obtención de un frotis sanguíneo y tinción de giemsa

PRÁCTICA 2: OBTENCIÓN DE UN FROTIS SANGUÍNEO Y TINCIÓN
DE GIEMSA
Materiales:
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Frotis Sanguíneo:
- 2 portaobjetos.
- 1 cubreobjetos.
- Gasas estériles.
- Lanceta.
- Alcohol metílico absoluto (libre de acetona).
- Alcohol de 70º
- (Guantes)
Tinción de Giemsa:
- Colorante de Giemsa.
- Tampón PBS.
- Pipeta Pasteur.
- Cubeta.
- Agua destilada.
- Tubo de ensayo.
Obtención de un frotis sanguíneo:
1. Obtención de la muestra (sangre capilar). Con la lanceta realizar un pequeño corte en
la yema del dedo índice o corazón previamente desinfectado con alcohol de 70º.
2. Desechar la primera gota.
3. Depositar una gota en el extremo de un portaobjetos y colocarlo encima de la mesa.
4. Proceder a tapar el dedo pinchado y desechar la lanceta en un contenedor de
residuos.
5. Realizar la extensión de la muestra. Colocar el segundo portaobjetos por delante de la
muestra (que se encuentra en el primer portaobjetos colocado encima de la mesa),
con una inclinación de 45º respecto al que contiene la muestra. Primero se procederá
a un deslizamiento hacia el extremo donde se encuentra la gota de sangre. De esta
forma se consigue que por capilaridad, la sangre ocupe toda el borde del segundo
portaobjetos. Seguidamente se procederá a la extensión en sentido contrario de forma
rápida y uniforme.
6. Dejar secar al aire.
7. Etiquetar el portaobjetos.
Si el frotis está bien realizado deberemos observar tres partes: la cabeza, el cuerpo y la cola
(forma de pluma). Es en el cuerpo realizaremos la observación y el estudio.
Fuente de la imagen: http://html.rincondelvago.com/000759832.png
Tinción de Giemsa:
1. Fijar el frotis con alcohol metílico absoluto durante 3 minutos.
2. Preparar en un tubo de ensayo una solución con una proporción de 1:9 con Giemsa y
tampón PBS (1ml Giemsa y 9 ml PBS).
3. Sumergir la muestra de forma vertical en
la solución preparada durante 10
minutos.
4. Lavar el portaobjetos con agua destilada.
5. Dejar secar.
6. Aplicar el cubreobjetos sobre la
preparación.
7. Listo para su observación en el
microscopio.
La tinción de Giemsa es un método habitual para el examen de frotis sanguíneos, cortes
histológicos y otro tipo de muestras biológicas. Es muy útil para la identificación de riketsias
(plasmodium), protozoos…
La técnica de Giemsa está formada por varios colorantes: los tintes neutros utilizados
combinan el azul de metileno como tinte básico y la eosina como tinte ácido, lo que da una
amplia gama de colores. El azul de metileno es un colorante metacromático, de ahí que
muchas estructuras se tiñan de púrpura y no de azul. El pH de la solución de coloración es
crítico, entre 6.4 y 6.9 por lo que se debe ajustar idealmente según diversos fijadores.
¿Cómo vemos las células con esta tinción?
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Citoplasma: rosa
Núcleos: azul
Eritrocitos: rojo
Gránulos de las células cebadas: violeta
Bacterias: azul
Parásitos: azul