obtención de un frotis sanguíneo:

PRÁCTICA 2: Obtención de un frotis sanguíneo:
Objetivos de la práctica:
-Conocer las propiedades de las diferentes tinciones usadas para realizar el frotis sanguíneo.
-Familiarizarse con el material de laboratorio y aprender su manipulación para luego poder realizar
correctamente los diferentes pasos para un frotis sanguíneo.
-Realizar un frotis sanguíneo con sangre del alumno, etiquetarlo y guardarlo para analizarlo más
adelante.
Materiales:
-Dos portaobjetos.
-Un cubreobjetos.
-Lanceta para punción digital.
-Torundas de algodón.
-Guantes y bata.
-Una cubeta forrada en aluminio para mantener el portaobjetos con el que trabajamos.
-Microscopio de laboratorio.
-Alcohol 70o.
-Tinción con colorante Giemsa (formado por una mezcla de eosina, azul metileno y azures en
solución acuosa).
-Alcohol metílico absoluto (sin acetona)
-Tampón de PBS
-Agua destilada
Causas de error en la tinción del frotis sanguíneo:
-Coloración excesivamente azul: Frotis muy grueso, lavado insuficiente, Tinción muy prolongada,
colorante demasiado alcalino.
-Coloración muy rosada: El agua del lavado, el colorante o el tampón demasiado ácidos.
-Aparición de artefactos debido a suciedad, deterioro o presencia de grasa en portaobjetos.
-Hidratación de los hematíes: Fijación inadecuada por uso de alcohol metílico no absoluto.
Metodología:
1. Preparamos el material que vamos a utilizar y nos colocamos los guantes.
2. Procedemos a desinfectar el dedo del cual extraeremos el frotis sanguíneo (por lo general el dedo
índice o el anular).
3. Pinchamos con lanceta en el pulpejo del dedo, sobre la zona anterior o lateral. Una vez hecho,
apretamos el dedo para bombear sangre hacía afuera. Una vez se haya formado una gota la
acercamos al portaobjetos poco a poco hasta que pase a éste.
4. Limpiaremos el dedo y pondremos una tirita, tiraremos las lancetas y torundas utilizadas al
contenedor de residuos biológicos.
5. Realizamos la extensión del frotis sanguíneo:
Tras realizar la extensión, se obtienen tres partes de la muestra:
- Cabeza (con demasiados eritrocitos).
- Cuerpo (zona óptima para la observación, existe un reparto equilibrado de células).
- Cola (eritrocitos en escaso número).
6. Tras dejar secar el frotis durante un par de minutos, aplicaremos el metanol sobre la muestra que
actuará como fijador, lo dejamos reposar durante tres minutos
7. Teñimos la muestra con el colorante Giemsa (diluido con PBS en proporción 1G:9PBS). Las partes
ácidas de la muestra (como por ejemplo el DNA del núcleo) se teñirán de un color azulado mientras
que las básicas se teñirán de un color rosado.
8. Limpiamos la muestra con agua destilada para sacar el colorante tras haberlo dejado sobre la
muestra unos diez minutos.
9. Aplicamos el cubreobjetos sobre el cuerpo del frotis, ya está listo para la visualización en el
microscopio.