IA-MBA-PT-015 Recuento Total de Hongos y Levaduras

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Recuento Total de Hongos y Levaduras
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1. Objetivo
Disponer de un método para realizar un recuento total de hongos y levaduras.
2. Alcance
Para aplicar en muestras de alimentos.
3. Responsabilidad y autoridad
Jefe de Sección: debe velar por el cumplimiento de las normas establecidas en este procedimiento.
Analistas de laboratorio: deben realizar el ensayo según lo descrito en este procedimiento.
4. Definiciones
No aplica
5. Abreviaturas y/o Siglas
ufc: unidad formadora de colonia
6. Referencias y/o Bibliografía
AOAC Official Method 997.02: Yeast and Mold Counts in Foods, Dry Rehydratable Film Method (Petrifilm
for Yeast and Molds)
Instrucciones 3M Petrifilm Recuento Hongos y Levaduras
IA-MBA-PE-009-RE- 008 Hoja de trabajo
7. Descripción del procedimiento
7.1 Fundamento Teórico
Diluciones seriadas de la muestra son sembradas en las placas Petrifilm hongos y levaduras, que es un
medio de cultivo deshidratado listo para usar, el cual tiene elementos nutritivos con suplemento de
antibióticos, un agente gelificante soluble en agua y un indicador que facilita el recuento.
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7.2 Equipo, materiales y medios de cultivo
7.2.1 Equipo
Incubadora 22 °C ± 1 °C
Balanza sensibilidad ± 0,1 g
Contador de Colonias Quebec
Stomacher
Vortex
7.2.2 Materiales
Bolsas plásticas para stomacher 7 ½ x 11 ¾ pulg (ancho x largo) con cierre de alambre
Pipetas estériles de 1 ml o 2 ml
Esparcidor de Petrifilm
7.2.3 Medios de cultivo
Placas de Petrifilm 3M para recuento hongos y levaduras
Buffer Butterfield
7.3 Procedimiento
7.3.1
En una bolsa de stomacher estéril, pesar 25 gramos de la muestra.
7.3.2
Agregar 225 ml de buffer Butterfield para realizar una dilución 1/10 (10 -1)
7.3.3
Homogenizar en stomacher por 2 minutos.
7.3.4
Hacer diluciones seriadas de la muestra, tomar 1 ml de dilución 10 -1 y agregar a un tubo de 9 ml
de buffer Butterfield para obtener una dilución 10-2, realizar así sucesivamente dilución hasta 10-3
(esto según el tipo de alimento )
7.3.5
A partir de las diluciones anteriores y sin pasarse de los 3 minutos después de la agitación,
sembrar placas de Petrifilm Recuento Hongos y Levaduras rotuladas con la identificación de la
muestra, dilución y la fecha del análisis.
7.3.6
Poner las placas en una superficie plana y lisa. Levantar la lámina superior y colocar 1 ml de la
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dilución en el centro de la placa de Petrifilm sin hacer burbujas, tocar suavemente la superficie de
la placa con la pipeta para depositar la última gota. Dejar caer la lámina superior suavemente
7.3.7
Colocar el esparcidor en el centro de la placa y presionar suavemente para distribuir la muestra de
manera uniforme. Esperar por 1 minuto para permitir que solidifique el gel.
7.3.8
Dentro de los 10 minutos posteriores a la inoculación de las placas, incubar en posición horizontal
con el lado transparente hacia arriba; de 20 °C a 25 °C durante 5 días. Se puede colocar hasta 20
placas de Petrifilm una sobre otra.
7.3.9
Haciendo uso del Contador Quebec, contar las colonias independientemente de su tamaño, el
color es variable, tener en cuenta las siguientes consideraciones:
-
el rango contable es de 10 ufc a 150 ufc,
-
Si el conteo de colonias es menor de 10 en todas las diluciones, registre el conteo en la
dilución menor.
-
Si las placas no muestran colonias reportar como menos de 1 X 101 ufc/ g o ml
-
Si el conteo de colonias en las placas de todas las diluciones es mayor de 150 ufc puede
realizar estimaciones contando el número de colonias en uno o más cuadros representativos
y obtener el promedio, multiplicar dicho número por 30 (ya que el área de crecimiento de la
placa es de 30 cm2) para obtener el recuento total por placa.
-
Si se observa un área de crecimiento azul en toda la placa indica que a la muestra debe de
realizarse más diluciones.
NOTA:
a) Durante el pipeteo se debe ajustar el volumen poniendo la punta de la pipeta en contacto con
la pared del contenedor y no dentro de la muestra.
b) La pipeta se debe insertar no más de 2,5 cm dentro de la muestra.
c) Se debe agitar los tubos en vortex por 15 segundos antes de hacer cada dilución y antes de
tomar la alícuota para realizar el análisis.
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7.4 Reporte de resultados
7.4.1 El resultado obtenido y los cálculos realizados se registran en el formulario IA-MBA-PE-009-RE- 008
Hoja de trabajo.
7.4.2 Si el conteo es entre 10 y 150, reportar el número de colonias contadas por mililitro o gramo por el
recíproco de la dilución; reportar con dos cifras significativas.
8. Anexos
No aplica
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